gistologia

торых формах анемий центральная бледно окрашенная часть эри­ троцитов увеличена — гипохромные эритроциты. При суправитальном окрашивании капли крови бриллиантовым крезиловым синим в приготовленном затем мазке можно обнаружить молодые формы эритроцитов, содержащие зернисто-сетчатые структуры. Такие клетки называют ретикулоцитами, они являются непосред­ ственными предшественниками эрелых эритроцитов. При элек­ тронной микроскопии в содержимом ретикулоцитов обнаружены компоненты белоксинтезирующей системы — рибосомы, элементы эндоплазматической сети, митохондрии. Радиоавтографическим методом доказано, что в ретикулоцитах продолжает осуществлять­ ся синтез белка гемоглобина. Подсчет ретикулоцитов использует­ ся для получения информации о скорости образования эритроци­ тов. Обнаружение в большем количестве по сравнению с нормой ретикулоцитов в крови — признак усиленного эритропоэза.

В зрелых эритроцитах при электронной микроскопии не удает­ ся выявить никаких органелл, их внутреннее содержимое имеет высокую электронную плотность.

фагоцитируются макрофагами главным образом в селезенке, пече­ ни и красном костном мозге. При этом от гема гемоглобина от­ щепляется железо, а из оставшейся части молекулы образуются пигменты желчи, мочи и кала. Железо с помощью белка плазмы крови транспортируется главным образом в костный мозг, где вновь используется при синтезе гемоглобина развивающимися эритроцитами. Таким образом, железо, освобождающееся из фа­ гоцитированных эритроцитов, почти полностью доступно для реутилизации. Избыток железа аккумулируется в макрофагах селезенки или печени в виде гранул гемосидерина, которые выяв­ ляют гистохимическими методами.

Эритроциты обладают свойством противостоять различным разрушительным воздействиям — осмотическим, механическим и др0 При значительных изменениях концентрации солей в окружа­ ющей среде, например при помещении крови в гипотонический раствор, эритроциты набухают, приобретают сферическую форму; мембрана перестает удерживать гемоглобин, и он выходит в окру­ жающую жидкость — явление г е м о л и з а . Выход гемоглобина из эритроцитов может происходить в организме при действии зме­ иного яда, токсинов, выделяемых некоторыми бактериями, возбу­ дителями паразитарных болезней. Гемолиз развивается также при переливании несовместимой по группе крови. Практически важ­ но при введении в кровь животным жидкостей осуществлять кон­ троль ва тем, чтобы вводимый раствор был изотоническим.

У эритроцитов по сравнению с плазмой и лейкоцитами крови относительно большая плотность (удельный вес). Если кровь, предварительно обработанную противосвертывающими вещества­ ми, поместить в какой-либо сосуд, то отмечают оседание эритро­ цитов. С к о р о с т ь о с е д а н и я э р и т р о ц и т о в (СОЭ) у жи-

124

вотных разного возраста, пола и вида неодинакова. Высокая СОЭ у лошадей и, наоборот, низкая у крупного рогатого скота. Измене­ ния СОЭ, наблюдаемые в патологии, имеют диагностическое и прогностическое значение.

Лейкоциты

Лейкоциты — разнообразные по морфологическим признакам и функциям клетки сосудистой крови. В организме животных они выполняют многообразные функции, направленные прежде всего на защиту организма от чужеродного влияния путем фагоцитар­ ной активности, участия в формировании гуморального п клеточ­ ного иммунитета, а также в восстановительных процессах при тканевом повреждении.

В крови животных лейкоцитов в 600—800 раз меньше, чем эритроцитов. В 1 мкл крови у крупного рогатого скота их насчи­ тывают 4,5—12,0 тыс., у лошадей —7,0—12,0 тыс., овец —6,0— 14,0 тыс., свиней — 8,0—16,0 тыс., собак — 8,5—10,5 тыс., кур — 20,0—40,0 тыс. Увеличение количества лейкоцитов — л е й к о ц и ­ те з — характерный признак для многих патологических процес­ сов, но может наблюдаться и у здоровых животных (лейкоцитозноворожденных, пищеварительный лейкоцитоз и т. д.).

Образовавшись в кроветворных органах и поступив в кровь,, лейкоциты лишь непродолжительное время пребывают в сосуди­ стом русле, затем они мигрируют в вокругсосудистую соединитель­ ную ткань и органы, где осуществляют свою основную функцию. Для многих лейкоцитов тканевая фаза их жизни является завер­ шающей.

Особенность у лейкоцитов та, что они обладают подвижностью; В цитоплазме лейкоцитов, непосредственно около плазмолеммы, имеется комплекс актиновых микрофиламентов, с помощью кото­ рых приводится в движение клеточная поверхность и образуются псевдоподии. Изменяя свою внешнюю форму и форму ядра, белые кровяные клетки способны активно перемещаться между клетка­ ми эндотелия сосудов, проникать через базальные мембраны и клетки эпителия, мигрировать в основном веществе соединитель­ ной ткани.

В лейкоцитах различают ядро и цитоплазму, содержащую раз­ личные органеллы и включения. Классификация лейкоцитов ос­ нована на учете их морфологических признаков, выявляемых при световой микроскопии окрашенных мазков крови и имеет прежде всего клинико-практическое значение. Те лейкоциты, в цитоплаз­ ме которых содержится специфическая зернистость, называются з е р н и с т ы м и (или гранулоцитами). Зрелые зернистые лейко­ циты, как правило, имеют расчлененное на сегменты ядро — сегментоядерные клетки. В соответствии с различием в окрашивании цитоплазматической зернистости в группе гранулоцитов выделя­ ют три вида клеток: н е й т р о ф и л ы — зернистость окрашивается и кислыми, и основными красителями; э о з и н о ф и л ы — вер-

125.

