4. Специальные (элективные) питательные среды(15 баллов).

Среды для выращивания анаэробных микробов. Мясопептонный печеночный бульон Кита - Тароцци (МППБ). Свежую или замороженную пе­чень (лучше крупного рогатого скота) режут на мелкие куски, заливают равным по массе количеством водопроводной воды, варят в течение часа, фильтруют через ва­ту и добавляют к 1 части полученного экстракта 3 части мясопептонного бульона. Смесь нагревают до кипения, добавляют химически чистую поваренную соль (на 1 л среды 1,25 г) и доводят рН до 7,6—7,8, после чего кипя­тят в течение 15 мин и фильтруют через бумажный или увлажненный ватный фильтр. К профильтрованному бульону добавляют мелко нарезанные кусочки (по 1,5— 2 г) печени, из расчета на 1 л бульона 100 г печени (печень предварительно очищают от пленок и промыва­ют водой). В пробирку помещают несколько таких ку­сочков, наливают высоким столбиком 7—10 мл бульона, на поверхность его наслаивают вазелиновое или парафи­новое масло.

Бульон с кусочками печени стерилизуют под избы­точным давлением 0,1 МПа в течение 30 мин. С целью удаления из пробирки кислорода перед посевом среду кипятят 10 мин и быстро охлаждают водой.

Полужидкий агар для анаэробов. К МПБ добавляют 0,25—0,75% агар-агара и 1% глюкозы; рН среды 7,4. Среду разливают высокими столбиками в про­бирки. Стерилизуют дробно текучим паром по 15—20 мин в течение 3 дней.

Среды для выращивания молочнокислых бактерий. Молоко (цельное). Нагревают до кипения. Наливают в тубусную склянку и ставят на 10—20 ч в холодное место для отстаивания сливок. По истечении этого вре­мени через кран тубуса разливают обезжиренную часть молока по пробиркам, закрывают ватными пробками. Стерилизуют дробно при 100° С три дня по 20 мин или при 112° С однократно 30 мин.

Обезжиренное молоко. Для получения обез­жиренного молока цельное молоко сепарируют и далее поступают так же, как при использовании цельного молока.

Гидролизованное молоко (по Богданову). Берут 1 л прокипяченного и остуженного до 45° С обезжиренного молока, устанавливают рН 7,6—7,8, добавляют 0,5 г порошка панкреатина (разведенного предвари­тельно в небольшом количестве теплой воды) или 2—3 г измельченной поджелудочной железы и через несколько минут 5 мл хлороформа. После этого бутыль тщательно встряхивают, плотно закрывают корковой пробкой и по­мещают на 3 суток в термостат при температуре 40° С при ежедневном встряхивании жидкости. По истечении указанного срока с целью удаления хлороформа бутыль открывают, жидкость фильтруют и разбавляют в 2—3 раза водопроводной водой. Доводят рН среды до 7,0— 7,2 и стерилизуют.

Агар из гидролизованного м о л о к а. К гидролизованному молоку прибавляют 1,5—2% агара, рас­плавляют, разливают по пробиркам и стерилизуют под избыточным давлением 0,1 МПа в течение 15 мин. На этой среде хорошо растут молочнокислые палочки.

Сывороточный агар. На 100 мл водопроводной воды берут 7,5 г агара, кипятят до полного растворения, добавляют воды до первоначального объема (т. е. в объе­ме, равном объему испарившейся воды), прибавляют 400 мл заранее приготовленной молочной сыворотки, подвергают действию текучего пара в течение 30 мин, фильтруют через слой ваты, разливают по пробиркам и стерилизуют под давлением 0,05 МПа в течение 30 мин.

Капустная среда. 200 г измельченной капусты (или люцерны) заливают 100 мл воды и кипятят в кастрюле 10 мин, отжимают через двойной слой марли. Полученную жидкость фильтруют и разводят в 2 раза водопроводной водой. Добавляют 2% глюкозы и 1% пептона, разливают по пробиркам и стерилизуют три избыточ­ном давлении 0,05 МПа в течение 15 мин.

Среда для выращивания осмофильных дрожжей. Примерно в 1 л дистиллированной воды вносят 200 г предварительно подогретого меда, 1 г двуфосфорнокислого калия, 0,5 г сульфата магния, 0,5 г виннокислого аммония, 0,1 г хлористого натрия и 0,1 г хлористого ка­лия. Все компоненты смешивают и стерилизуют под из­быточным давлением 0,1 МПа в течение 20 мин.

