9.9. Протозоозы пчел

Нозематоз. Заболевание взрослых пчел, маток и трутней, вызываемое микроспоридией Nosema apis, паразитирующей в эпителиальных клетках средней кишки (рис. 9.5.) .

Рис. 9.5. а – спора, б – спора после инфицирования; Nu - ядро, Ps - трубка, Ka – капсула, оболочка споры

Возбудитель - внутриклеточный паразит Nosema apis (Zander, 1909). Во внешней среде сохраняется в виде спор овальной или яйцевидной формы размером 4,5-7,5х2-3,5 мкм. Оболочка их гладкая, трехслойная толщиной 0,2-0,3 мкм, сильно преломляющая свет, стойкая к окрашиванию. Внутри споры различают поляропласт в виде зонтика, полярную нить, спороплазму с двумя продолговатыми ядрами, вакуоль и полюсную нить в виде спирали. Паразит развивается в организме пчел при температуре в гнезде от 22 до 34°С (оптимальная 31-32°С). Возбудитель не развивается при температуре ниже 22°С и выше 34°С. Споры относительно устойчивы к воздействию факторов внешней среды. В трупах пчел и их фекалиях они могут сохраняться от 4 мес до шести лет, на почве около улья - от 44 дней до 25 мес, на сотах - от 3 мес до двух лет, в запечатанном меде 462 дня, в центрифужном меде при комнатной температуре - от 30 дней до 10 лет, в водопроводной воде при 20°С - до 113 дней. При минусовой температуре споры сохраняются от 24 дней до семи лет. Прямой солнечный свет убивает их за 15-32 ч, текучий пар - за 1-5 мин, при нагревании до 60°С споры погибают за 10 мин, в парах формалина при концентрации 50 мл/м³при 55 °С - за 15 мин, в 4%-ном растворе формалина при 25°С - за 1 ч, в 2%-ном растворе едкого натра при 37°С - за 15 мин, в парах 80%-ной уксусной кислоты из расчета 200 мл на корпус улья с сотами - за 5-7 дней, в парах хлоруксусной кислоты (1 мл/м) при 18°С-за 2 ч; в 10%-ном растворе хлорной извести - за 10-12 ч. Окись этилена обеззараживает споры за 20 мин при 18-20°С и за 45 мин при 4-6 °С.

Патогенность. Восприимчивость к нозематозу у пчел разных пород неодинакова. Более чувствительны к заражению перезимовавшие и весенние популяции пчел. Наоборот, осенние выводки, идущие в зимовку, более устойчивы к заражению, так же как и местные породы по сравнению с завозными пчелами. Считается возможным выведение устойчивых к нозематозу пчел, однако резистентность к заражению у них снижается во II-IV поколениях. При экспериментальном заражении путем скармливания пчелам спор ноземы в концентрации 5-10 млн. в 1 мл сахарного сиропа через 3-4 суток паразит развивается в средней кишке пчел, вызывая патологоморфологические изменения, характерные для данной инвазии. Более устойчивы к заражению нозематозом трутни, затем матки.

Эпизоотологические данные. Болезнь обычно проявляется сезонно, в конце зимовки и весной (февраль-май), приводит к ослаблению и гибели части пчел или всей семьи. Источником возбудителя являются больные и погибшие пчелы, их фекалии, содержащие споры паразита. Внутри улья возбудителя переносят рабочие пчелы. Возбудителем обсеменены ротовые органы, ножки и крылья, споры ноземы находятся на стенках улья, сотах, в меде и перге, их обнаруживают в воде, почве и на растениях.

К возникновению нозематоза предрасполагают недоброкачественный мед с примесью пади, резкие колебания температуры и высокая влажность в улье и зимовнике, беспокойство пчел зимой и длительная зимовка, позднеосенние подкормки пчел сахаром в большом количестве, недостаток перги в гнезде, продолжительная дождливая погода, слабое развитие семей, особенно весной, попадание в корм остатков пестицидов и наличие на пасеках других болезней. Распространяется возбудитель нозематоза блуждающими пчелами, трутнями, насекомыми, живущими в улье, а также при перестановке сотов с одних семей в другие, использовании необеззараженного инвентаря, объединении слабых семей и приобретении пчелиных семей и маток из неблагополучных пасек.