-(iSSSSSL) ' >Эози|о1ияы

В ветеринарной практике при анализе крови животных важ­ ное диагностическое значение имеет дифференциальный подсчет лейкоцитов. Определенное процентное соотношение между отдель­ ными видами лейкоцитов называют лейкоцитарной формулой —• лейкограммой. При определении лейкоцитов на окрашенных маз­ ках крови с помощью светового микроскопа учитывают многие морфологические признаки: величину клеток, форму и плотность ядра, соотношение между объемом ядра и цитоплазмы, наличие или отсутствие в цитоплазме зернистости, ее окраску, величину и распределение в объеме цитоплазмы (рис. 96). В настоящее вре­ мя лейкоцитарную формулу устанавливают с помощью автомати­ ческих приборов.

Г р а н у л оциты (зернистые лейкоциты).

Нейтрофильные лейкоциты (нейтрофилы) — очень подвижные клетки, обладающие высокой фагоцитарной активностью.

1 — эритроциты; 2 — нейтрофилы; 3 — эозинофил; 4 — базофил; 5 — малый лим­ фоцит; б — средний лимфоцит; 7 — моноциты,

126

2. Лейкограмма крови животных,

Крупный рогатый скот Лошади Овцы Свиньи Собаки

Северные олени Верблюды Морские свинки Крысы белые

И. И. Мечников назвал их м и к р о ф а г а м и . Нейтрофилы всего лишь несколько часов циркулируют в сосудистой крови. Благо­ даря х е м о т а к с и с у — направленному движению фагоцитов под влиянием хемотаксических факторов нейтрофилы мигрируют из кровеносных капилляров в соединительную ткань, накаплива­ ются в очаге воспаления, где и осуществляют свою основную фа­ гоцитарную функцию, обеспечивая очищение очага воспаления от микроорганизмов и продуктов клеточного и тканевого распада. В процессе фагоцитоза нейтрофилы погибают и вместе с бактери­ альными веществами и остатками разрушенных тканей образуют массу, называемую гноем. Хемотаксическими свойствами облада­ ют многие продукты экзо- и эндогенного происхождения и преж­ де всего вещества, выделяемые бактериями и вирусами, самими лейкоцитами, а также образующиеся при тканевом распаде.

В крови животных нейтрофилов содержится от 25 до 70% всех лейкоцитов. Больше всего нейтрофилов у лошадей, северных оленей, собак — до 65—70%. Это животные с так называемым нейтрофильным профилем крови. Н е й т р о ф и л е з — увеличение в лейкоцитарной формуле процента нейтрофилов — наиболее ти­ пичен для гнойно-воспалительных процессов.

В мазках крови, окрашенных по Романовскому—Гимзе, раз­ мер нейтрофилов от 8 до 15 мкм, их определяют главным образом по форме и структуре ядра. У зрелых нейтрофилов ядро состоит из нескольких сегментов, соединенных тонкими перемычками. Очень большая сегментированность ядер характерна для нейтро­ филов крови овец. У этих животных часто встречаются клетки с 8—10 сегментами. В сегментах содержится плотный примембранный хроматин, благодаря чему они интенсивно окрашиваются.

В крови животных (см. лейкограмму) имеется определенное ко­

127

личество менее зрелых предшественников сегментированных

форм — палочкоядерных нейтрофилов, имеющих ядро в виде изо­

гнутой палочки или буквы S и метамиелоцитов (юных), содержа­ имеетклиникещихбобовидноопределенно. Пр многихядрое.диагностическоСоопа ношениологическиэтиххзначениесостоянияхтрехвидов ветуменьшаетсянейтрофиловринарнй

•количество сегментоядерных и нарастает количество палочкоядер- •ных и юных нейтрофилов, мобилизуемых из красного костного мозга в сосудистую кровь. Обогащение крови более молодыми формами нейтрофилов получило название «сдвига влево», так как при выведении лейкограммы незрелые клетки принято записы­ вать слева, а зрелые — справа. Резкий сдвиг влево наблюдают при тяжелых септических инфекциях.

Цитоплазма нейтрофилов слабооксифильна, в ней содержится очень мелкая, трудно различимая при световой микроскопии -окрашенных мазков крови зернистость. Отношение зернистости к красителям варьирует у разных животных: у собаки, кошкп и -свиньи зернистость окрашивается в розово-фиолетовый цвет. •У кроликов гранулы окрашиваются эозином в ярко-красный цвет, то есть имеют выраженное сродство к кислым красителям. По этой причине нейтрофилы кроликов иногда называют псевдоэозинофилами. Оксифильна и палочковидная зернистость нейтрофилов у птиц.

При электронно-микроскопическом исследовании в цитоплазме нейтрофилов обнаруживают небольшое количество органелл об­ щего назначения, включения гликогена, в периферической зоне •содержатся микрофиламенты, обеспечивающие движение клетки. Характерным для цитоплазмы нейтрофилов является наличие в ней гранул двух разновидностей: азурофильных и специфических, содержимое которых позволяет этим клеткам выполнять свои •функции. Появляющиеся на ранних стадиях развития более круп­ ные и электроноплотные азурофильные гранулы содержат, кроме типичных гидролитических ферментов, миелопероксидазу и лизоцим. В многочисленных (до 80% всего количества гранул), но бо­ лее мелких специфических гранулах выявляется щелочная фосфатаза. Показано, что с фагосомой первой по времени контактиру­ ет и сливается специфическая гранула, в последующем переваривание осуществляется с помощью ферментов азурофиль­ ных гранул. Дегрануляция нейтрофилов и активизация лизосомальных гидролитических ферментов происходит и при разруше­ нии клеток, что наблюдается при воспалительной реакции. Таким образом, благодаря совместному действию многочисленных фер­ ментов, содержащихся в гранулах, нейтрофилы могут перевари­ вать все макромолекулы, присутствующие в бактериях и очаге воспаления,

Эозинофильиые лейкоциты (эозинофилы) — разновидность гранулоцитов. Количество их у животных составляет 2—12% всех лейкоцитов сосудистой крови. Наибольший процент эозинофилов в крови крупного рогатого скота, верблюдов и овец. По размеру •эозинофилы крупнее нейтрофилов и имеют диаметр 12—18 мкм. Ядро в эрелых эозинофилах также сегментированное, но чаще ядро состоит из двух сегментов. Значительную сегментированность ядра (3—5 сегментов) отмечают в эозинофилах овец. В кро- •ви животных встречаются палочковидные и юные формы эозино­ филов.

