Добавил:
Sekretar
kiopkiopkiop18@yandex.ru
t.me/Prokururor I Вовсе не секретарь, но почту проверяю
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Ординатура / Хирургия / Библиотека им академика М.И. Перельмана / Книга_5555_Библиотеки_им_академика_М_И_Перельмана
.pdf
6. Молекулярные механизмы внутриклеточной сигнализации в нервной ткани 151
Рис. 6.27 — Механизм трансдукции сигнала из цитоплазмы в ядро клетки
(приводится по: Squire et al., 2003).
Связывание нейромедиатора (первичного мессенджера) с рецептором при-
водит к активации G-белков и системы вторичных мессенджеров (Са
2+
, ДАГ,
цАМФ). Далее вторичные мессенджеры активируют протеинкиназы, которые
затем транслоцируются в ядро. В ядре протеинкиназы активируют конститутив-
но синтезируемые факторы транскрипции. Часть активируемых при этом генов
кодирует дополнительные факторы транскрипции (третичные мессенджеры—
c-fos, fosB, c-jun, junB), которые затем также активируют экспрессию подкон-
трольных им генов.
152 О. Л. Кундупьян, А. С. Фомина, М. Ю. Бибов. Основы нейробиологии
В то же время CREB может фосфорилироваться по остатку Ser-133 при участии
Ca
2+
-кальмодулин-зависимых протеинкиназ II и IV, а также при участии протеинки-
назы RSK2, которая принимает участие в Ras- и МАПК-зависимых сигнальных ме-
ханизмах, активируемых факторами роста. В тех случаях, когда каждый из посту-
пающих сигналов в отдельности может иметь низкую активность, конвергенция
сигнальных каскадов может представлять собой чрезвычайно важный механизм,
определяющий специфичность регуляции
экспрессии генов, в результате чего не-
которые гены могут быть активированы только в том случае, когда имеет место
одновременная активация нескольких сигнальных путей. Помимо фосфорилиро-
вания по остатку Ser-133, CREB может также подвергаться фосфорилированию по
другим остаткам Ser и Thr при участии других протеинкиназ, таких как, например,
киназа гликогенсинтазы 3 (GSK3), что определяет участие данного транскрипцион-
ного фактора в регуляции углеводного обмена, отраженное в его названии.
Фактор транскрипции CREB является представителем большого семейства
родственных белков. Одними из таких белков являются белки-активаторы транс-
крипционных факторов (ATF), а также белки-модуляторы CRE (CREM), которые
синтезируются в результате альтернативного сплайсинга первичного транскрип-
та общего гена CREM. Все эти белки связываются с CRE в форме димеров; многие
могут также образовывать комплексы с CREB. Белок ATF-1 имеет большое сход-
ство с CREB и также может активироваться как цАМФ-, так и Са
2+
-зависимыми
сигнальными механизмами. Многие белки семейства ATF и CREM являются
активаторами транскрипции, однако некоторые из них, напротив, выступают в
роли репрессоров экспрессии генов. Как правило, у таких репрессорных форм
CREM отсутствует домен, отвечающий за активацию транскрипции (богатый
остатками Gln, характерный для белков семейства CREM-ATF, активирующих
транскрипцию). В результате этого димеры CREB-CREM сохраняют способность
связываться с ДНК, но не могут активировать транскрипцию. Многие белки ATF,
подобно CREB, синтезируются конститутивно, однако белок ATF-3, а также некото-
рые изоформы CREM являются индуцибельными. Таким образом, индукция син-
теза новых факторов транскрипции также представляет собой еще один способ
регуляции генетической экспрессии.
Домен, ответственный за димеризацию в белках CREB-ATF, а также присут-
ствующий у некоторых других транскрипционных факторов, представляет собой
«лейциновую молнию». Этот домен был впервые обнаружен в транскрипционном
факторе С/ЕВР; он также присутствует в составе транскрипционных факторов се-
мейства АР-1. Лейциновая молния представляет собой двуспиральный участок.