Патогенез. Пчелы заражаются при попадании спор ноземы с кормом в среднюю кишку. Из спор выбрасывается полюсная нить, и выходят зародыши - планонты, которые внедряются в эпителиальные клетки кишечника. В процессе развития и деления нозема проходит стадии премеронта, меронта, споронта, споробласта и превращается в устойчивую форму - спору. Зрелые споры ноземы с фекалиями попадают во внешнюю среду. В результате патологических изменений в средней кишке эпителиальные клетки ее отторгаются, нарушаются процессы пищеварения и всасывания питательных веществ, что приводит к изменению клеточного состава гемолимфы, нарушению функций желез и других органов пчелы (рис. 9.6 и 9.7). Уменьшается размер жирового тела, атрофируются мышцы, масса пчел снижается. У больных маток наблюдается дегенерация яичников. Вследствие разрушения перитрофической мембраны и отторжения эпителия средней кишки в гемолимфу проникает различная микрофлора, что приводит к септицемии.

Рис. 9.6. Изменения в эпителиальных клетках средней кишки у пчел под воздействием ноземы

Рис. 9.7. Выход новых спор ноземы в просвет средней кишки

Признаки и течение болезни. Нозематоз протекает в типичной или скрытой форме. При типичной форме отмечается неблагополучная зимовка пчел, они беспокоятся, издают непрерывный, слегка шуршащий шум, вылетают из улья. У насекомых наблюдается понос, вследствие чего передняя стенка улья, предлетковая доска и соты в гнезде бывают испачканы фекалиями. Отмечаются массовая гибель пчел и ослабление семей. После выставки из помещения пчелы проводят недружный весенний облет, нередко ползают около улья, теряют способность воспитывать расплод, снижают активность по сбору нектара и пыльцы. Весной семьи плохо развиваются, расплод сокращается в 4-8 раз, наблюдается тихая смена маток. Выращенные молодые матки неполноценные, их плохо принимают пчелы и снова заменяют через 2-6 недель. У больных пчел наблюдается увеличение брюшка, трепетание крыльями, они плохо держатся на сотах, падают и погибают. Скрытая форма болезни отмечается в летне-осенний период и обычно в местности с умеренным и холодным климатом во всех зонах Земного шара.

Нозематоз очень часто протекает в ассоциации с другими болезнями, особенно с гнильцовыми и вирусными инфекциями, амебиазом, гафниозом, аскосферозом, аспергиллезом, акарапидозом и др. Исход болезни зависит от состояния пчелиных семей, их резистентности, длительности зимовки, климатических факторов, качества матки и обеспеченности полноценным кормом. При слабом поражении и своевременном лечении сила семей может быть восстановлена к се редине лета и от них может быть получена продукция. В случае сильного поражения пчел нозематозом, кроме лечебно-санитарных мероприятий, для восстановления семей необходимо усиление их расплодом и молодыми пчелами или объединение семей.

Диагноз на нозематоз ставят на основании клинических признаков болезни, результатов микроскопических исследований с учетом эпизоотологических данных. На исследование в ветлабораторию направляют по 50 погибших пчел и фекалии, снятые с сотов и планок рамок больных пчелиных семей. При необходимости в стеклянной посуде направляют пробы меда по 100 г с кусочком сота и не менее 20-25 г перги, извлеченной из сотов.

Пробы меда и перги отбирают и исследуют в конце сезона (июль - август) с целью оценки эффективности проведенных противонозематозных мероприятий, наличия пади в меде и прогнозирования предстоящей зимовки пчелиных семей.

Каждую пробу подмора от больной или подозреваемой в заболевании пчелиной семьи помещают в фарфоровую ступку, добавляют водопроводную воду в соотношении 1:2 и растирают до образования однородной суспензии. Затем на предметное стекло наносят три капли этой взвеси, покрывают их покровными стеклами и исследуют под микроскопом с увеличением 7х40. При положительном результате в поле зрения микроскопа будут видны овальные споры ноземы, сильно преломляющие свет при затемненном поле зрения. В каждой капле просматривают не менее 20 полей зрения микроскопа. Степень поражения пчел спорами ноземы оценивают по трехбалльной системе (табл. 9.1).

Таблица 9.1.