3

Рис. 97. Схема ультрамикроскопического строения эозино-

фюпьного гранулоцита крысы:

2 — сегменты ядра; 2 — зрелые специфические гранулы, со­ держащие кристаллоиды; з — комплекс Гольджи; 4 — грану­ лярная эядоплазматическая сеть (рис. Козлова).

Весьма характерна для эозинофилов относительно крупная специфическая зернистость цитоплазмы. Гранулы, как правило, равномерно и плотно заполняют площадь цитоплазмы. Зерна ярко окрашиваются в оранжево-красный или красный цвет, то есть имеют выраженную оксифилию вследствие содержания в них основных белков. Особенно крупные размеры гранул в эозинофи­ лах однокопытных (лошадь, осел). Гистохимическими методами в зернистости выявлены различные ферменты: кислая фосфатаза, пероксидаза, гистаминаза, арилсульфатаза и др.

При электронной микроскопии зрелые гранулы эозинофилов некоторых видов животных имеют расположенные в центре элек­ троноплотные палочковидные структуры, окруженные по пери­ ферии более светлым содержимым (рис. 97).

Подобно нейтрофилам, эозинофилы обладают хемотаксисом. Хемотаксическими веществами в отношении эозинофилов являют­ ся комплексы антиген—антитело, гистамин и другие низкомоле­ кулярные факторы, выделяемые тканевыми базофилами. По срав­ нению с нейтрофилами эозинофилы менее подвижны и обладают меньшей фагоцитарной активностью. Во время фагоцитоза проис­ ходит дегрануляция эозинофилов, высвобождение из гранул мно­ гих ферментов, с помощью которых осуществляется инактивация гистамина и других медиаторов воспаления. Таким образом, важ­ ная функция эозинофилов — антигистаминовая, участие в ограни­ чении воспалительного процесса.

Эозинофилы являются важнейшими эффекторными клетками в противопаразитарном иммунитете. Многие паразитарные болез-

ни животных (фасциолез, эхинококкоз и др.) сопровождаются усилением продукции эозинофилов в красном костном мозге и уве­ личением их количества в сосудистой крови (у крупного рогатого скота до 20%). В антипаразитарном механизме важнейшее зна­ чение имеет прямой контакт эозинофилов с возбудителем, поэто­ му они в больших количествах скапливаются вокруг внедривших­ ся в организм паразитов. Характерно содержание значительного количества эозинофилов в рыхлой соединительной ткани стенки кишечника.

Базофильные лейкоциты — базофилы — самая малочисленная разновидность гранулоцитов периферической крови животных (0,5—2% всех лейкоцитов). В крови сельскохозяйственных птиц 3—4% базофалов, а содержание их в крови земноводных доходит до 20 %. В мазках окрашенной крови диаметр базофилов несколь­ ко меньший, чем у других гранулоцитов, — 10—12 мкм. Ядро ча­ ще в виде неправильно изогнутой палочки, реже сегментирован­ ное. Слабооксифильная цитоплазма содержит неравномерно распределенную, различную по величине и форме, легко раствори­ мую в воде зернистость. При окраске по Романовскому—Гимз© зернистость красно-вишневого цвета, то есть обладает метахромазией — окрашивается в цвет, отличающийся от цвета основного красителя (азура). Это свойство метахромазии обусловлено особой формой полимеризации молекул красителя при его взаимодейст­ вии с гепарином, входящим в состав гранул. Кроме гепарина, в базофилах имеются гранулы, содеря^ащие высокоактивное веще­ ство — гистамин. Электронно-микроскопически гранулы неодина­ ковы по электронной плотности (рис. 98).

На поверхности базофилов расположены специальные рецеп­ торы, с помощью которых связываются иммуноглобулины Е. При­ соединение антигенов (аллергенов) и образование комплекса антиген—антитело вызывают дегрануляцию базофилов и выход значительного количества содержащихся в них фармакологически активных веществ — гистамина и гепарина. Быстрое высвобож­ дение этих соединений и лежит в основе реакций повышенной чувствительности немедленного типа — сывороточной болезни, фе­ номена Артюса и др. Установлено, что базофилы составляют зна­ чительную часть клеточного инфильтрата при различных формах гиперчувствительности замедленного типа. Таким образом, базо­ филы участвуют в иммунологических реакциях организма, в част­ ности в реакциях аллергического типа.

А г р а и у л о ц и т ы (незернистые лейкоциты). Моноциты, В 1 мкл крови у животных содержится от 1 до 8%. Моноциты периферической крови — самые крупные из лейкоцитов — в маз­ ках окрашенной крови их диаметр 18—20 мкм и более. Это клетки с относительно большим количеством голубовато-серой цитоплаз­ мы (с мелкой азурофильной зернистостью) и различным по сво­ ей форме ядром. Последнее чаще всего бобовидной или лопастной формы, в нем различают расположенный преимущественно по периферии конденсированный хроматин и мелкие ядрышки. При

Рис. 98. Электронная микрограмма базофильного гранулоцнта:

1 — сегменты ядра; г — базофильные гранулы (по Блюму и Фаусету).

электронной микроскопии в цитоплазме выявляются лизосомы, пиноцитозные пузырьки, развитый комплекс Гольджи, небольшие по размеру митохондрии и плотные гранулы, соответствующие азурофильным гранулам, видимым в световой микроскоп (рис.99). Цитохимическими методами в моноцитах обнаруживают липиды, гликоген; в них высокая активность неспецифической эстеразы, имеются кислые гидролазы, пероксидаза, лизоцим (мурамидаза), с участием которых обеспечивается антимикробное действие. По цитохимической характеристике моноциты имеют сходство с клет­ ками нейтрофильного ряда.

Циркулирующие в крови моноциты являются предшественни­ ками тканевых и органных макрофагов, на основании чего они отнесены к системе мононуклеарных фагоцитов (СМФ). После пребывания в сосудистой крови (12—36 ч) моноциты мигрируют через эндотелий капилляров и венул в ткани и превращаются в фиксированные и подвижные макрофаги. При этом в них отмеча­ ется сильное развитие лизосом и появление фагосом. В большом количество моноциты выходят из кровяного русла в ткани при воспалительных реакциях, в том числе и иммунных. В очагах хронического воспаления моноциты становятся важнейшим кле­ точным элементом, выполняющим многообразные функции (сти­ мулируют фибробластические процессы, образуют многоядерные клетки и др.).

