Определение концентрации триацилглицеридов (таг) в сыворотке крови энзиматическим колориметрическим методом

Принцип метода:

ТАГ ^липаза→ глицерин + жирные кислоты

Глицерин + АТФ ^{глицеролкиназа}→ глицерол-3-фосфат + АДФ

Глицерол-3-фосфат + О₂ ^ГФО→ диоксиацетонфосфат + 2Н₂О₂

Н₂О₂ + 4-аминоантипирин + 4-хлорфенол ^{пероксидаза}→ хинонимин + 4Н₂О

Концентрация хинонимина, определяемая фотометрически, пропорциональна концентрации триацилглицеридов в пробе.

Реактивы: 1) TRIS буфер, АТФ, липаза, глицеролкиназа, пероксидаза, Мg²⁺, глицерофосфатоксидаза, 4-хлорфенол, 4-аминоантипирин; 2) ТАГ – калибратор с концентрацией ТАГ 2,29 ммоль/л.

Ход работы: внести в пробирки:

	Опытная проба	Калибровочная проба	Контрольная проба
Сыворотка крови	0,02 мл	-	-
Н2О дистил.	-	-	0,02 мл
Калибратор	-	0,02 мл	-
Рабочий реагент	1,0 мл	1,0 мл	1,0 мл

Пробы перемешать, инкубировать 10 мин при 18-25⁰ С. Определить оптические плотности опытных (Д_оп) и калибровочной (Д_к) проб против контрольной пробы при длине волны 546 нм (490 – 550 нм). Окраска стабильна в течение 1 часа.

Результаты: Д₁ =

Д₂ = Д_к =

Содержание триацилглицеридов (ммоль/л) рассчитать по формуле:

С = Д₁/Д_к х 2,29

С₁ =

С₂ =

Норма: 0,15–1,71 ммоль/л. Группа риска: 1,71–2,28 ммоль/л. Патология > 2,28 ммоль/л.

Выводы:

Клинико-диагностическое значение определения тг в сыворотке крови

Физиологическая гипертриглицеридемия может развиться: а) после приема пищи и может продолжаться 12-14 часов (ее степень зависит от характера и количества пищи); б) во 2-м и 3-м триместре беременности.

Патологическая гипертриглицеридемия по своим патогенетическим характеристикам может быть дифференцирована на первичную и вторичную. Первичная обусловлена генетическими нарушениями метаболизма липопротеинов или усиленной субстратной индукцией (переедание). Нарушения обмена ТАГ, возникающие как осложнение основного патологического процесса, относят ко вторичной гипертриглицеридемии. Повышение концентрации ТАГ отмечается при атеросклерозе, инфаркте миокарда, стенокардии, метаболическом синдроме, сахарном диабете, алкоголизме, гипотиреозе, гипертонической болезни, желчекаменной болезни, панкреатите и др.

Гипотриглицеридемия отмечается при недостаточном питании, синдроме мальабсорбции, нарушении функции щитовидной железы, острых кишечных инфекциях, приеме некоторых лекарственных препаратов (ниацин, фибраты и др.).

Тестовый контроль по теме «Строение, классификация липидов. Переваривание липидов в желудочно-кишечном тракте».

Тест 1

ВЫБЕРИТЕ ВСЕ ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ

Желчные кислоты участвуют в:

а) эмульгированиии жиров

б) активации панкреатической липазы

в) мицеллообразовании

г) активации тканевых липаз

д) снижении поверхностного натяжения на границе "вода - жир"

Тест 2

ВЫБЕРИТЕ ВСЕ ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ

Глицерофосфолипиды построены из:

а) глицерола

б) моносахарида

в) жирных кислот

г) азотистых спиртов

д) фосфорной кислоты

Тест 3

ВЫБЕРИТЕ ВСЕ ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ

Триглицериды построены из:

