Определение общего количества микробов (кмафАнМ)

Общее количество микробов – это количество в 1 г продукта мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ). Метод определения основан на способности мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов размножаться на плотном питательном агаре при температуре 30 ± 1 °С в течение 72 ч. Количество засеваемого продукта устанавливают с учетом наиболее вероятного микробного обсеменения. При исследовании яиц в питательную среду засевают разведения от 10^–1 до 10^–3.

Для посева 0,1 г продукта (разведение 10^–1) готовят первое десятикратное разведение взвеси: стерильной пипеткой набирают 1 см³ взвеси, переносят ее в пробирку с 9 см³ стерильного физиологического раствора (1 см³ полученного раствора содержит 0,1 г продукта).

Для посева 0,01 г продукта (разведение 10^–2) готовят второе десятикратное разведение: стерильной пипеткой перемешивают содержимое пробирки с первым разведением, набирают 1 см³ первого разведения и переносят в пробирку с 9 см³ стерильного физиологического раствора (1 см³ полученного раствора содержит 0,01 г продукта).

Для посева 0,001 г продукта (разведение 10^–3) готовят третье десятикратное разведение: стерильной пипеткой перемешивают содержимое пробирки со вторым разведением, набирают 1 см³ и переносят в пробирку с 9 см³ стерильного физиологического раствора (1 см³ полученного раствора содержит 0,001 г продукта).

В чашки Петри с заранее маркированной крышкой засевают по 1 см³ каждого разведения и заливают 10–15 см³ расплавленным и остуженным до 40–45 °С мясопептонным агаром (МПА). Сразу после заливки агара содержимое чашек Петри путем легкого покачивания тщательно перемешивают для равномерного распределения посевного материала. После застывания агара чашки Петри переворачивают крышками вниз и ставят на 72 ч в термостат при температуре 30 °С.

По окончании культивирования подсчитывают количество выросших на чашках с МПА колоний. При этом для подсчета колоний пользуются лупой с увеличением в 4–10 раз или специальным прибором. При большом числе колоний и их равномерном распределении в агаре на дно чашки Петри наносят четыре или более одинаковых секторов, подсчитывают число колоний в двух-трех секторах (но не менее чем на 1/3 поверхности чашки), находят среднее арифметическое число колоний и умножают на общее количество секторов всей чашки.

Количество мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов в 1 см³ свежего мяса (X) вычисляют по формуле:

X = n 10^m, (4)

где n – количество колоний, подсчитанных на чашке Петри;

m – число десятикратных разведений.

За окончательный результат принимают среднее арифметическое подсчета двух чашек с разными разведениями продукта.

Определение титра бактерий группы кишечных палочек (бгкп)

В настоящее время к БГКП относят следующие роды из семейства Enterobacteriaceae: Escherichia, Enterobacter, Citrobacter, Klebsiella, Serratia.

БГКП представляют собой мелкие, неспорообразующие палочки, располагающиеся одиночно, по методу Грама красятся отрицательно, подвижные (за исключением бактерий рода Klebsiella), не образующие спор и капсул (кроме бактерий рода Klebsiella), факультативные анаэробы. Имеют гетероферментативную каталазу и цитохромы, могут получать энергию как в процессе дыхания, так и в процессе брожения. Осуществляют муравьино-кислое брожение с накоплением СО₂ и Н₂О и кислот (уксусной, молочной, янтарной).

Метод определения БГКП помогает обнаружить образование газа или кислоты в элективной питательной среде, содержащей лактозу (среда Кесслера). Метод учета БГКП получил название бродильного метода, сущность которого заключается в посеве определенного количества продукта или его разведений в жидкую питательную среду с последующим инкубированием при температуре 37 °С и обнаружении в поплавках газа с изменением цвета среды. При наличии газа на втором этапе исследования производят пересев материала из забродивших пробирок на среду Эндо. Для получения изолированной колонии пересев делается бактериальной петлей, густым штрихом. Чашки Петри с высевом инкубируются при температуре 27 °С в течение 24 ч, затем посевы просматриваются.

Если на среде Эндо не обнаружено характерных для БГКП ярко-красных колоний с металлическим блеском или без него, то дают отрицательный ответ на это исследование. В таком случае анализ прекращают. При обнаружении на среде Эндо колоний определяется принадлежность выросших микроорганизмов к семейству кишечных бактерий. Для этого из колоний готовят фиксированный препарат и окрашивают его по методу Грама.