Лимфоциты — важнейшие клетки, участвующие в разнообраз­ ных иммунологических реакциях организма. Это многочисленная группа лейкоцитов крови животных. У крупного рогатого скота,

Рис. 99. Электронная микрограмма среднего лимфоцита:

1 — ядро; 2 — митохондрии; 3 — мелкие канальцы гранулярной эндоплазматической сети; 4 — свободные полисомы.

овец, кроликов, белых крыс число лимфоцитов составляет 40— 65% всех лейкоцитов. У других животных (лошади, собаки, свиньи, северные олени), отличающихся преобладанием в крови нейтрофилов, лимфоцитов содержится 20—40%. Большое количе­ ство лимфоцитов находится в лимфе.

По размеру и некоторым структурным особенностям, выявляе­ мым при световой микроскопии окрашенных мазков крови, разли­ чают малые (диаметр до 8 мкм), средние (8—11 мкм) и большие (более 11 мкм) лимфоциты. Малые лимфоциты составляют ос­ новную массу (до 90%) всех лимфоцитов крови животных. Это клетки с выраженным преобладанием объема ядра над объемом цитоплазмы. Ядро у них чаще всего круглое с небольшим углуб­ лением. Крупные конгломераты конденсированного хроматина расположены как по периферии, так и в центральной части ядра, что делает его темным и маскирует ядрышко. Базофильная цито­ плазма обнаруживается или в виде узкого вокругядерного ободка, или в виде серпа, прилежащего к одной стороне ядра. В цитоплаз­ ме некоторых лимфоцитов содержится небольшое количество мел­ ких азурофильных гранул.

Для средних и больших лимфоцитов более характерны ядра слегка бобовидной формы с меньшим количеством конденсирован­ ного хроматина и отчетливо заметным ядрышком, а также более

широкий ободок цитоплазмы. Электронно-микроскопически в цитоплазме малого лимфоцита выявляют свободные полисомы и рибосомы. Другие органеллы — митохондрии, мелкие канальца эндоплазматической сети, элементы комплекса Гольджи, как пра­ вило, немногочисленны и располагаются преимущественно наряду с центриолями около ядерного углубления.

Морфологически сходные малые лимфоциты крови являются функционально разнородными клетками, развитие которых до их поступления в сосудистую кровь происходит в различных орга­ нах.

Различают два основных класса лимфоцитов: Т- и В-лимфо- циты.

Т - л и м ф о ц и т ы развиваются из костномозговых клеток в корковой части долек тимуса. Их дифференцировка выражается в появлении в плазмолемме поверхностных антигенных маркеров (антигены гистосовместимости) и многочисленных рецепторов, с помощью которых происходит распознавание чужеродных анти­ генов и иммунных комплексов.

В-л и м ф о ц и т ы свое название получили потому, что у птиц этот вид лимфоцитов образуется из стволовых предшественников в фабрициевой сумке (Bursa — В). Местом развития В-лимфоци- тов у животных считают миелоидную ткань костного мозга. В ходе дифференцировки В-лимфоциты приобретают способность синтези­ ровать иммуноглобулины, которые становятся составными элемен­ тами их плазмолеммы и выполняют роль рецепторов. С их участи­ ем В-лимфоциты взаимодействуют с антигенами при их распозна­ вании. Кроме того, на поверхности В-лимфоцитов образуются рецепторы для связывания комплемента (его компонента Сз) и рецепторы для Fc фрагмента иммуноглобулиновых молекул.

Установлено, что в основном (более 70%) малые лимфоциты сосудистой крови отвносятся к Т-лимфоцитам, среди которых зна­ чительное количество долгоживущих клеток памяти (10 лет и более). Большинство В-лимфоцитов относится к короткоживущим (недели—месяцы).

Циркулирующие в крови Т- и В-лимфоциты представляют под­ вижную популяцию относительно функционально неактивных клеток. Вне сосудистого русла они скапливаются в определенных участках периферических лимфоидиых органов (для Т-лимфоци- тов это тимуезависимые ЗОБЫ) , где могут при действии соответ­ ствующих антигенов подвергаться активации, превращаться в бластпьто формы, размножаться и дифференцироваться в эффекторные клетки клеточного и гуморального иммунитета, а также создавать увеличенный фонд клеток памяти.

Эффекториыми клетками в системе Т-лимфоцитов являются три основные субпопуляции: Т-киллеры (цитотоксические лимфо­ циты), Т-хелперы (помощники) и Т-супреесоры (угнетающие). Эффекторными клетками В-лимфоцитов являются плазмобласты и зрелые плазмоциты, способные в повышенном количестве про­ дуцировать иммуноглобулины.

Субпопуляции Т-системы также отличаются своими поверхно­ стными маркерами, биологическими свойствами и выполняют раз­ личные специфические иммунологические функции, которые со­ ставляют основу двух различных иммунных ответов — клеточного и гуморального.

Цитотоксические лимфоциты (Т-киллеры — убийцы) путем непосредственного контактного воздействия или с помощью близ­ кодействующих токсических медиаторов (лимфокинов) разрушают чужеродные клетки-мишени или изменившиеся собственные клет­ ки. Такой тип реакции и обезвреживания антигенов (не сопро­ вождающийся выработкой растворимых антител) называют кле­ точным иммунитетом. Он наблюдается при отторжении трансплан­ татов, при реакциях гиперчувствительности замедленного типа, при разрушении опухолевых клеток и развитии аутоиммунных реакций.