а) глицерола

б) сфингозина

в) жирных кислот

г) азотистых спиртов

д) моносахарида

Тест 4

ВЫБЕРИТЕ ПРАВИЛЬНЫЙ ОТВЕТ

Глицерофосфолипидам характерны свойства молекул:

а) гидрофобных

б) гидрофильных

в) амфифильных

г) нейтральных

д) инертных

Тест 5

ВЫБЕРИТЕ ВСЕ ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ

Критериями пригодности жира в пищу являются :

а) кислотное число

б) перекисное число

в) акролеиновая проба

г) температура плавления

д) число омыления

Тест 6

УСТАНОВИТЕ СООТВЕТСТВИЕ

(для каждого вопроса - несколько правильных ответов, каждый ответ может использован один раз)

Транспортная форма: Характеристика:

1)мицеллы а) образуются в просвете кишечника

2)хиломикроны б) образуются в энтероцитах

в) необходимы для всасывания липидов

г) переносят экзогенные липиды из

энтероцитов в печень и жировую ткань

Тест 7

ВЫБЕРИТЕ ВСЕ ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ

Парные желчные кислоты - это:

а) гликохолевая

б) дезоксихолевая

в) таурохолевая

г) литохолевая

д) хенодезоксихолевая

Тест 8

ДОПОЛНИТЕ ОТВЕТ.

Холестерин располагается в __________________ слое мицеллы.

Тест 9

УСТАНОВИТЕ СТРОГОЕ СООТВЕТСТВИЕ

Фермент поджелудочной железы: Субстрат:

1) липаза а) лизофосфолипиды

2) фосфолипаза А2 б) триацилглицериды

3) холестеролэстераза в) фосфолипиды

4) лизофосфолипаза г) эфиры холестерина

д) глицерофосфохолин

Тест 10

ДОПОЛНИТЕ ОТВЕТ.

Первичные желчные кислоты образуются в_________ из ___________.

Тест 11

ДОПОЛНИТЕ ОТВЕТ.

Вторичные желчные кислоты образуются из _________ в ___________.

Тест 12

ДОПОЛНИТЕ ОТВЕТ.

Вещества, построенные из сфингозина, жирной кислоты и углеводов

называются_______________.

Тест 13

ДОПОЛНИТЕ ОТВЕТ.

Вещества, построенные из сфингозина, жирной кислоты, фосфорной

кислоты и азотистого основания называются _________________.

Тест 14

ДОПОЛНИТЕ ОТВЕТ.

Биороль вторичных желчных кислот заключается в выведении

из организма__________________.

Тест 15

УСТАНОВИТЕ ПРАВИЛЬНУЮ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ

Порядок биохимических процессов, происходящих с экзогенными

липидами в желудочно-кишечном тракте:

а) включение в состав мицелл

б) ферментативный гидролиз

в) всасывание из полости кишечника в энтероцит

г) включение в состав хиломикронов

д) ресинтез липидов

Тест 16

УСТАНОВИТЕ СООТВЕТСТВИЕ

(для каждого вопроса - один или несколько правильных ответов, каждый ответ может использован один или несколько раз)

Липид	Выполняемая функция
1) ТАГ 2) сфингомиелин 3) фосфатидилхолин 4) холестерин	а) источник для синтеза желчных кислот б) резервный источник энергии в) структурный компонент биомембран г) компонент максимально представлен в миелине и мембранах клеток мозга д) источник эндогенной воды

Тест 17

ВЫБЕРИТЕ ВСЕ ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ.

Холестерин необходим для синтеза:

а) стероидных гормонов

б) желчных кислот

в) эссенциальных жирных кислот

г) холекальциферола

д )токоферола

Тест 18

ВЫБЕРИТЕ ПРАВИЛЬНЫЙ ОТВЕТ.

