Глава 3

Безопасность применения эндогенных биорегуляторов

Широкое применение биорегуляторов животного происхож­дения в медицинской практике выдвигает особые требова­ния к качеству и безопасности препаратов, поскольку сы­рье, используемое для производства данного класса препа­ратов, потенциально может содержать в себе компоненты, неблагоприятно воздействующие на организм человека. В связи с этим большое значение приобретает проблема раз­работки технологий, позволяющих гарантировать безопас­ность применения препаратов, основанных на переработке животного сырья [Зуев В. А. и соавт., 1999; Gajdusek D. С., 1996; Prusiner S. В., 1996; Weisman Ch., 1996].

Для производства цитаминов используется только оте­чественный скот — телята и свиньи не старше 12-месячного возраста из хозяйств, не регистрировавших инфекционных заболеваний, опасных для человека, в том числе трансмис­сивной губкообразной энцефалопатии крупного рогатого скота, в строгом соответствии с требованиями, предъявля­емыми к животному сырью для производства биологиче­ски активных добавок к пище в СанПиН 2.3.2.1078-01. Сле­дует отметить, что на территории Российской Федерации наблюдается эпизоотологическое и эпидемиологическое благополучие в отношении прионных заболеваний.

Технология производства цитаминов предусматрива­ет щелочной гидролиз клеток ткани, последующее осаж­дение нуклеопротеиновых комплексов, очистку их от бал­ластных веществ, высушивание полуфабриката и изго­товление готовой формы в виде кишечно-растворимых таблеток или капсул. Процесс выделения активной суб­станции из органов и тканей животных проводится при температуре от 3 до 7 "С и рН 11,0 в течение 6 дней. Эти условия достаточны для полной инактивации всех мик­робов и вирусов [Ленинджер А., 1974; Мазин А. В. и соавт., 1990]. Таким образом, защищенный патентом РФ способ получения цитаминов обеспечивает максимальную защи­ту препаратов от попадания инфекционных агентов.

3.1. Эмбриотоксические и тератогенные свойства

Оценку эмбриотоксических и цитотоксических свойств НПК проводили в культурах до- и постимплантационных зародышей мыши и крысы, развивающихся in vitro, на наиболее чувствительных к действию патогенных факто­ров стадиях эмбриогенеза — дробления зародыша (от мо­мента оплодотворения яйцеклетки до стадии сформирован­ной и подготовленной к имплантации бластоцисты, 1-4-й дни развития) и начальных стадиях органогенеза (со стадии появления головного отростка до стадии с 26-27 парами сомитов). В качестве основного методического приема для выявления потенциальных эмбрио- и цитотоксических свойств испытуемых препаратов использовали многократ­но апробированный при испытаниях мало- и нераствори­мых веществ подход: культуральной средой для культиви­рования зародышей служила сыворотка крови подопыт­ных животных, которым вводили исследуемые препараты [Попов В. Б., 1976, 1985; Попов В. Б. и соавт., 1996].

Анализ развития дробящихся зародышей в среде, со­держащей сыворотку крови животных после введения эффективных концентраций НПК, не выявил патогенно­го действия препаратов. Необходимо отметить, что при культивировании зародышей в среде, содержащей сыво­ротку крови животных после введения последним вент-рамина, вазаламина, просталамина, тимусамина, эпифамина, тесталамина, церебрамина, наблюдалось достовер­ное увеличение общей клеточной массы зародышей к концу культивирования по сравнению с контролем, боль­шее число эмбрионов, освободившихся от блестящей обо­лочки, что свидетельствует о большей жизнеспособности зародышей и стимулирующем эффекте указанных препа­ратов на дробящихся зародышей.

При культивировании зародышей в среде, содержащей сыворотку крови животных после введения им гепатамина бронхаламина, корамина, было выявлено некоторое тор­можение пролиферации клеток: 38% зародышей к концу культивирования не смогли пройти пятое деление дроб­ления (в контроле 30%). Тем не менее, следует отметить значительный потенциал этих клеток: число клеток, на­ходящихся в стадии митоза, в среднем, в 1,7 раза превы­шало этот показатель в контроле.

Анализ темпов дифференциации зародышей, выраженной в формировании компактизированной морулы, появлении бластоцеля, внутренней клеточной массы, трофэктодермы, освобождении бластоцисты от блестящей оболочки, свиде­тельствовал о нормальном развитии зародышей, культиви­руемых в средах, содержащих сыворотку крови животных после введения НПК, не отличающемся от контроля.

При оценке результатов изучения эмбриолетального, тератогенного и индуцирующего торможение ростовых процессов действия цитаминов оказалось, что вентрамин, просталамин, хондрамин, панкрамин, не затрагивая фор­мирования желточной плаценты, достоверно увеличива­ли по сравнению с контролем кранио-каудальный размер, размер головного мозга и белковую массу зародышей. При этом число сформированных пар сомитов, характеризу­ющее стадию развития зародышей, полностью соответ­ствовало его значению в контроле. Это позволяет предпо­ложить, что перечисленные НПК стимулируют эмбрио­нальные ростовые процессы, не оказывая влияния на скорость дифференциации эмбриональных структур. Па­раметры, характеризующие ростовые процессы, при культивировании зародышей с использованием сыворот­ки животных, получавших другие НПК, не отличались от показателей в контроле.

Таким образом, результаты исследования показали, что НПК не обладают эмбриотоксическими и тератогенными свойствами. При этом ряд препаратов (вентрамин, просталамйн, хондрамин, панкрамин, вазаламин, тиму-самин, эпифамин, тесталамин, церебрамин) оказывал стимулирующее действие на эмбриональные ростовые процессы.