Оценка степени пораженности пчел нозематозом

Количество спор в поле зрения микроскопа	Условные обозначения	Степень пораженности
До 100	+	слабая
До 1000	++	средняя
Свыше 1000	+++	сильная

Для подсчета спор можно использовать камеру Горяева. Слабая степень поражения характеризует начало болезни с поражением единичных пчел или скрытую форму инвазии. При средней степени поражения появляются явные клинические признаки инвазии, наблюдаются гибель пчел и ослабление семей. Сильное поражение возбудителем нозематоза может быть причиной гибели большого количества пчел или всей семьи при неудовлетворительном содержании, скармливание меда с примесью пади или забродившего, а также закристаллизовавшегося. Если нозематоз протекает в ассоциации с другими болезнями, то отмечается тяжелое течение, и гибель семей может быть даже при средней и слабой интенсивности поражения.

При исследовании проб меда к навеске массой 2,1 г (1,5 мл) добавляют 5 мл дистиллированной воды и 10 мл этилового спирта, тщательно размешивают и центрифугируют 5-10 мин при 2500-3000 об./мин. Осадок наносят на предметное стекло, покрывают покровным и микроскопируют не менее чем 40 полей зрения при увеличении 7х40. Приготовленный раствор меда одновременно используют для определения процентного содержания падевых веществ, центрифугируя его в центрифужной пробирке по соответствующей методике.

Для обнаружения спор ноземы в перге навеску массой 250 мг помещают на предметное стекло, добавляют 3-5 капель воды или раствора Люголя, растирают стеклянной палочкой и микроскопируют не менее 40 полей зрения при увеличении 7х40. В случае обсеменения меда и перги в поле зрения микроскопа обнаруживают споры ноземы овальной формы.

Для выявления скрытых форм нозематоза или ранней стадии развития инвазии используют цитологический метод исследований. С этой целью у больных и подозреваемых в заболевании пчел извлекают среднюю кишку и готовят серию препаратов-отпечатков на стерильном предметном стекле. После фиксации препаратов спирт-эфиром в течение 10 мин или метанолом – 3-5 мин их окрашивают азурэозином по Романовскому 15-20 мин и после промывания и высушивания микроскопируют под иммерсионной системой микроскопа. При положительных результатах в окрашенных препаратах-отпечатках в эпителиальных клетках средней кишки обнаруживают нозему на различных стадиях развития, что позволяет проводить раннюю диагностику этого заболевания. С этой же целью используют световой микроскоп или электронную микроскопию ультратонких срезов. Жизнеспособность спор ноземы определяют, окрашивая мазки акридином оранжевым (1:20000-1:250000) в течение 30-60 мин, при этом живые споры светятся желто-зеленым цветом. Можно также ставить биопробу на пчелах.

Меры борьбы. При выявлении нозематоза пасеку объявляют неблагополучной, ограничивают передвижение ее за пределы хозяйства. Проводят раннюю выставку пчелиных семей из зимовника, очищают донья ульев, удаляют загрязненные фекалиями пчел соты, заменяют недоброкачественный корм.

Во время весеннего осмотра семьи пересаживают в продезин­фицированные ульи на сокращенные и хорошо утепленные гнезда. Из старых гнезд в продезинфицированные или новые ульи переносят соты с расплодом, планки которых очищают от загрязнений. Слабые семьи объединяют по две в улей, разделив их фанерной перегородкой. Не допускают охлаждения гнезд при расширении весной и скармливания пчелам меда с рамок от больных семей пчел. Способствуют наращиванию молодых пчел в семьях, своевременно подставляют плодных маток вместо погибших или больных.

Лечение проводят впервые недели после весеннего облета пчел. В качестве лечебных средств используют фумагиллин, сульфадимезин и нозематол, нозедин, ноземат, аскоцин и фитонциды растительного происхождения. При заболевании более 30% семей пчел препараты скармливают всем семьям данной пасеки.

Фумагиллин ДЦГ выпускается во флаконах по 20 г в виде порошка. Содержимое одного флакона растворяют в 100-200 мл теплой (30-35°С) прокипяченной воды, добавляют к 25 л сахарного сиропа (1:1) и хорошо смешивают. Лечебный сироп дают в чистых кормушках или продезинфицированных сотах по 0,25 л на семью ежедневно в течение трех недель или по 0,5 л на семью через 4-5 дней на протяжении 2-3 недель или по 0,15 л сиропа на улочку пчел каждой семьи трижды через 6-7 дней. На одну. Семью пчел расходуют 3-5 л сиропа.