Переваривание жиров требует участия:

а) ЛП-липазы, желчи, НСО₃ , холестеролэстеразы

б) панкреатической липазы, фосфолипаз, холестеролэстеразы, желчи

в) панкреатической липазы, амилазы, желчи, холестеролэстеразы

г) желчи, фосфолипаз, липооксигеназы, холестероэстеразы

д) панкреатической липазы, пепсина, желчи, амилазы

Тест 19

ВЫБЕРИТЕ ВСЕ ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ.

Незаменимые факторы питания - это:

а) пальмитиновая кислота

б) линолевая кислота

в) сфингомиелин

г) холестерин

д) линоленовая кислота

Тест 20

УСТАНОВИТЕ СТРОГОЕ СООТВЕТСТВИЕ.

Класс жирных кислот Жирная кислота

1)моноеновые а) арахидоновая

2)диеновые б) линоленовая

3)триеновые в) линолевая

4)тетраеновые г) олеиновая

д)пальмитиновая

Тест 21

ДОПОЛНИТЕ ОТВЕТ.

Продуктами переваривания ТАГ являются:

__________________ и _______________________ .

Тест 22

ДОПОЛНИТЕ ОТВЕТ.

Переваривание фосфатидилхолина завершается образованием:

_________________ и _____________________ .

Тест 23

ДОПОЛНИТЕ ОТВЕТ.

Переваривание эфиров холестерина завершается образованием:

_______________ и _________________ .

Тест 24

ВЫБЕРИТЕ ПРАВИЛЬНЫЙ ОТВЕТ.

Эстерификация ХС в энтероцитах происходит при участии фермента:

а) ЛХАТ - лецитинхолестеролацилтрансферазы

б) ХЭ - холинэстеразы

в) АХАТ - ацилКоАхолестеролацилтрансферазы

г) АХЭ – ацетилхолинэстеразы

д) холестеролэстеразы

Тест 25

ВЫБЕРИТЕ ВСЕ ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ.

Апопротеины в составе хиломикронов:

а) апо В-100

б) апо В -48

в) апо А1

г) апо С 2

д) апо Е

Тест 26

ДОПОЛНИТЕ ОТВЕТ.

Процесс образования липидов в энтероцитах называется __________.

Тест 27

ДОПОЛНИТЕ ОТВЕТ.

Транспорт липидов из стенки кишечника к органам осуществляется

_________________ .

Тест 28

ДОПОЛНИТЕ ОТВЕТ.

Транспорт экзогенных липидов из просвета кишечника в энтероциты осуществляется _______________ .

Тест 29

УСТАНОВИТЕ СТРОГОЕ СООТВЕТСТВИЕ.

Реакция глицеролфосфатного пути ресинтеза ТАГ	Фермент
1) образование глицерол-3-фосфата 2) образование фосфатидата 3) образование 1,2-диацилглицерола	а) ацилКоАтрансфераза б) ацилКоАсинтетаза в) фосфатидатфосфатаза г) глицеролкиназа

Тест 30

ДОПОЛНИТЕ ОТВЕТ.

Первой реакцией ресинтеза жиров является реакция активации жирной кислоты с образованием _____________, катализируемая ферментом _______________ .

ОТВЕТЫ:

1 - а,б,в,д 2 - а,в,г,д 3 - а,в 4 - в 5 - а,б,в 6 - 1ав 2бг 7 - а,в 8 – наружном 9 - 1б 2в 3г 4а 10 - печени, холестерина 11 - первичных, кишечнике 12 - гликолипидами 13 – сфингомиелины 14 - холестерина 15 - бавдг

16 - 1бд, 2вг, 3в, 4ав 17 - а,б,г 18 - б 19 - б,д 20 - 1г,2в, 3б, 4а 21 – жирная кислота и 2-моноглицерид 22 – жирная к-та и глицерофосфохолин 23 – жирная кислота и холестерин 24 - в 25 - б,г,д 26 - ресинтезом 27 - хиломикронами 28 - мицеллами 29 - 1г, 2а, 3в 30 - ацилКоА , ацилКоАсинтетазой