Участок, отвечающий за димеризацию,— это α-спираль, в которой каждый седь-
мой остаток представлен Leu. Периодичность α-спирали такова, что остатки Leu
выстраиваются вдоль одной из ее сторон на расстоянии двух оборотов спирали
друг от друга. Между остатками Leu, встроенными таким образом в первичную
структуру двух субъединиц, участвующих в образовании димера, возникают гидро-
фобные взаимодействия, стабилизирующие димер. В белках семейств CREB, C/EBP
6. Молекулярные механизмы внутриклеточной сигнализации в нервной ткани 153
и AP-1 домен лейциновой молнии расположен в С-концевой части молекулы. Выше
лейциновой молнии располагается участок, богатый остатками основных амино-
кислот, который образует ДНК-связывающий домен. Димеризация при помощи
домена, содержащего лейциновую молнию, приводит к тому, что прилегающие к
ней основные участки обеих субъединиц оказываются ориентированными друг
напротив друга и участвуют в
связывании ДНК, претерпевая при этом конформа-
ционные изменения. Характер взаимодействия таких белков с ДНК получил назва-
ние «захвата ножницами», а данная группа белков известна как белки с основной
лейциновой молнией (bZIP, от англ. basic leucine zipper proteins).
6.11.3. Транскрипционные факторы семейства AP-1
Активаторные белки 1 (AP-1) представляют собой еще одно семейство фак-
торов транскрипции типа bZIP, играющее центральную роль в регуляции экс-
прессии генов при воздействии внешних сигналов в нервной ткани. Семейство
AP-1 включает в себя большое количество белков, которые связываются с ДНК
чаще всего в форме гетеродимеров и иногда в форме гомодимеров. Связывание
происходит с консенсусной последовательностью TGACTCA, которая образует
палиндром, фланкирующий центральный остаток С или G. Несмотря на то, что
последовательность сайта связывания AP-1 отличается от CRE только на одно
азотистое основание, это на первый взгляд незначительное отличие существен-
но отличает характер связывания с ДНК белков AP-1 от белков семейства CREB.
Установлено, что факторы транскрипции AP-1 участвуют в трансдукции сигна-
лов, поступающих от путей, в которых участвует ПКС.
Белки AP-1 обычно связываются с ДНК в форме гетеродимеров, состоящих из
субъединиц двух типов: семейства Fos и семейства Jun, каждое из которых пред-
ставлено белками семейства bZIP. В настоящее время наиболее хорошо изуче ны
такие представители семейства Fos, как c-Fos, Fra-1 (Fos-related antigen-1), Fra-2 и
FosB. Кроме того, известны также несколько разновидностей посттрансляцион-
ных модификаций FosB. Наиболее хорошо изученными представителями семей-
ства Jun являются белки c-Jun, JunB и JunD. Субъединицы различных предста-
вителей семейств Fos и Jun образуют между собой гетеродимеры при помощи
лейциновой молнии. В отличие от белков Fos, белки c-Jun и JunD (но не JunB)
могут образовывать гомодимеры, которые также способны связываться с AP-1-
сайтами, хотя и с меньшим сродством по сравнению с гетеродимерами Fos-Jun.
Сложность данного механизма регуляции транскрипции дополняется еще и тем,
что некоторые белки AP-1 могут образовывать гетеродимеры по принципу лей-
циновых молний с представителями семейства CREB-ATF, такие как, например,
комплекс белка ATF2 и c-Jun (рис.6.28). Белки AP-1 могут также образовывать
комплексы более высокого порядка с факторами транскрипции других семейств,
не имеющих близкого родства с белками bZIP. Кроме того, белки AP-1 способны
связываться с рецепторами стероидных гормонов, подавляя таким образом ин-
дуцируемую ими транскрипционную активность.
154 О. Л. Кундупьян, А. С. Фомина, М. Ю. Бибов. Основы нейробиологии
Рис. 6.28 — Механизм трансдукции сигнала при участии факторов
транскрипции AP-1, Fos и Jun.
Среди всех известных белков семейства Fos и Jun, только JunD экспрессиру-
ется конститутивно на высоком уровне во многих типах клеток. Остальные белки
семейства AP-1 в состоянии покоя синтезируются на очень низком или вообще
не определяемом известными методами уровне. Однако при поступлении к клет-
ке соответствующих сигналов уровень их экспрессии существенно возрастает.
Это указывает на то, что в отличие от генов, регулируемых факторами транскрип-
ции типа CREB, которые экспрессируются конститутивно, гены, находящиеся под
контролем димеров c-Fos— c-Jun, требуют для регуляции своей экспрессии син-
теза новых транскрипционных факторов.