Т-хелперы и Т-супрессоры — две субпопуляции клеток, имею­ щих значительную роль в регуляции активности В-лимфоцитов. Т-хелперы выделяют продукты своей синтетической деятельности (медиаторы), которые, взаимодействуя с В-лимфоцитами, способ­ ствуют их превращению в антителопродуцирующие плазматиче­ ские клетки. Т-супрессоры подавляют процессы деления В-клеток и образования плазмоцитов и таким образом оказывают тормозя­ щий эффект на антителообразование. Согласпо современным пред­ ставлениям, в механизме действия клеток хелперов и супрессоров важнейшее значение отводится Fc рецепторам, находящимся на поверхности В-клеток. Вспомогательный эффект Т-хелперов рас­ сматривают как блокировку этих Fc рецепторов медиаторами хел­ перов, что препятствует связыванию рецепторов иммуноглобули­ нами, но способствует их связыванию со специфическими антиге­ нами. Медиаторы Т-супрессоров способствуют образованию связи между иммуноглобулинами и Fc рецепторами В-клеток, тем самым ингибируют их превращение в плазмоциты. В тех случаях, когда антиген вызывает в организме образование антител, В-лимфоциты находятся под влиянием Т-хелперов и макрофагов. Показано, что для развития гуморального иммунного ответа на тимусзависимые антигены превращение В-лимфоцита в плазмоцит не может про­ исходить без участия всех трех типов клеток: Т-хелперов, В-лим­ фоцитов и макрофагов. Имеется ряд гипотез о том, каким обра­ зом происходит взаимодействие клеток в процессе этого иммунного ответа.

На часть тимуснезависимых антигенов (пневмококковый поли­ сахарид, липополисахарид кишечной палочки и др.) В-лимфоци­ ты отвечают самостоятельно. Этим антигенам свойственна особая структура молекул, позволяющая им концентрироваться на по­ верхности В-клеток без помощи Т-хелперов.

макрофагов, хемотаксические факторы для нейтрофилов. эозинофилов, базофилов), обладают противовирусной активностью (ин­ терферон, лимфотоксин) и т. д.

Основными методами разграничения и выявления морфологи­ чески сходных, но функционально разнородных лимфоцитоподобных Т- и В-клеток и их субпопуляций в настоящее время являют­ ся иммунологические, основанные на определении рецепторов клеточной поверхности. Для идентификации В-лимфоцитов по по­ верхностным иммуноглобулинам используется метод иммунофлуоресценции. Идентификация Т-лимфоцитов in vitro основана на их способности к спонтанному розеткообразованию с эритроцитами барана (метод бласттрансформации с фитогемаагглютинином или конканавалином А).

Кровяные пластинки

Кровяные пластинки — безъядерные элементы сосудистой крови млекопитающих. Это небольшие цитоплазматические фрагменты,

птиц сходными по функции элементами являются небольшие клет­ ки с ядром, называемые т р о м б о ц и т а м и .

При световой микроскопии в мазках окрашенной крови обыч­ но обнаруживают скопления кровяных пластинок. Отдельные пластинки имеют вид дискообразных структур величиной 1—- 3 мкм, со слабобазофильной и гомогенной наружной частью — гиаломер (греч. гиалос — стекло; мерос — часть) и с окрашенны­ ми азуром зернами — грануломер. При электронной микроскопия в кровяных пластинках различают поверхностную мембрану, по­ крытую снаружи гликокаликсом, содержащим кислые гликозамипогликаны. Непосредственно под мембраной и параллельно ей располагаются микротрубочки и актиновые микрофиламенты; со­ кратительные свойства последних проявляются при активация пластинок. Во внутренней зоне находятся несколько митохондрий и два типа гранул: плотные гранулы, в которых содержатся АТФ, катехоламины и серотонии, и так называемые а-гранулы лизосомной природы. Кроме того, в пластинках обнаружены относи­ тельно крупные по диаметру канальцы, образованные путем впячивания поверхностной мембраны (рис. 100).

В сосудистой крови пластинки существуют около 9—10 суток, после чего происходит их фагоцитоз, главным образом макрофа­ гами селезенки.

Кровяные пластинки имеют важнейшее значение в обеспече­ нии основных этапов остановки кровотечения — г е м о с т а з а . На месте повреждения эндотелия стенки сосуда и обнажения базальной мембраны происходит оседание и агрегация пластинок. По­ следующая их активация сопровождается изменением формы (пластинки становятся шаровидными) и выделенпем ряда соеди­ нений, содержащихся в гранулах (тромбоцитарные факторы),

Рис. 100. Схема ультрамикроскопического строения кровяных пластинок:

I — а гранулы; 2 — плотные гранулы; 8 — гликоген; 4 — митохондрии; 5 — микро­ трубочки; б — трубочки, связанные с поверхностью; 7 — плотные трубочки; 8 — гликокаликс.

которые ускоряют агрегацию пластинок. Кровяные пластинки крови кроликов выделяют значительное количество гистамина. В результате агглютинации все новых и новых пластинок образу­ ется сгусток (белый тромб), препятствующий выхождению фор­ менных элементов крови из поврежденного сосуда. Вследствие изменения поверхности кровяных пластинок активируются факто­ ры свертывания, находящиеся в плазме крови, которые приводят к появлению нерастворимого фибрина, заполняющего простран­ ства между коагулированными пластинками. В последующей ре­ тракции кровяного сгустка имеет значение содержащийся в плас­ тинках т р о м б о с т е н и н (сократительный белок).

ЛИМФА

Лимфа — почти прозрачная желтоватая жидкость, находящаяся в полости лимфатических капилляров и сосудов. Образование ее обусловлено переходом составных частей плазмы крови из крове­ носных капилляров в тканевую жидкость и поступлением их вме­ сте с продуктами обмена веществ, выделяемыми клетками соеди­ нительной ткани в лимфатические капилляры. В образовании лимфы существенное значение имеют взаимоотношение гидроста­ тического и осмотического давления крови и тканевой жидкости, проницаемость стенки кровеносных капилляров, а также физикохимическое состояние основного вещества соединительной ткани.

Лимфа состоит из жидкой части — лимфоплазмы и формен­ ных элементов. Л и м ф о п л а з м а отличается от плазмы крови меньшим содержанием белков. В лимфе содержится фибриноген, поэтому она также способна свертываться. Главные форменные

системы неодинаков. Различают периферическую лимфу (лимфа лимфатических капилляров и сосудов до лимфатических узлов), промежуточную (лимфа сосудов после прохождения через лимфа­ тические узлы) и центральную (лимфа грудного и правого лимфа­ тического протоков), наиболее богатая клеточными элементами.