Среда для выращивания галофилов. Используют обычные мясопептонные среды с добавлением от 10—15 до 20—30% поваренной соли. Кроме того, при изготовле­нии плотных питательных сред увеличивают и процент­ное содержание агара. Стерилизацию проводят под из­быточным давлением 0,1 МПа в течение 20 мин.

Среды обогащения. Среда Мюллера. К 4,5 г химически чистого мела, предварительно простерилизованного сухим жаром, добавляют 90 мл МПБ и стери­лизуют под избыточным давлением 0,1 МПа в течение-20 мин. Готовят: а) раствор гипосульфита (50 г чистого кристаллического гипосульфита заливают до 100 мл дистиллированной водой, стерилизуют текучим паром в течение 30 мин); б) раствор йода (20 г металлического йода и 25 г йодистого калия заливают до 100 мл дистил­лированной водой). Перед посевом к бульону с мелом стерильно добавляют 10 мл раствора гипосульфита и 2 мл раствора йода. При добавлении каждого ингредиента смесь взбалтывают. Разливают по стерильным пробиркам или колбам.

Среда Киллиана. К 100 мл обычного МПБ стерильно добавляют перед использованием 1 мл водного раствора (1:1000) бриллиантового зеленого.

№10ЕМТИХАН БИЛЕТІ / ЭКЗАМЕНАЦИОННЫЙ БИЛЕТ

1. Выполните тестовые задания (30 баллов)

1 Какое количество биомассы дрожжевых клеток в пересчете на сухое вещество можно получить при выращивании кормовых дрожжей в 1 м3 питательной среды за 1 ч? A) около 3кг.

2 Способность, каких культур используют для микробиологического получения аминокислот? A) культуры ауксотрофных мутантов.

3 Какое сырье используют для культивирования микроорганизмов? D) дешевое и недефицитное сырье, а также отходы промышленности.

4 Для получения каких молочных продуктов используют микробиологический синтез? D) сметаны, творога и сыра.

5 Микробиологическая трансформация – это… ? A) превращение молекул органических веществ с помощью микроорганизмов.

6 Какое количество составляет сухая клеточная масса микроорганизмов от общей массы? E) 15-25%.

7 Какое количество углерода содержится в сухой части биомассы? A) 46-50%.

8 Какое количество нуклеиновых кислот (РНК и ДНК) содержит микробная биомасса? C) 5-30%.

9 Какое количество сухой биомассы приходится на белки? A) 30—80

10 Аминокислотный состав белков некоторых микроорганизмов близки к …. A) казеину

11 Для синтеза каких витаминов используют метаноокисляющие бактерии? D) В12.

12 Температура гибели большинства вегетативных микроорганизмов? A) 700С.

13 Для развития ацидофильных микроорганизмов реакция среды (рН) равна? B) 1,5-3,5.

14 Стерильной называют среду… C) в которой, отсутствуют живые микроорганизмы.

15 Чем выше температура и влажность клеточной массы, тем выше? A) летальность.

16 Дезинфекция — уничтожение патогенной микрофлоры с помощью… C) химических веществ

17 В культуральной жидкости, полученной после ферментации, суспендированы E) микробная биомасса, остатки питательной среды и экстрацеллюлярные метаболиты.

18 Методами химической технологии из культуральной жидкости получают… E) биомассу или нужное вещество — спирт, кислоту, аминокислоту антибиотики и пр.

19 При использовании метода поверхностных культур, на каких средах выращивают микроорганизмы? E) твердых средах или на жидких средах, залитых тонким слоем (2—20 см) в специальные кюветы.

20 Какой объем питательной среды при периодическом процессе культивирования загружают в аппарат? A) весь объем.

21 За время культивирования изменяется…. A) состав питательной среды.

22 Пробирки с чистыми культурами хранят в холодильнике при температуре... D) 0-4оС.

23 Какие методы используют для выращивания аэробных микроорганизмов? E) глубинный и поверхностный

24 В микробиологическом синтезе большое значение имеет…. A) реакция рН среды.

25 Источниками азота в питательной среде могут быть…. E) белки, пептиды, аминокислоты, соли аммония или аммиака, нитраты, а также атмосферный азот.

26 Какое количество азота в питательной среде остается неиспользованным? A) 5%.

27 Большинство гетеротрофных микроорганизмов хорошо развивается на среде…. B) с дрожжевым экстрактом или автолизатом.

28 Для выращивания дрожжей, бактерий и плесневых грибов широко используют среды с… A) солодовым или пивным суслом

29 Если на клетки микроорганизмов воздействуют слишком высокие концентрации веществ в растворе, может произойти… A) плазмолиз.

30 Для анаэробных микроорганизмов наименьшее и наивысшее значение рН равно. B) 0-12.