6.11.4. Гены немедленного раннего ответа
Гены, экспрессия которых активируется в ответ на действие нейромедиа-
торов, фармакологических агентов и факторов роста, принято подразделять на
две группы. Гены, такие как ген c-fos, активация экспрессии которых происходит
быстро (в течение минут) и не требует синтеза новых белков, относят к группе
так называемых генов немедленного раннего ответа (IEG, от англ. immediate early
genes). Гены, индукция или репрессия которых происходит медленнее (в течение
часов) и требует синтеза новых белков, относятся к группе генов позднего ответа.
6. Молекулярные механизмы внутриклеточной сигнализации в нервной ткани 155
Термин IEG был впервые введен для вирусных генов, активация которых происхо-
дит сразу после инфицирования вирусом эукариотической клетки. При этом вирус
использует уже существующие факторы транскрипции клетки-хозяина. Вирусные
IEG чаще всего кодируют факторы транскрипции, необходимые для активации
экспрессии вирусных «поздних» генов, кодирующих структурные белки вирусно-
го капсида, а также вирусные ферменты.
Использование термина IEG по отноше-
нию к эукариотическим генам связано с рядом сложностей, поскольку активация
многих клеточных генов хотя и не требует синтеза новых факторов транскрип-
ции, но происходит в промежуточном временном интервале (он больше, чем тот,
что характерен для «классических» IEG, но меньше, чем у генов позднего ответа).
Вдействительности экспрессия некоторых генов может регулироваться в течение
разных временных промежутков и иметь разную степень зависимости от синтеза
новых белков в ответ на действия различных внутриклеточных сигналов. Кроме
того, многие клеточные гены, которые регулируются по принципу IEG, кодируют
белки, не являющиеся факторами транскрипции. Несмотря на это, концепция
факторов транскрипции, кодируемых IEG в клетках нервной ткани, является до-
вольно успешной. В частности, некоторые IEG успешно используются в качестве
маркеров нейрональной активности благодаря тому, что они способны быстро ак-
тивироваться в ответ на деполяризацию клеточной мембраны, изменение уровня
вторичных мессенджеров или действие факторов роста.
Факторы транскрипции, кодируемые клеточными IEG, связываются с цис-ре-
гуляторными элементами, координирующими работу «поздних» генов, что приво-
дит к их индукции или репрессии. По этой причине некоторые IEG, такие как c-fos
и c-jun, часто обозначают как «третичные мессенджеры» в процессе передачи
сигнала— по аналогии с тем, как нейромедиаторы, факторы роста, цитокины,
гормоны обозначают как внеклеточные «первичные мессенджеры», а малые
внутриклеточные молекулы, такие как цАМФ, Са
2+
, ИФ
3
, ДАГ и цГМФ,— как «вто-
ричные мессенджеры» (рис.6.27).
Однако активация IEG не всегда бывает необходимым этапом индукции
сигнал-зависимых генов. Многие из этих генов, включая гены, кодирующие ней-
ропептиды, такие как проэнкефалин и продинорфин, а также некоторые гены,
кодирующие нейротрофические факторы, могут активироваться либо в ответ на
деполяризацию мембраны нейрона, либо посредством фосфорилирования кон-
ститутивных факторов транскрипции, таких как CREB.
6.11.5. Регуляция гена c-fos
Ген c-fos активируется быстро в ответ на действие нейромедиаторов, а также
фармакологических агентов, вызывающих увеличение уровня цАМФ или Са
2+
в
клетке. Активация обоих сигнальных путей приводит к фосфорилированию CREB.
Ген c-fos имеет три сайта связывания CREB. Кроме того, ген c-fos может инду-
цироваться через Ras/МАПК-зависимый сигнальный путь, который активируется
различными факторами роста. Например, некоторые нейротрофические факто-
156 О. Л. Кундупьян, А. С. Фомина, М. Ю. Бибов. Основы нейробиологии
ры, такие как фактор роста нервов (NGF, от англ. nerve growth factor), связывают-
ся с рецепторами, обладающими тирозинкиназной активностью (Trk), в резуль-
тате чего происходит активация белка Ras. Белок Ras затем активирует каскад
протеинкиназ, таких как Raf и цитоплазматические киназы МАП-киназ (МАПКК),
MEK1/MEK2, которые в свою очередь фосфорилируют МАП-киназы ERK1/ERK2
(рис.6.28). Эти киназы транслоцируются в ядро, где
они активируют киназу RSK2,
которая фосфорилирует CREB. В то же время ERK1/ERK2 могут также напрямую
фосфорилировать факторы транскрипции, такие как триадные комплексные
факторы Elk-1 и TCF. Факторы Elk-1 и TCF далее связываются с сывороточным
респонсивным элементом (SRE, от англ. serum response element), находящимся в
составе гена c-fos, а также ряда других генов, регулируемых факторами роста, что
приводит к активации их экспрессии (рис.6.28).