КРОВЕТВОРЕНИЕ

Постэмбриональное кроветворение (физиологическая регенерация крови)

Кроветворение (гемоцитопоэз) — многостадийный процесс после­ довательных клеточных превращений, приводящий к образованию зрелых клеток периферической сосудистой крови. В постэмбрио­ нальный период у животных развитие клеток крови осуществля­ ется в двух специализированных интенсивно обновляющихся тка­ нях, относящихся к разновидностям тканей внутренней среды и условно названных миелоидной и лимфоидной. В них постоянно совершается сбалансированный процесс новообразования и гибе­ ли клеточных элементов. Представлены они многочисленными гемопоэтическими клетками разного типа в комплексе с ретику­ лярными или эпителиальными элементами и макрофагами.

Вмиелоидной ткани (греч, миелос — мозг) красного костного мозга происходит развитие стволовых кроветворных клеток и всех форменных элементов крови — эритроцитов, гранулоцитов, лим­ фоцитов, кровяных пластинок, моноцитов.

Влимфоидной ткани, находящейся в тимусе, селезенке, лим­ фатических узлах, слизистых оболочках внутренних полостных органов, образуются лимфоциты, а также клетки, являющиеся конечными стадиями дифференциации стимулированных Т- и В- лимфоцитов.

С помощью клональных, иммунологических, электронно-мик­ роскопических, генетических и радиобиологических методов за последние 25 лет получены важные данные, характеризующие ки­ нетику клеточных популяций в процессе кроветворения. Отраже­ нием этого явилось построение новых схем кроветворения, в кото­ рых уточнены ранние стадии гемоцитопоэза, когда разделение клеток по морфологическим признакам еще невозможно. В настоя­ щее время наиболее признанной является схема кроветворения, предложепиая И. Л. Чертковым и А. И. Воробьевым (1981), в соответствии с которой весь гемоцитопоэз разделен на шесть эта­ пов и соответственно выделено шесть классов кроветворных кле­ ток (цв. табл. II).

Исходя из представления, сформулированного более 60 лет назад А. А. Максимовым, о происхождении клеток крови из еди­ ного источника признано, что родоначальным элементом всех клеток крови является полипотентная с т в о л о в а я к л е т к а (колониеобразующая единица в селезенке — КОЕс ), способная к разнообразным превращениям и обладающая свойством само-

поддержания (пролиферации без видимой дифференциации) сво­ его численного состава в течение всей жизни организма. Популя­ ция стволовых клеток в схеме кроветворения считается клетками первого класса. Во взрослом организме наибольшее количество •стволовых клеток находится в красном костном мозге (на 100 000 -клеток костного мозга приходится около 50 стволовых), из кото­ рого они мигрируют в тимус, селезенку, а у птиц в фабрициеву сумку.

Пролиферируют и развиваются стволовые клетки в том или ином направлении под влиянием близкодействующих индукторов микроокружения, образуемых клетками стромы — различными клетками ретикулярной (в красном костном мозге, селезенке) или ретикуло-эпителиальной основы (в тимусе). Несмотря на то что стволовая клетка кроветворения способна проделывать около 100 митозов, в нормальных физиологических условиях основная масса стволовых клеток митотически инертна. Усиление их митотической активности и восстановление характерного для крове­ творной системы данного организма количества стволовых клеток происходят при воздействиях, резко снижающих общую массу гемопоэтических элементов (например, после кровопотерь или воздействия лучистой энергии). Светомикроскопическое и элек­ тронно-микроскопическое исследование наиболее очищенной фрак­ ции стволовых клеток показало, что они имеют по своей морфо­ логии сходство с малыми лимфоцитами.

Ближайшей ступенью превращения стволовой клетки в про­ цессе кроветворения является второй класс — частично детерми­ нированных клеток-предшественников двух разновидностей — миелопоэза и лимфопоэза. Это популяция п о л у с т в о л о в ы х к л е ­ т о к с более ограниченными способностями к самоподдержанию. На агаровой культуре эти клетки образуют колонии, поэтому они получили название «колоннеобразующие единицы» — КОЕ. Под­ тверждено существование клетки-предшественницы гранулоцитарного, эритроцитарного, моноцитарного и мегакариоцитарного рядов гемопоэза (КОЕ — ГЭММ). Интенсивность их размножения и превращения в следующий, третий класс — «унипотентные клетки-предшественницы», обладающие еще меньшими способно­ стями к самоподдержанию, регулируется действием специфиче­ ских биологически активных веществ — подтипов.

В настоящее время в третий класс поэтинчувствительных кле­ ток отнесены клетки, способные к дифференцировке в направле­ нии как двух ростков — клетка-предшественница грануло- и моноцитопоэза (КОЕ—ГМ), клетка гранулоцито- и эритроцитопоэза (КОЕ—ГЭ), клетка мегакариоцито- и эритроцитопоэза (КОЕ— МГЦЭ), так и клетки, дифференцирующиеся лишь в одном на­ правлении, — клетка-предшественница гранулоцитов (КОЕ—Г), клетка-предшественница моноцитопоэза (КОЕ—М), клетка-пред­ шественница эозинофилов (КОЕ—Эо), клетка-предшественница базофилов (КОЕ—Б), клетка-предшественница мегакариоцитов (КОЕ—МГЦ). Что касается лимфопоэза, то еще не получено

подтверждения существования общей (для Т- и В-лимфоцитов) клетки-предшественницы, и она в схеме остается гипотетичной. Однако на основании обнаружения соответствующих клеточных антигенных маркеров выявлены клетки-предшественницы отдель­ но для Т- и В-лимфоцитов.

Перечисленные выше классы стволовых, полустволовых и унипотентных предшественников имеют лимфоцитоподобный вид и морфологическими методами не распознаются. Если за счет ство­ ловых клеток происходит качественная регуляция кроветворения, то есть снабжение кроветворной системы всеми видами предшест­ венников, то на стадии поэтинчувствительных и следующих за ней морфологически распознаваемых стадиях большинство клеток находится в состоянии пролиферации. Именно в этом отделе реа­

типа в ответ на конкретные потребности организма.

