Все! Спасибо за работу! Занятие 12 (3.2) Физиология эритроцитов. Гемоглобин
? Экзаменационный вопрос по теме занятия
1. Эритроциты, их функция. Виды гемоглобина, его соединения, их физиологическое значение. Клинико-физиологическая оценка эритроцитов, гемоглобина. Цветовой показатель. СОЭ. ОРЭ. Гемолиз.
Материалы для самостоятельной подготовки
Основная литература:
Физиология человека: Учебник / В двух томах. Т. 1 / В.М. Покровский, Г.Ф. Коротько, В.И. Кобрин и др. / под ред. В.М. Покровского, Г.Ф. Коротько. – М.: Медицина, 2001. – глава 6, раздел 6.2, п/раздел 6.21. – С. 285-292.
Дополнительная литература:
Физиология человека / под. ред. Г.И. Косицкого. – 3-е изд., перераб. и доп. – М.: Медицина, 1985. – С. 229-232.
Орлов Р.С., Ноздрачев А.Д. Нормальная физиология: учебник. – ГЭОТАР-Медиа, 2005. – С. 536-548.
Коробков А.В., Чеснокова С.А. Атлас по нормальной физиологии: пособие для студ. мед. и биол. спец. вузов / под ред. Н.А. Агаджаняна. – М.: Высш. шк., 1987. – С.9-37.
Киселев В.И. Основы физиологии возбудимых тканей. Физиология крови: учебное пособие. – Барнаул: Концепт, 2007. – Часть 2. С 197-206.
Киселев В.И. Общая и частная физиология: учебное пособие. – Барнаул: Параграф, 2007. – С. 109-113.
Основы оценки функций организма человека / Киселев В.И., Шахматов И.И., Шарапова П.Х. и др. // учебное пособие под ред. В.И. Киселёва. – Барнаул: Параграф, 2006. – С. 11-23, С 51-58, С. 67-85.
Шарапова П.Х., Лобанов Ю.Ф., Шахматов И.И., Киселев В.И. Физиологические особенности детей разного возраста: учебное пособие для студентов педиатрического факультета. – Барнаул: Изд-во ГОУ ВПО АГМУ, 2008. – С. 52-56.
Конспект лекции «Эритроциты. Гемоглобин».
Убедительная просьба приносить на занятия по физиологии крови резиновые перчатки
Практические работы
Внимание! Экзаменационный навык
Работа 1. Подсчет эритроцитов крови в камере Горяева
Ход работы – см. «Основы оценки функций организма человека», С. 11-12.
Внимание! Экзаменационный навык.
Работа 2. Определение количества гемоглобина крови по методу Сали (колориметрический метод)
Ход работы – см. «Основы оценки функций организма человека», С. 13-14.
Внимание! Экзаменационный навык
Работа 3. Определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ) по методу Панченкова
Ход работы – см. «Основы оценки функций организма человека», С. 12-13, 56-57.
Работа 4. Вычисление цветового показателя ( см. также «Основы оценки функций организма человека», С. 55-56).
Учебно-исследовательская цель:
1) научиться рассчитывать цветовой показатель;
2) выявить зависимость насыщения эритроцитов гемоглобином от количества эритроцитов и содержания гемоглобина.
Ход работы. Цветовой показатель (ЦП) рассчитывается по формуле:
В норме ЦП составляет 0,9-1,1.
Результаты: …
Вывод: …
Работа 5. Определение осмотической резистенстности эритроцитов (ОРЭ)
Наиболее простым и распространенным в клинике методом оценки физико-химических свойств эритроцитов является исследование их осмотической резистентности (устойчивости). Метод основан на количественном определении степени гемолиза эритроцитов в гипотонических растворах хлорида натрия, в которых, как известно, происходит их набухание и гемолиз. Осмотическая резистентность эритроцитов отражает стабильность их клеточных мембран и зависит от степени их зрелости, формы и изменения состава плазмы.
В изотоническом растворе (0,9% NаСl) эритроциты сохраняют свой объем, а в гипертоническом растворе теряют воду и сморщиваются – такое явление называется «плазмолиз». В гипотоническом растворе они поглощают воду, их объем увеличивается до определенного «критического» уровня, превышение которого сопровождается гемолизом и выходом гемоглобина в плазму крови.
Минимальную осмотическую резистентность эритроцитов (ОРЭ min) определяют по гипотоническому раствору хлористого натрия такой концентрации, которая предшествует началу гемолиза наименее устойчивых эритроцитов (в норме 0,46–0,48% раствора NаCl). Максимальная осмотическая резистентность эритроцитов (ОРЭ mах) соответствует раствору хлористого натрия, предшествующему полному гемолизу всех эритроцитов (в норме 0,32–0,34% раствора NaCl).
Выполнение методики
Предварительно готовят рабочие растворы натрия хлорида различной концентрации: 1%; 0,85%; 0,75%; 0,70%; 0,65%; 0,60%; 0,55%; 0,48%; 0,46%; 0,40%; 0,34%; 0,32%; 0,20% и 0,10%. Рабочие растворы натрия хлорида разливают в 14 центрифужных пробирок (по 5,0 мл).
В пробирку с гепарином берут 1,5 мл венозной крови, перемешивают и добавляют в каждую из 14 центрифужных пробирок с рабочими растворами натрия хлорида по 0,02 мл гепаринизированной крови. Пробирки оставляют на 1 ч при комнатной температуре, а затем центрифугируют (5 мин при 2000 об./мин). Надосадочную жидкость из каждой пробирки исследуют на фотоэлектроколориметре. В качестве «холостой» пробы используют надосадочную жидкость из пробирки, содержащей 1% раствор натрия хлорида. Определяют процент (степень) гемолиза, приняв за 100% гемолиз в пробирке с 0,1% раствором натрия хлорида.
Гемолиз можно определять и визуально по цвету надосадочной жидкости. При полном гемолизе эритроцитов заметна интенсивная красно-лаковая окраска надосадочной жидкости, тогда как начало гемолиза (минимальная его степень) определяется по легкому порозовению.
Интерпретация результатов
В норме начало гемолиза отмечают при концентрации 0,46–0,48%, а полный гемолиз – при 0,32–0,34% растворе натрия хлорида (рис. А). При некоторых гемолитических анемиях (врожденной микросфероцитарной, аутоиммунной гемолитической и др.) наблюдается понижение осмотической резистентности: гемолиз начинается при концентрации раствора натрия хлорида 0,55–0,70% и заканчивается при концентрации 0,40–0,45% (рис. Б).
Более осмотически стойкими являются эритроциты, поступившие в кровоток из костного мозга, в особенности менее зрелые клетки (ретикулоциты, полихроматофилы), которые имеют уплощенную дисковидную форму и малый индекс сферичности. Мене стойкими являются эритроциты, завершающие жизненный цикл.
Нарушение осмотической резистентности является частым следствием стрессов, неблагоприятной экологической ситуации, интоксикаций и расценивается как важное звено патогенеза, а иногда и этиологический фактор многих болезней (механическая желтуха, талласемия, гемоглобиноз, рак желудка, кровопотеря, гипотиреоз) (см. табл.).
Таблица