6.11.6. Регуляция гена c-jun
Экспрессия большинства белков семейств Fos и Jun, которые составляют си-
стему факторов транскрипции АР-1, регулируется внеклеточными сигналами. Вто
же время белки Fos и Jun сами являются фосфопротеинами, и АР-1-зависимая
транскрипция требует не только синтеза новых белков АР-1, но также и их фосфо-
рилирования. Фосфорилирование N-концевого домена белка c-jun усиливает его
способность активировать транскрипцию, но не оказывает заметного влияния
на его способность связываться с ДНК. С другой стороны, фосфорилирование
c-jun в других сайтах увеличивает его сродство к ДНК.
Фосфорилирование белка c-jun осуществляется N-концевой киназой Jun
(JNK), являющейся представителем семейства митоген-активируемых протеинки-
наз (MАПК), которое также включает в себя такие протеинкиназы, как ERK и р38
(рис.6.28). Было показано, что протеинкиназы JNK и р38 могут активироваться
действием цитокинов, таких как интерлейкин-1β (IL-1β) и фактор некроза опухо-
ли-α (ФНО-α), и нейромедиаторов, в особенности глутаматом. В связи с этим ак-
тивация АР-1-опосредованной транскрипции в клетках нервной ткани требует не-
скольких стадий, начиная с активации генов, кодирующих белки семейства АР-1.
6.12. Краткое содержание главы
Основной класс сигнальных механизмов, осуществляющий свое действие
при помощи G-белков, отвечает за высокое разнообразие процессов модуляции,
амплификации и пластичности в нервной системе. Трансдукция сигнала данны-
ми системами осуществляется при участии вторичных мессенджеров, которые
активируют эффекторные белки и тем самым оказывают влияние на клеточный
метаболизм и экспрессию генов. Главной особенностью данных сигнальных
механизмов является способность G-белков реагировать на присутствие акти-
вированного рецептора и усиливать передаваемый сигнал посредством моду-
ляции активности ферментов и ионных каналов. Фосфорилирование ключевых
6. Молекулярные механизмы внутриклеточной сигнализации в нервной ткани 157
клеточных белков, ионных каналов и ферментов приводит к активации и/или
ингибированию различных метаболических процессов. Специфичность переда-
ваемых сигналов обеспечивается рецепторами, каждый из которых способен
активировать только определенные G-белки. Физиологический ответ клетки на
поступающий сигнал определяется скоростью увеличения ГТФазной активности,
присущей α-субъединице G-белка. Детальные функции каждой из субъединиц
G-белков
в настоящее время изучены не до конца и являются предметом дискус-
сий. Специфичность передаваемых сигналов, вызываемые ими биологические
эффекты и их локальный контроль также определяются компартментализацией
сигнальных механизмов. Фосфолипиды, в особенности фосфатидилинозитол,
а также АТФ являются субстратами для ферментов, осуществляющих синтез
вторичных мессенджеров, активируемых G-белками. Частыми посредниками в
передаче внутриклеточных сигналов выступают также ионы Са
2+
, высвобожда-
емые из внутриклеточных депо. Ионы Са
2+
выполняют двойственную функцию,
действуя как переносчики заряда при генерации мембранных потенциалов, а
также как вторичные мессенджеры. Ключевым регулятором Са
2+
-зависимой сиг-
нализации является белок кальмодулин, обеспечивающий комплексный харак-
тер и специфичность сигнализации. Чувствительность сигнальных механизмов
обеспечивается чрезвычайно тонкой системой амплификации поступающих сиг-
налов, что особенно хорошо заметно на примере системы зрительного восприя-
тия, способной реагировать даже на единичные световые фотоны.