Далее следует четвертый класс клеток типа «бластов» (эритробласты, миелобласты, лимфобласты и т. д.). Все они имеют более крупные размеры (20 мкм и более), ядро с нуклеолами и нежносетчатым хроматином, неширокий ободок беззернистой, слабобазофилыгой цитоплазмы. Несмотря на то что каждый «бласт» развивается в направлении лишь одного определенного типа кле­ ток, морфологически все они трудно различимы.

Пятый и шестой классы морфологически распознаваемых кле­ ток — это соответственно класс созревающих (миелоцит, нормоцит и др.) и класс зрелых клеток (эритроциты, гранулоциты и др.). На уровне последних двух классов выявлено принципиаль­ ное различие в поведении клеток миелоидного и лимфоидного рядов. Если в последних стадиях миелоидного кроветворения раз­ витие идет вплоть до гибели клеток, то в лимфоидном ряду воз­ можно превращение морфологически зрелых лимфоцитов в власт­ ные формы. Однако это происходит под влиянием специфических индукторов — антигенов (антигензависимая бласттрансформация). Таким образом, в основном подтверждается выдвинутое А. А. Максимовым (1927) представление о том, что малый лим­ фоцит крови не является конечной стадией дифференциации кле­ ток лимфоидного ряда, а сохраняет способность трансформиро­ ваться в клетки, способные к митотическому делению.

Развитие эритроцитов (эритроцитопоэз) в красном костном мозге протекает по схеме: стволовая клетка (СК) — полустволо­ вые клетки (КОЕ—ГЭММ, КОЕ—ГЭ, КОЕ—МГЦЭ) — унипотент­ ные предшественники эритропоэза (БОЕ—Э, КОЕ—Э) — эритробласт — пронормоцит — нормоцит базофильный — нормоцит полихроматофильный — пормоцит оксифильный — ретикулоцит — эритроцит. До стадии эритробласта клеткам несвойственны характерные отличительные морфологические признаки, как по­ лагают, они имеют лимфоцитоподобный вид. О свойствах этих клеток судят на основании данных, получаемых главным обра­ зом методом клонирования в полутвердых средах, содержащих

агар, метилцеллюлозу и др. Показано, что в обычных условиях эритроцитопоэза непосредственный предшественник — эритропоэтинчувствительиая унипотентная клетка (КОЕ—Э) образуется из клеток, формирующих большие колонии — бурсты, состоящие из нескольких тысяч эритроидных клеток, так называемые бурстообразующие единицы (БОЕ—Э). В условиях повышенной потреб­ ности в эритроцитах эритроцитопоэз может миновать стадии БОЕ—Э и КОЕ—Э (на схеме обозначено пунктирными линиями).

Конечный период эритроцитопоэза (начиная с эритробластов) сопровождается образованием морфологически распознаваемых клеток. При этом происходят характерные морфологические изме­ нения: уменьшаются размеры всей клетки, отмечают ее уплотне­ ние, затем исчезает ядро, изменяется окраска цитоплазмы. Э р и т- р о б л а с т ы — клетки размером от 15 до 25 мкм. Ядро, занимаю­ щее ее большую часть, содержит мелко распыленный хроматин п 1—3 ядрышка. Образующиеся из эритробластов пронормоциты имеют меньшие размеры (12—18 мкм) и более грубую структуру хроматина ядра (рис. 101). Пронормоциты — интенсивно делящие­ ся клетки. В результате митотического деления образуются клет­ ки размером 10—12 мкм, с плотным ядром и интенсивно базо-

Рнс. 101. Электронная микрограмма пронормоцита (по Агееву) i — митохондрии; 2 — рибосомы; а — ядрышко.

фильпой цитоплазмой, в которой становится заметной узкая более светлая перинуклеарная з о н а — б а з о ф и л ь н ы е н о р м о ц и т ы .

Базофилия цитоплазмы обусловлена наличием в ней большого количества РНК, свободных рибосом и полисом, с которыми свя­ зан синтез белкового компонента гемоглобина. Последний накап­ ливается сначала в перинуклеарной зоне. Железо, входящее в со­ став гемоглобина, базофильные нормоциты получают от макро­ фагов, фагоцитирующих гибнущие эритроциты. В результате деления базофильных нормоцитов появляются еще более мелкие клетки, цитоплазма которых из-за накопленного гемоглобина утрачивает выраженную ранее базофилию и окрашивается как

а вследствие радиального расположения грубых глыбок гетерохроматина имеют вид колеса со спицами. Проделав завершающее деление, полихроматофильные нормоциты превращаются в клет­

(уплотняется) и отсоединяется. Отделившиеся ядра нормоцитов фагоцитируются макрофагами костного мозга. Образуются моло­ дые эритроциты — р е т и к у л о ц и т ы , поступающие в кровяное русло. В них еще некоторое время сохраняются РНК-содержащие структуры в виде сеточки. В процессе развития морфологически распознаваемые клетки эритроцитарного ряда осуществляют 5—6 митозов.

Установлено, что даже в нормальных условиях кроветворения часть эритробластов (до 10%) не завершает свой цикл развития до эритроцитов и с помощью макрофагов костного мозга разруша­ ется.

Этот процесс, названный неэффективным эритропоэзом, является одним из физиологически обусловленных механизмов регуляции в системе эритропоэза. Наиболее сильным регулято­ ром эритропоэза является количество кислорода, доставляемого к тканям и органам. Недостаточное снабжение кислородом стимули­ рует усиленную выработку эритропоэтииа, посредством которого регулируется интенсивность пролиферации костномозговых пред­ шественников (преимущественно на уровне БОЕ—Э и КОЕ—Э) эритропоэза. Эритропоэтин — гормон гликопротеидной природы. Считают, что он синтезируется в почках.