На крупных пасеках фумагиллин можно применять в форме медово-сахарного теста (пасты). Для изготовления 50 кг пасты (канди) 200-300 г (10-15 флаконов) фумагиллина смешивают с 40кг сахарной пудры, добавляют до 10 кг подогретого до 50°С меда и 0,5 л прокипяченной и остывшей до 37°С воды. Канди дают пчелиным семьям трех-, четырехкратно из расчета 100-150 г на одну рамку с пчелами, помещая пасту сверху соторамок под холстик. Ее готовят за 1-3 недели до применения.

Сульфадимезин представляет собой белый кристаллический порошок, слаборастворимый в воде и хорошо в растворах кислот и щелочей. Натриевая соль его растворяется в воде (1:3).

Сульфадимезин скармливают пчелиным семьям с сахарным сиропом (1:1) из расчета 1 г препарата на 1 л сахарного сиропа. Эту дозу предварительно растворяют в 50 мл теплой воды, подкисленной 3-5 каплями уксусной кислоты. Лечебный сироп дают в день приготовления в кормушках (на ночь), 4-5 раз с интервалом 4-5 дней по 100 мл на улочку пчел или по 0,5 л на семью.

Соты с пчелами можно опылять порошком сульфадимезина в дозе 1-2 г препарата в смеси c 20 r сахарной пудры на семью. Обработку проводят с помощью порошковдувателя или стеклянной банки, обвязанной марлей или металлической сеткой, 3-4 раза через 4-5 дней.

Ноземат рекомендуется для лечения и профилактики нозематоза и смешанных бактериальных болезней пчел, выпускается во флаконах по 5 г в виде порошка. Ранней весной препарат применяют до облета пчел - тщательно смешивают с медово-сахарным тестом (канди) из расчета 5 г препарата на 10 кг канди. Лечебный канди скармливают по 0,5 кг на 1 семью пчел силой 6-8 улочек. После весеннего облета препарат применяют с сахарным сиропом из расчета 5 г препарата на 20 л сиропа (1:1). Препарат предварительно растворяют в теплой (30-40°С) кипяченой воде, затем добавляют к охлажденному сиропу при постоянном помешивании. Лечебный сироп скармливают семьям пчел в верхних кормушках по 100 мл на 1 рамку пчел, дважды с интервалом 5-6 дней. Осенью для профилактики нозематоза препарат применяют с сахарным сиропом в тех же дозировках однократно после закормки пчел на зиму. Препарат обеспечивает надежный лечебный эффект при заболеваниях, обусловленных возбудителями нозематоза, а также сопутствующих патогенных и условно - патогенных желудочно - кишечных бактериальных инфекций пчел.

Одновременно с применением лечебных препаратов осуществляют комплекс ветеринарно-санитарных мероприятий и улучшают содержание пчел (обеспечивают доброкачественными кормами, сокращают и утепляют гнезда, подсаживают хороших маток местной породы).

Целесообразно подкармливать пчел сахаром или медом с добавлением экстракта элеутерококка (3-5 мл на 1 л сиропа), настойки или отвара календулы, мяты, полыни и др.

Ульи, потолочные доски, кормушки дезинфицируют горячим 2%-ным раствором щелочи или кальцинированной соды после предварительной механической очистки от фекалиев, остатков воска и прополиса. После промывания водой и просушивания ульи и деревянные предметы обеззараживают огнем паяльной лампы до легкого побурения. Старые соты перетапливают на воск. Пригодные соты дезинфицируют 4%-ным раствором формалина в течение 4 ч, орошая их с обеих сторон, или парами 80%-ной уксусной кислоты или эссенции из расчета 200 мл на улей (12-рамочный), выдерживая в течение трех суток при температуре 16°С. Хорошо действуют пары формалина. Для этого металлический сосуд с отводной резиновой или металлической трубкой, содержащий 100 мл формалина и 300 мл воды, нагревают до образования паров, которые направляют в закрытую камеру (ящик или улей), заполненную сотами. Температуру в камере поддерживают в пределах 50-55°С, контролируя термометром. Соты обезвреживают 30 мин. Мелкий металлический инвентарь кипятят в 3%-ном растворе кальцинированной соды. На крупных пасеках и фермах для дезинфекции сотов и других предметов применяют газообразные вещества (окись этилена с бромистым метилом) под полиамидной пленкой ПК-4 в соответствии с действующей инструкцией.