Морфофункциональное состояние клеток определяется присутствующими
в них белками, биологическая активность и свойства которых регулируются
посредством их фосфорилирования/дефосфорилирования. Фосфорилирование
модулирует функции регуляторных белков и ферментов, а также уровень их
генетической экспрессии. Активности протеинкиназ и протеинфосфатаз регу-
лируются вторичными посредниками, а также сигнальными молекулами, воз-
действующими на клетки. Протеинкиназы и протеинфосфатазы оказывают
интегративное действие и изменяют активность широкого спектра клеточных
рецепторов. Количество возможных биологических эффектов, реализуемых с
помощью таких механизмов, чрезвычайно велико и позволяет осуществлять
тонкую регуляцию биологических функций клеток в широком временном диа-
пазоне. Протеинкиназы могут претерпевать конформационные перестройки,
оказывающие влияние на их активность. Данный механизм может играть клю-
чевую роль в процессах формирования молекулярной памяти и нейрональной
пластичности. Большинство биологических эффектов Са
2+
в клетке опосредо-
вано кальмодулином, который в свою очередь опосредует события, связанные
с фосфорилированием и дефосфорилированием белков. Фосфатидилинозитол-
зависимая сигнальная система опосредована ПКС, которая способна модулиро-
вать множество клеточных процессов, включая экзоцитоз и экспрессию генов.
Все три описанные класса ферментов обладают свойствами когнитивных киназ,
поскольку они способны поддерживать свое активное состояние даже после
158 О. Л. Кундупьян, А. С. Фомина, М. Ю. Бибов. Основы нейробиологии
того, как концентрация вторичных мессенджеров в цитоплазме возвращается к
исходному уровню. Было установлено, что ПКА принимает участие в процессах
обучения и памяти у моллюсков рода Aplysia, а также в нейронах гиппокампа, где
она задействована в процессах долговременной активации. Протеинфосфатазы
также имеют важное значение в нейрональной сигнализации, так как способны
осуществлять дефосфорилирование белков
. Взаимоотношение активностей про-
теинкиназ и протеинфосфатаз имеет ключевое значение для интегративных ин-
формационных процессов, происходящих в нервной системе.
Формирование долговременной памяти требует изменения экспрессии ге-
нов, а также синтеза новых белков. Регуляторные элементы, присутствующие в
составе ДНК, определяют, какие гены будут экспрессироваться в тот или иной
момент времени при различных физиологических условиях. Регуляторные эф-
фекты нейромедиаторов, гормонов, фармакологических агентов и факторов
роста на уровень генетической экспрессии реализуются на стадии инициации
транскрипции. В свою очередь, транскрипция осуществляется ферментами РНК-
полимеразами. Транскрипция регулируется транскрипционными факторами,
представляющими собой белки, необходимые для связывания РНК-полимеразы
с промотором структурного гена. Например, важным этапом в активации фак-
тора транскрипции CREB является транслокация в ядро клетки каталитической
субъединицы ПКА, где она осуществляет фосфорилирование CREB.
Гены, кодирующие факторы транскрипции, также могут активироваться бы-
стро или медленно. Продукты экспрессии этих генов выполняют роль третичных
мессенджеров в сигнальных каскадах. Взаимодействие между сигнальными пу-
тями, инициируемыми действием нейромедиаторов и факторов роста, обеспечи-
вает разнообразие реакций клеток на различные стимулы.
Активный транскрипционный комплекс представляет собой сложную надмо-
лекулярную структуру, состоящую из белков, способных связываться с промотор-
ной областью ДНК, включающую в себя регуляторную последовательность, назы-
ваемую ТАТА-боксом. Помимо РНК-полимеразы II этот комплекс включает в себя
большое количество транскрипционных факторов и адаптерных белков. Различные
транскрипционные факторы могут быть связаны с цис-регуляторными элементами,
расположенными в различных участках генома. Данные факторы могут взаимодей-
ствовать друг с другом благодаря формированию петель в ДНК, а также других то-
пологических структур, в результате чего транскипционные факторы, связанные с
различными участками ДНК, оказываются пространственно сближенными.
