Rabochaya_tetrad_-_4_Virusologia_Chastnaya_bakteriologia

РАБОЧАЯ ТЕТРАДЬ ПО МИКРОБИОЛОГИИ

ВИРУСОЛОГИЯ. ЧАСТНАЯ БАКТЕРИОЛОГИЯ

Составители:

Профессор, д.м.н.А.Г.Бойцов, доценты: к.м.н. А.В. Сосунов, к.м.н. А.А. Порин.

© Коллектив авторов, 2009

1

План проведения практических занятий

Примечание: Буквой #С# в протоколах обозначены задания, выполняемые в ходе самостоятельной подготовки во внеаудиторное время.

Буквой #А# – самостоятельная работа студента, выполняемая в аудитории.

2

ЦЕЛЬ: Получить представление о биологии вирусов, вирусных инфекциях, методах диагностики, лечения и профилактики вирусных заболеваний.

ОСНОВНЫЕ ВОПРОСЫ, РАЗБИРАЕМЫЕ НА ЗАНЯТИИ:

1.История открытия вирусов.

2.Место вирусов в биосфере. Генетический паразитизм вирусов, вироидов, прионов. Теории происхождения вирусов.

3.Морфология и физиология вирусов:

-форма вириона, размер, методы определения;

-строение вириона: нуклеопротеид, капсид, капсомеры, суперкапсид;

-характеристика нуклеиновых кислот, вирусные белки, ферменты и их роль;

-этапы взаимодействия вируса с чувствительной клеткой, тропизм вирусов;

-формы вирусной инфекции: очаговые и генерализованные, продуктивные и абортивные, латентное носительство, персистенция, вирогения, вирусный канцерогенез.

4.Классификация вирусов (тип НК, строение генома, тип симметрии, число капсомеров, наличие суперкапсида, форма, размер, тропизм, антигены, экология - хозяева, переносчики, пути передачи).

5.Методы лабораторной диагностики вирусных инфекций.

6.Основные этапы вирусологического исследования:

-методы культивирования вирусов, феномены, указывающие на наличие вирусов в организме животного, курином эмбрионе, культуре клеток;

-титрование вирусов;

-идентификация (серотипирование) вирусов.

7.Противовирусный иммунитет:

-видовая резистентность;

-неспецифические механизмы резистентности (вирусные ингибиторы, интерферон, комплемент, фагоцитоз);

-приобретенный иммунитет (гуморальные и клеточные механизмы).

8.Пути передачи вирусных инфекций.

9.Этиотропное лечение вирусных инфекций (иммунные сыворотки, интерфероны, химиопрепараты).

10.Профилактика вирусных инфекций:

-неспецифическая;

-специфическая.

11.Индикация патогенных вирусов в объектах внешней среды.

3

#С# ОСНОВНЫЕ ТЕРМИНЫ:

Вирион -____________________________________________________________

Структурные белки -__________________________________________________

Неструктурные белки -________________________________________________

Капсид -____________________________________________________________

Капсомеры -_________________________________________________________

Суперкапсид (липидная оболочка) –_____________________________________

Транскрипция -______________________________________________________

Трансляция -_________________________________________________________

Репликация -_________________________________________________________

Включения -_________________________________________________________

Вирогения -__________________________________________________________

Персистенция -_______________________________________________________

Хроническая вирусная инфекция -_______________________________________

Латентная вирусная инфекция -_________________________________________

Медленная вирусная инфекция -________________________________________

Вироиды____________________________________________________________

Прионы_____________________________________________ ________________

#С# ТЕОРИИ ПРОИСХОЖДЕНИЯ ВИРУСОВ

1.________________________________________________________________

2.________________________________________________________________

3.________________________________________________________________

4

#С# РЕАЛИЗАЦИЯ ГЕНЕТИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА

() ДНК

#С# МЕХАНИЗМЫ ПЕРЕДАЧИ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ

Естественные

1.

2.

