14. Ингибирование ферментов.

Скорость ферментативной реакции определяется присутствием в среде эффекторов: активаторов и ингибиторов. Активаторы повышают скорость реакции и иногда модифицируют её, а ингибиторы - тормозят её.

Активаторы: коферменты, ионы Ме, SH- реагенты. Активизирующее влияние связано с оптимизацией структуры белковой молекулы и активного центра фермента. Это улучшает взаимодействие фермента и субстрата.

Активатор панкреатической липазы – желчные кислоты.

Активатор трипсиногена – энтерокиназы.

Активатор хематрипсиногена – трипсин.

Активатор пепсина и амилазы – ионы Са.

В качестве активаторов могут выступать и Ме:

Zn – активатор угольной ангидразы.

Ингибиторами принято называть вещества, вызывающее частичное или полное торможение реакции.

Любые агенты, вызывающие денатурацию фермента, являются ингибиторами. Однако такое ингибирование неспецифично потому, что не связано с механизмом действия ферментов. Гораздо больше специфических ингибиторов, которые оказывают действия на один какой – либо фермент или на группу родственных ферментов. Такие ингибиторы могут дать ценную информацию о природе активного центра фермента. На ингибировании ферментов основан механизм действия многих токсинов и ядов на организм. Так, при отравлении синильной кислотой спазм наступает вследствие полного торможения дыхательных ферментов (цитохромоксидазы).

Типы ингибирования:

1. Обратимое

2. Необратимое

Если молекула ингибитора вызывает стойкие изменения или модификацию активного центра фермента, то такой тип ингибирования называется необратимым.

Обратимое ингибирование встречается чаще, и его делят на конкурентное и неконкурентное, в зависимости от того удаётся или не удаётся преодолеть торможение ферментативной реакции путём повышения {S}. Конкурентное ингибирование возможно при наличии структурного сходства субстрата и ингибитора. Например, торможение активности сукцинатдегидрогеназы малоновой кислотой:

НООС - 2Н НООС

СН -------- СН

СН СДГ СН

НООС НООС

сукцинат фумарат

Если в среду вместо сукцината внести малонат, то в силу его структурного сходства с сукцинатом он будет реагировать с активным центром СДГ. Однако при этом перенос 2Н от малоната не происходит, так как структуры малоната и сукцината всё же несколько отличаются и они будут конкурировать за связывание с активным центром СДГ и степень торможения будет определена соотношением концентраций малоната и сукцината. Особенность этого ингибирования – обратимость за счёт увеличения {S}.

I(+) E + I ------ EI

I(-)

Неконкурентное (частично обратимое, но чаще всего необратимое) ингибирование вызывается веществами, не имеющими структурного сходства с субстратами и по этой причине не конкурирующее с ними за связывание с активным центром, а связывающиеся с ферментом в другом месте. Примером такого ингибирования является действие ядов тяжёлых металлов (Cu, Co, Mo), SH-реагентов, цианидов, угарного газа, синильной кислоты.

I(+)

E + I ------ EI

I(-)

Часто имеет место частично неконкурентное ингибирование, при котором снижение Vmax сочетается с повышением Km. В редких случаях степень торможения активности фермента может повышаться с повышением {S}. Это так называемое бесконкурентное ингибирование. В этом случае возможно соединение ингибитора с комплексом ES, следовательно, образуется неактивный или медленно реагирующий комплекс

ES + I ------ ESI

I(+)

I ( -)

Действие многих лекарств основано как раз на этих всех методах ингибирования. Так, например, сульфаниламидные препараты применяются для лечения некоторых инфекций, которые имеют структурное сходство с ПАБК, которую бактериальная клетка использует в каестве субстрата для синтеза фолиевой кислоты. Благодаря сходству сульфаниламид блокирует действие фермента путём вытеснения ПАБК из комплекса ES , что ведёт к снижению роста бактерий. Это конкурентное ингибирование.