Транскрипция может регулироваться различными внеклеточными сигна-
лами, передаваемыми внутрь клетки с помощью различных сигнальных меха-
низмов и транскрипционных факторов. Большинство из этих факторов объеди-
няются в сложные семейства белков. Благодаря такой сложной организации
обеспечивается тонкая взаимосвязанная работа различных сигнальных меха-
низмов, что в конечном счете обусловливает строго координированную работу
различных отделов нервной системы.
6. Молекулярные механизмы внутриклеточной сигнализации в нервной ткани 159
Тестовые вопросы по теме «Молекулярные механизмы
внутриклеточной сигнализации в нервной ткани»
1. В передаче сигналов через рецепторы, ассоциированные с G-белками (GPCR),
принимают участие следующие клеточные структуры:
1) рецептор, расположенный на клеточной поверхности и обладающий тиро-
зинкиназной активностью
2) рецептор, расположенный на клеточной поверхности, который определяет
природу сигнала, на который должна реагировать клетка
3) потенциал-зависимые ионные каналы
4) G-белки, ассоциированные с внутренней поверхностью клеточной мембраны
5) вторичные мессенджеры
2. Роль вторичных мессенджеров в клетке могут выполнять
1) ГТФ
2) УДФ
3) цАМФ
4) Са
2+
5) ИФ
3
3. Какая из сигнальных систем принимает участие в реализации биологических
эффектов NO?
1) аденилатциклазная
2) фосфатидилинозитол-зависимая
3) гуанилатциклазная
4) тирозинкиназная
5) мембранно-внутриклеточная
4. В аденилатциклазном механизме сигнализации принимают участие
1) фосфолипаза С
2) протеинкиназа А
3) протеинкиназа G
4) цАМФ
5) аденилатциклаза
5. В фосфатидилинозитол-зависимом сигнальном механизме сигнализации при-
нимают участие
1) протеинкиназа С
2) цГМФ
3) Са
2+
-кальмодулин-зависимые протеинкиназы
4) фосфолипаза А
2
5) инозитол-1,4,5-трифосфат
6. В гуанилатциклазном механизме сигнализации принимают участие
1) цАМФ
2) аденилатциклаза
3) цГМФ
160 О. Л. Кундупьян, А. С. Фомина, М. Ю. Бибов. Основы нейробиологии
4) гуанилатциклаза
5) фосфодиэстераза
7. Активация G-белка происходит при
1) замещении ГТФ на ГД Ф в активном центре α-субъединицы
2) замещении ЦДФ на ЦДФ в активном центре α-субъединицы
3) замещении ГД Ф на ГТФ в активном центре α-субъединицы
4) ассоциации α-субъединицы с βγ-димером
5) диссоциации α-субъединицы из комплекса с βγ-димером
8. Участниками сигнального механизма PI3K/Akt/PKB/mTOR
являются
1) протеинкиназа B
2) инозитол-1,4,5-трифосфат
3) фосфатидилинозитол-3,4,5-трифосфат
4) фосфатидилинозитол-3-киназа
5) дигидроксиацетон-3-фосфат
9. Установите соответствие.
А. Протеинкиназа В 1. Является источником NO
Б. Аргинин 2. Состоит из двух регуляторных и двух каталитических
субъединиц
В. Протеинкиназа А 3. Фосфорилирует киназу гликогенсинтазы
Г. Кальцинейрин 4. Является аллостерическим активатором протеин-
киназы С
Д. Диацилглицерол 5. Расщепляет фосфатидилинозитол-4,5-дифосфат
с образованием ИФ
3
и ДАГ
Е. Фосфолипаза С 6. Является Са
2+
-кальмодулин-зависимой протеинфосфа-
тазой
10. Димеры βγ, входящие в состав G-белков, способны выполнять следующие
функции:
1) активировать Ca
2+
- и K
+
-каналы
2) фосфорилировать белки
3) выступать в роли факторов транскрипции
4) активировать фосфолипазу А
2
5) активировать фосфатидилинозитол-3-киназу
11. Выберите положения, правильно характеризующие свойства Са
2+
-кальмодулин-
зависимой протеинкиназы II.
1) фосфорилирует киназу гликогенфосфорилазы
2) фосфорилирует Са
2+
-АТФазу
3) дефосфорилирует Са
2+
-каналы
4) фосфорилирует Са
2+
-каналы
5) фосфорилирует ТАГ-липазу
Соседние файлы в папке Библиотека им академика М.И. Перельмана