Пасеку объявляют благополучной по нозематозу при отсутствии у пчел клинических признаков болезни весной следующего года и после проведения тщательной очистки и заключительной дезинфекции на пасеке.

Профилактика. На зимовку в гнездах оставляют доброкачественный мед. При обнаружении в кормовых запасах падевого меда его удаляют и заменяют цветочным медом или сахарным сиропом. Проводят осеннее наращивание молодых пчел в семьях. На пасеке содержат сильные пчелиные семьи с качественными матками не старше двух лет. Зимой семьи пчел содержат в сухих, хорошо вентилируемых зимовниках. Весной после выставки пчел гнезда сокращают и утепляют. Сор и трупы насекомых сжигают.

При неблагополучной зимовке пчелиных семей (выползании пчел из ульев и гибели их на полу помещения или на снегу около улья) срочно уточняют причины заболевания, исследуют погибших пчел и оказывают необходимую помощь, при возможности проводят сверхранний облет или выставку. Мед из неблагополучных по нозематозу пасек используют только для пищевых целей, воск обеззараживают.

Амебиаз. Болезнь взрослых пчел, вызываемая простейшими Malpighamoeba mellificae Prell, паразитирующими в мальпигиевых сосудах насекомых. Размер стойкой стадии (цисты): 5-7/1000 мм в диаметре (рис. 9.8).

Рис. 9.8. а – спора, б – подвижная амеба CH - оболочка цисты, NU - ядро клетки

Инфицирование и размножение возбудителя. Как и при нозематозе стойкая стадия возбудителя (циста) попадает в организм рабочей пчелы через ротовое отверстие, например, при очистке сотов от остатков испражнений, с кормом или с водой из загрязненной испражнениями поилки. Циста через переднюю кишку попадает в среднюю и заднюю кишку пчелы. Здесь из-под оболочки цисты наружу выходит подвижная амеба, которая пробирается в мальпигиевые сосуды. Там амеба размножается делением и превращается в цисту. С испражнениями цисты выходят из пчелы и попадают на соты (рис 9.9).

Часто протекает совместно с другими болезнями. Проявляется спорадически в конце зимы и весной, характеризуется расстройством кишечника, ослаблением и гибелью семей. Пчелы часто погибают во время полета. Заражение происходит при очистке сотов в семье и при использовании водных источников, загрязненных погибшими от амебиаза пчелами.

Рис. 9.9. Инфицирование и размножение возбудителя

Диагноз ставят на основании признаков болезни и лабораторных исследований мальпигиевых сосудов и их содержимого. Меры борьбы с амебиазом основаны на соблюдении ветеринарно-санитарных правил содержания пчел, обеспечении их доброкачественными кормами и водой. Профилактика и меры борьбы такие же, как при нозематозе.

Грегариноз – заболевание взрослых особей пчелиной семьи, вызываемое простейшими из класса споровиков – грегаринами (Gregarina) (рис. 9.10).

Пчелы заражаются грегаринозом чаще при питье воды, загрязненной спорами возбудителя болезни. Содержатся споры грегарин в экскрементах больных пчел и их паразитов. Попав в кишечник пчелы, споры грегарин развиваются в передней трети средней кишки до возрослой формы, питаясь углеводами эпителиальных клеток и содержимого кишечника.

Характерные признаки заболевания. Проявляется болезнь летом в дождливую погоду. При этом больные семьи заметно слабеют. Здоровые пчелы выбрасывают больных из улья и не пускают их обратно в улей. Пчелы гибнут обычно вне пасеки, чаще по берегам водоемов. У пораженных пчел наблюдается сильное разрушение эпителиальных клеток. Средняя кишка приобретает бледно-желтый, а позднее серовато-белый цвет. Трупы пчел быстро разрушаются.

Рис. 9.10. Грегарина Gregarina blattarum. Два гамонта, соединенные в сизигий 1 – протомерит; 2 – дейтомерит; 3 - ядро

Диагноз устанавливают на основании микроскопических исследований суспензии, приготовленной из содержимого и соскребов эпителия средней кишки.