Развитие гранулоцитов (гранулон,итопоэз). При развитии гранулоцитов из стволовых клеток красного костного мозга вначале также образуются морфологически нераспознаваемые полустволо­ вые (КОЕ—ГЭММ; КОЕ—ГМ; КОЕ—ГЭ) и унипотентные пред­ шественники (КОЕ—Б; КОЕ—Эо; КОЕ—Гн), которые через ста­ дии распознаваемых клеточных форм (миелобласт, промиелоцит, миелоцит, метамиелоцит, палочкоядерный гранулоцит) превраща­ ются в зрелые сегментоядерные грапулоциты трех разновидно­ стей — нейтрофилы, эозинофилы и базофилы.

М и е л о б л а с т — первая морфологически идентифицируемая клетка гранулоцитарного ряда —имеет крупное центрально рас» положенное ядро, в котором на фоне диффузно-мелкозернистого хроматина видно несколько ядрышек. Цитоплазма слабо базофильная, в ней можно обнаружить небольшое количество азурофильных гранул. Электронв о-микроскопически в ней выявляются мито­ хондрии, полирибосомы, элементы гранулярной цитоплазматиче-

ядро часто расположено эксцентрично и содержит 1—2 ядрышка. В элементах пластинчатого комплекса Гольджи промиелоцитов происходит основной процесс формирования азурофильных гра­ нул. Они в значительном количестве содержатся в цитоплазме и дают положительную реакцию на пероксидазу. После деления из промиелоцита образуются клетки еще меньших размеров и с бо­ лее плотным ядром, имеющим чаще всего овальную форму, — миелоциты. В цитоплазме миелоцитов наряду с первичной (азурофильной) зернистостью образуются и содержатся вторичные (специфические) гранулы, в соответствии с особенностями кото­ рых удается отчетливо различать нейтрофильные, эозинофильные

ибазофильные миелоциты.

Вразвитии гранулоцитов миелоциты являются завершающими клетками, способными к митотическому делению, после которого они созревают, последовательно превращаясь в метамиелоциты, палочкоядерные и сегментоядерные клетки. Эти этапы созревания характеризуются некоторыми общими морфологическими измене­ ниями: уменьшением клетки в размерах, изменением формы ядра от овальной (миелоциты) через бобовидную (метамиелоциты) и палочковидную к расчлененной на дольки (сегментоядерные) и окончательным оформлением в цитоплазме соответствующей спе­ цифической зернистости. Сегментоядерные гарнулоциты поступа­ ют из костного мозга в кровяное русло, циркулируют в нем 8— 12 ч, после чего проникают в ткани, где выполняют специфические функции и погибают. Показано, что для эозинофилов тканевая фаза их жизни продолжается около 10 сут, базофилы же погиба­ ют очень быстро.

Развитие моноцитов (моиоцитопоэз). Клетки моноцитарного ряда образуются в костном мозге из стволовых клеток через ста­ дии полустволовых клеток (КОЕ—ГЭММ и КОЕ—ГМ), из кото­ рых возникают унипотентный предшественник (КОЕ—М) и затем монобласты. Немногочисленные м о н о б л а с т ы трудно отличимы от других бластных форм в красном костном мозге. После того как в их цитоплазме сформируются компоненты комплекса Голь­ джи и образуются азурофильные гранулы, клетки превращаются в промоноциты и моноциты. Последние выходят в кровоток, а затем, проникая в ткани, дают начало незрелым, а позднее зрелым мак­ рофагам.

Последовательное развитие клеток линии моноцитов — макро­ фагов из монобластов представлено на схеме.

Монобласт — нромоноцит — моноцит — незрелые — зрелые

макрофаги макрофаги Развитие лимфоцитов. Лимфоцитопоэз — один из наиболее

сложных процессов дифференцировки стволовых кроветворных клеток. Важная особенность этого процесса состоит в том, что раз­ вивается сходная морфологически, но разнородная в функциональ­ ном отношении клеточная популяция. С участием различных ор­ ганов поэтапно осуществляется формирование двух тесно связан­ ных при функционировании линий клеток — Т- и В-лимфоцитов. В красном костном мозге образуются родоначальные лимфоидные клетки, общие как для Т-, так и для В-лимфоцитов. В централь­ ных лимфоидных органах (тимусе, фабрициевой сумке) лимфоци­ топоэз зависит от наличия жизнеспособных костномозговых пред­ шественников. В периферических лимфоидных органах (лимфа­ тические узлы, селезенка, лимфоидные образования слизистых оболочек) лимфоцитопоэз является антигензависимым процессом.

Развитие кровяных пластинок (тромбошттопоэз). Образование кровяных пластинок происходит в красном костном мозге и свя­ зано с развитием в нем особых гигантских клеток — м е г а к а ­ р и о ц и т о в . Мегакариоцитопоэз состоит из следующих стадий: •стволовая клетка (СК) — полустволовые клетки (КОЕ—ГЭММ и КОЕ—МГЦЭ) — унипотентные предшественники (КОЕ— МГЦ) — мегакариобласт — промегакариоцит — мегакариоцит. По мере созревания, в результате своеобразной многократной эндометотической репродукции, формируются крупные клетки (40— 50 мкм), содержащие в многолопастном ядре до 32—64 хромосом­ ных наборов. В развивающихся мегакариоцитах, в цитоплазме образуются система микрофиламентов и микротрубочек, а также специфические гранулы. На заключительных этапах с участием •формирующейся системы из гладких мембран происходит фраг­ ментация цитоплазмы мегакариоцитов на обособленные участки— кровяные пластинки, которые через стенки синусоидов красного костного мозга попадают в кровоток. После отсоединения пласти­ нок вокруг оставшегося ядра мегакариоцитов возникает новая цитоплазма. Полагают, что в каждом мегакариоците красного костного мозга совершается циклический процесс развития не­ скольких поколений кровяных пластинок.

Эмбриональное кроветворение

В течение эмбрионального периода развития организма происхо­ дит последовательная смена локализации кроветворения. На са­ мых ранних этапах клетки крови образуются за пределами заро­ дыша, в мезенхиме стенки желточного мешка, где формируются скопления — к р о в я н ы е о с т р о в к и . Центральные клетки островков округляются, обособляются и преобразуются в стволо­ вые кроветворные «летки. Периферические клетки островков рас-