III. Цель занятия:

Студент должен знать:

1. Количество лейкоцитов в 1 мкл. и 1 л. крови, возрастные особенности.

2. Лейкоцитоз, лейкоцитопения, их виды.

3. Лейкоцитарная формула, её отклонения.

4. Методики определения количества лейкоцитов при помощи счетной камеры Горяева и подсчета лейкограммы.

5. Функции лейкоцитов.

6. Понятие об иммунитете, его механизмы.

Студент должен уметь:

1. Определять количество лейкоцитов в счетной камере Горяева.

2. Производить расчет количества лейкоцитов в 1 микролитре крови по формуле.

3. Производить подсчет лейкограммы в мазке крови под иммерсионной системой микроскопа.

4. Зарисовать лейкоцитарную формулу.

4. Вопросы для самоподготовки:

1. Строение лейкоцитов. Виды лейкоцитов.

2. Функции лейкоцитов.

3. Понятие об иммунитете, его механизмы.

4. Значение Т- и В-лимфоцитов в иммунном процессе.

Развитие систем Т- и В-лимфоцитов.

5. Количество лейкоцитов в 1 мкл. и 1 л. крови. Возрастные особенности.

6. Лейкоцитоз, лейкоцитопения, их виды.

7. Как производится подсчет количества лейкоцитов в 1 мкл. крови при помощи счетной камеры Горяева?

8. Лейкоцитарная формула, её отклонения.

9. Как производится подсчет лейкоцитарной формулы?

4. Информационно-дидактический блок.

Аннотация и методика проведения лабораторных работ.

Лейкоциты или белые кровяные тельца, представляют собой бесцветные клетки, содержащие ядро. Лейкоциты крови принято делить на две группы: зернистые или гранулоциты (нейтрофилы, эозинофилы, базофилы) и незернистые или агранулоциты (лимфоциты, моноциты). Различные виды лейкоцитов разнообразны по форме, происхождению, функциям и количественному составу. В связи с тем, что лейкоциты способны к активному передвижению, то форма их во время движения изменяется. Лейкоциты играют важную роль в защите организма от микробов, вирусов, от патогенных простейших, любых чужеродных веществ, т.е. они обеспечивают иммунитет.

В крови здоровых людей в условиях покоя количество лейкоцитов составляет от 4х10³ до 8,8х10³ в 1 мкл, или (4-8,8)х10⁹ в 1 л. Увеличение числа лейкоцитов выше нормы называется лейкоцитозом, уменьшение числа лейкоцитов ниже нормы - лейкоцитопенией.

Работа №1. Определение количества лейкоцитов.

При подсчете лейкоцитов кровь разводят 2% раствором СН₃СООН, подкрашенной метиленовой синью. Уксусная кислота гемолизирует эритроциты, а метиленовая синь окрашивает ядра лейкоцитов.

Проведение работы:

Разведение крови:

В чистую сухую пробирку отмеривают 0,4 мл 2%-ной уксусной кислоты, подкрашенной метиленовой синью. Капилляром от гемометра Сали набирают 0,02 мл крови, выдувают её в пробирку с кислотой, перемешивают. Таким образом, достигается разведение крови в 20 раз. Смесью заряжают счетную камеру Горяева.

Подсчет лейкоцитов.

Камеру помещают на столик микроскопа и под малым увеличением, начиная с верхнего левого квадрата, считают количество лейкоцитов в 25 больших квадратах (разделенных на маленькие, что составляет 400 маленьких квадратиков).

Расчет количества лейкоцитов в 1 мкл крови.

Количество лейкоцитов в 1 маленьком квадрате равно А/400, где А – общее количество лейкоцитов, сосчитанных в 400 малых квадратах. Объём жидкости над маленьким квадратиком равен 1/4000 мм³ (1 мкл), степень разведения крови 1:20. Следовательно, количество лейкоцитов в

1 мкл крови равно А/400 : 1/4000 = Ах4000/400. Полученное число лейкоцитов умножают на разведение.

Таким образом, формула для вычисления количества лейкоцитов в

1 мкл крови : Ах4000х20/400, а в 1 л крови: Ах4000х20х10⁶/400.

Работа №2. Лейкоцитарная формула.

Соотношение количества всех видов лейкоцитов может изменяться при некоторых физиологических и особенно существенно при патологических условиях. Поэтому в норме и патологии учитывается не только количество лейкоцитов, но и их процентное соотношение, получившее название лейкоцитарной формулы, или лейкограммы. В лейкоцитарной формуле базофилы составляют 0-1%, эозинофилы - 0-5%, нейтрофилы представлены следующим образом: юные 0-1%, палочкоядерные 1-6% и сегментоядерные нейтрофилы 47-70%. Лимфоцитов в крови содержится 20-40%, моноцитов 2-10%.

Проведение работы: Подсчет лейкоцитарной формулы производится в заранее подготовленном окрашенном мазке крови под иммерсионной системой микроскопа с помощью специальной счетной машинки или лабораторного счетчика. На левый верхний край мазка капают касторовое масло, мазок помещают под иммерсионный объектив микроскопа и приступают к подсчету. В поле зрения среди безъядерных эритроцитов отыскивают лейкоцит, определяют его вид и нажимают на соответствующую букву клавиши счетной машинки. Передвигая мазок слева направо до конца, считают указанным способом лейкоциты. Затем опускают мазок на одно поле зрения ниже, передвигая мазок справа налево, продолжают определять лейкоциты до тех пор, пока их число не достигнет 100. По показаниям машинки записывают результат.

Правила работы с лабораторным счетчиком при подсчете лейкограммы:

1. Включение блока питания в сеть, при этом на табло появляется

сообщение «СЧЕТ 0».

2. Определив вид лейкоцита, нужно нажать на соответствующую клавишу с буквенным обозначением.

3. Счет ведется до 100. Окончание счета сопровождается появлением звукового подтверждения.

4. Далее следует нажать на клавишу «%». На табло появится сообщение «Пр».

5. При нажатии на отдельные клавиши с обозначениями различных видов лейкоцитов на табло будет появляться результат.

Примечание: цифры в центре табло указывают на номера клавиш.

6. Для обнуления содержимого каналов счетчика нужно нажать на клавишу желтого цвета.

7. Выключение блока питания из сети.