3.

4.

Искусственные

5

МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ

I. ЭКСПРЕСС ДИАГНОСТИКА

1.Выявление вирусов или их АГ в исследуемом материале методами: иммунофлюоресцентным; иммуноферментным; радиоиммунным; РСК; РНГА; РП; иммунная электронная микроскопия (ИЭМ), выявление вирусных НК в ПЦР.

2.Выявление специфических включений в пораженных вирусами клетках : тельца Бабеша-Негри, Пашена и др.; риноцитоскопия.

II. ВИРУСОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД

Исследуемый материал (фекалии, носоглоточные смывы, секционный

материал и др.) центрифугируют, фильтруют, обрабатывают для подавления бактериальной и грибковой микрофлоры антибиотиками

ЗАРАЖАЮТ СЕРИЮ

ОЦЕНИВАЮТ ФЕНОМЕНЫ, УКАЗЫВАЮЩИЕ НА ПРИСУТСТВИЕ

ВИРУСА:

ТИТРОВАНИЕ ВЫДЕЛЕННОГО ВИРУСА (выбор рабочей дозы)

ИДЕНТИФИКАЦИЯ ВЫДЕЛЕННОГО ВИРУСА Используют диагностические иммунные сыворотки в РН, РТГА, РСК, цветной пробе Солка, РТГАдс, в реакции подавления бляшкообразования и др.

Выделение, титрование и идентификация вируса проводятся с использованием одного и того же феномена.

6

ОСНОВНЫЕ ЭТАПЫ ВИРУСОЛОГИЧЕСКОГО МЕТОДА ДИАГНОСТИКИ

КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ВИРУСОВ СТРОЕНИЕ КУРИНОГО ЭМБРИОНА

#С# Обозначьте на рисунке основные структурные элементы куриного эмбриона. Укажите стрелками возможные пути введения вируссодержащего материала.

#С# Феномены, позволяющие выявить вирус в курином эмбрионе

1.__________________________________;

2.__________________________________;

3.__________________________________;

4.__________________________________.

ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ И СОЛЕВЫЕ РАСТВОРЫ ДЛЯ КУЛЬТУР КЛЕТОК

7

I.ПЕРВИЧНО-ТРИПСИНИЗИРОВАННЫЕ – фибробласты куриного эмбриона (ФК), фибробласты эмбриона человека (ФЭЧ), клетки почки эмбриона

человека и т.д.

II. ПОЛУПЕРЕВИВАЕМЫЕ – получают из легкого или мышечной ткани эмбриона человека.

III. ПЕРЕВИВАЕМЫЕ – HeLa (карцинома шейки матки), Hep-2 (карцинома гортани человека), ВНК-21 (почки хомячка) и др.

КОНТРОЛЬНЫЕ МЕРОПРИЯТИЯ ПРИ РАБОТЕ С КУЛЬТУРАМИ КЛЕТОК:

1.Бактериологический контроль;

2.Контроль на вирусологическую стерильность;

3.Цитогенетический контроль (количественная и качественная характеристика хромосомного аппарата).

#А# ФЕНОМЕНЫ, ПОЗВОЛЯЮЩИЕ ВЫЯВИТЬ ВИРУС

ВКУЛЬТУРЕ КЛЕТОК

I.ЦПЭ (ЦПД) – цитопатический эффект (действие).

8

II. Цветная проба Солка

Принцип метода: рост культуры клеток в питательной среде сопровождается накоплением кислых продуктов метаболизма и изменением рН, что визуально проявляется изменением цвета индикатора. При размножении ряда вирусов клетки погибают, накопления продуктов метаболизма и изменения цвета индикатора не происходит.

III. Выявление специфических включений Бабеша-Негри в клетках мозга людей и животных погибших от бешенства

Тельца Бабеша-Негри в клетках мозга. Окраска по Муромцеву-Селлеру. Увеличение х 630.

IV. Феномен гемадсорбции

9