Для установления диагноза в лабораторию направляют 15-20 больных или погибших около водоемов пчел.

Меры борьбы заключаются в соблюдении правил ветеринарно-санитарного содержания пчелиных семей. Больным семьям дают сахарный сироп с содержанием 0,4% фумагиллина ДЦГ. Лечебный сироп скармливают так же, как и при нозематозе.

Лептомоноз – заболевание взрослых особей пчелиной семьи, вызываемое одноклеточным паразитом лептомоной. Лептомоны паразитируют в кишечнике особей пчелиной семьи, питаясь содержимым его эпителиальных клеток.

Характерные признаки заболевания. Болезнь регистрируется в весенне-летний период. Клинические ее признаки нехарактерны. У больных пчел отмечается расстройство кишечника. При вскрытии инвазированных особей пчелиной семьи на эпителии их тонкой и прямой кишок можно наблюдать очаги скоплений желтоватого цвета.

Диагноз. Лептомоны обнаруживаются при микроскопировании суспензии, приготовленной из тонкой и прямой отделов кишки. Для установления диагноза в лабораторию направляют 20-30 живых пчел. Меры борьбы с лептомонозом те же, что и при грегаринозе.

Критидиоз – заболевание взрослых особей пчелиной семьи, вызываемое простейшими-критидиями. Заражение происходит при очистке пчелами сотов и при потреблении ими зараженной критидиями пыльцы. Паразит локализуется в тонкой и прямой кишках, находится там в свободном состоянии или прикрепленным к эпителию. При сильном поражении в местах скопления паразита происходит проникновение в клетки кишечника и гемолимфу болезнетворной микрофлоры, которая и вызывает гибель пчел.

Характерные признаки заболевания. Заболевание отмечается в весенне-летний период. При этом пчелиные семьи заметно слабеют, стенки их ульев и соты гнезда испачканы экскрементами. При вскрытии трупов больных пчел на внутренних стенках тонкой и толстой кишок могут обнаруживаться округлые желтые или охряно-желтые наложения в форме розеток.

Диагноз устанавливают на основании микроскопических исследований суспензии тонкого и заднего отделов кишечника.

Для обнаружения паразита и уточнения диагноза в лабораторию направляют 20-30 больных пчел.

Меры борьбы. Проводят общие ветеринарно-санитарные мероприятия. Больным семтям дают по 0,5 г сульфагуанидина в 1 л 50%-ного сахарного сиропа (1 л на семью в течение 2 дней). Курс лечения повторяется трижды с интервалом 5-7 суток.

Гаплоспоридоз – заболевание взрослых пчел, вызываемое простейшим – нефридиофагом апис (Nephridiophaga apis lvanis, 1937). Попадая в кишечник пчелы, споры паразита делятся с образованием мельчайших округлых новообразований. Последние проникают в эпителииальные клетки мальпигиевых сосудов, где они проходят стадии превращений с образованием новых спор, которые выбрасываются с калом в окружающую среду. При этом клетки мальпигиевых сосудов разрушаются до аморфной массы с последующей гибелью больных особей пчелиной семьи.

Диагноз устанавливают на основании микроскопических исследований мальпигиевых сосудв с идентифицированием паразита.

Меры борьбы. Строгое соблюдение ветеринарно-санитарных правил содержания пчел.

Ключевые слова термины: грегариноз, нозематоз, амебиаз, лептомоноз, критидиоз, гаплоспоридоз, споры, кишечник, пчелы, циста, эпителий.

Вопросы для повторения и задания:

1. Каковы признаки заболевания нозематозом? Расскажите о способах лечения этого заболевания.

2. Назовите циклы развития нозематоза.

3. Каковы признаки заболевания амебиазом? Назовите циклы заболевания амебиазом и меры борьбы.

4. Что называется грегаринозом? Назовите характерные признаки заболевания и меры борьбы.

5. Что называется лептомонозом? Назовите отличительные особенности заболевания и способы лечения.

6. Назовите отличительные особенности критидиоза и гаплоспоридоза.

Объясните значение следующих терминов и слов: нозематоз, амебиоз, споры, грегариноз, лептомоноз, критидиоз, гаплоспоридоз.