Rabochaya_tetrad_-_4_Virusologia_Chastnaya_bakteriologia

Принцип метода: контакт пораженных вирусом клеток с эритроцитами приводит к адсорбции последних на клеточной поверхности, что можно выявить при малом увеличении микроскопа. Не пораженные вирусом клетки эритроциты не адсорбируют. Реакцию гемадсорбции используют для раннего обнаружения вирусов в культуре

V. Образование бляшек (феномен Дюльбекко)

Принцип метода: монослой клеток после заражения вирусом заливают слоем полужидкого агара, в состав которого входят питательная среда и краситель – нейтральный красный. В тех зонах монослоя, где происходит размножение вирусов, образуются группы дегенерированных клеток, которые не окрашиваются и выглядят на красном фоне в виде прозрачных пятен (бляшек).

VI. Феномен интерференции

Принцип метода: феномен интерференции используют для обнаружения вирусов, не дающих отчетливого ЦПД в культуре клеток. Культуру клеток заражают исследуемым материалом и затем вносят индикаторный вирус (ВВС - вирус везикулярного стоматита). При наличии в исследуемом материале вируса ЦПД индикаторного вируса будет отсутствовать (клетка "занята" искомым вирусом), что оценивают визуально при малом увеличении микроскопа.

VII. Метод флюоресцирующих антител

Принцип метода: ________________________________________________

1.Прямой __________________________________________________________

___________________________________________________________________

___________________________________________________________________

2.Непрямой ________________________________________________________

___________________________________________________________________

___________________________________________________________________

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИНФЕКЦИОННОЙ АКТИВНОСТИ ВИРУСОВ (ТИТРОВАНИЕ)

I этап. Разведение вируссодержащего материала в питательной среде или физиологическом растворе.

II этап. Мерный перенос материала из разведений в:

-пробирки с культурой клеток;

-в куриный эмбрион;

-в организм животного;

-добавление эритроцитов или других ингредиентов.

10

III этап. Учет результатов: титр вируса – максимальное разведение вируссодержащего материала, в котором еще наблюдается ожидаемый феномен (ЦПД, РГА, гибель животного и т.д.). Титр соответствует 1 единице. Титрование необходимо для выбора рабочей дозы вируса, которая в дальнейшем будет использоваться для постановки иммунологических реакций с целью идентификации вируса.

11

ОБЩАЯ СХЕМА ИДЕНТИФИКАЦИИ (СЕРОТИПИРОВАНИЯ) ВЫДЕЛЕННОГО ВИРУСА

I этап. Выделенный вирус в рабочей дозе + диагностическая противовирусная сыворотка в рабочем разведении - контакт при комнатной температуре или при 37° в течение 1 часа.

IIэтап. Перенос смеси выделенного вируса с сывороткой в:

-культуру клеток;

-в организм животного;

-в куриный эмбрион;

-добавление эритроцитов или других ингредиентов.

IIIэтап. Учет результатов (время определяется избранной моделью для

выделения и идентификации вируса и особенностями вируса) – Вид (тип) выделенного вируса определяют в соответствии с нейтрализующим эффектом одной из типоспецифических сывороток, т.е. с отсутствием феномена взаимодействия вируса с культурой клеток там, где сыворотка соответствует виду (типу) выделенного вируса.

III. СЕРОДИАГНОСТИКА

Использование парных сывороток крови больного, выявление нарастания титра антител в реакциях: РСК; РТГА; РН; ИФА; РИА, РНГА и др.

Диагностическим считается 4-х кратное и более нарастание титра антител.

#С# ПРОТИВОВИРУСНЫЙ ИММУНИТЕТ

Видовая резистентность ____________________________________________

____________________________________________________________________

____________________________________________________________________

Факторы неспецифической резистентности _____________________________

____________________________________________________________________

Интерферон _________________________________________________________

____________________________________________________________________

____________________________________________________________________

Противовирусные ингибиторы _________________________________________

____________________________________________________________________

____________________________________________________________________

Комплемент _________________________________________________________

____________________________________________________________________

Фагоцитоз

______________________________________________________________________

______________________________________________________________________

12

Факторы специфического противовирусного иммунитета ________________

___________________________________________________________________

Секреторные противовирусные антитела _______________________________

____________________________________________________________________

____________________________________________________________________

Гуморальные противовирусные антитела _______________________________

____________________________________________________________________

____________________________________________________________________

Клеточные факторы__________________________________________________

____________________________________________________________________

____________________________________________________________________

Этиотропное лечение вирусных инфекций

___________________________________________________________________

Химиопрепараты ____________________________________________________

___________________________________________________________________

___________________________________________________________________

Интерфероны _______________________________________________________

___________________________________________________________________

___________________________________________________________________

Иммунные сыворотки, гамма-глобулины _______________________________

___________________________________________________________________

___________________________________________________________________

___________________________________________________________________

Принципы профилактики вирусных инфекций

Неспецифическая профилактика _____________________________________

__________________________________________________________________

__________________________________________________________________

Специфическая профилактика _______________________________________

__________________________________________________________________

__________________________________________________________________

Индикация патогенных вирусов в объектах внешней среды

__________________________________________________________________

__________________________________________________________________

__________________________________________________________________

13

ТЕМА: Острые респираторные вирусные инфекции (ОРВИ). Грипп.

ЦЕЛЬ: Познакомиться с основными свойствами возбудителей ОРВИ; освоить лабораторную диагностику гриппа и аденовирусных инфекций, принципы леч ения, профилактики; изучить особенности иммунитета.

ОСНОВНЫЕ ВОПРОСЫ, РАЗБИРАЕМЫЕ НА ЗАНЯТИИ:

1.Вирусы, вызывающие ОРВИ.

2.Морфология, репродукция вирусов гриппа.

3.Антигены, изменчивость вирусов гриппа, иммунитет.

4.Пути передачи, патогенез, клиника гриппа.

6.Лечение и профилактика гриппа.

7.Морфология, репродукция аденовирусов.

8.Антигены аденовирусов.

9.Пути передачи, патогенез, клиника аденовирусных инфекций.

10.Иммунитет, профилактика аденовирусных инфекций.

11.Лабораторная диагностика аденовирусных инфекций.

12.Роль сывороточных и секреторных антител в развитии ОРВИ.

#С# ЭТИОЛОГИЯ ОРВИ

Грипп В

14

#С# КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВИРУСОВ ГРИППА

Обозначьте на рисунке основные компоненты вириона и антигены.

__________________

________________

_________________

________________

Форма:_____________________________________________________________

Размеры:___________________________________________________________

Наличие суперкапсида:_______________________________________________

Тип НК:____________________________________________________________

Антигены:__________________________________________________________

___________________________________________________________________

Гемагглютинин:_____________________________________________________

___________________________________________________________________

Нейраминидаза:_____________________________________________________

___________________________________________________________________

Наличие сероваров и серотипов:_______________________________________

16

Шифт:_____________________________________________________________

___________________________________________________________________

Дрейф:_____________________________________________________________

___________________________________________________________________

Методы культивирования:_____________________________________________

___________________________________________________________________

Локализация в организме человека:_____________________________________

___________________________________________________________________

Источник инфекции:_________________________________________________

Пути передачи:______________________________________________________

Патогенез (ведущее звено):____________________________________________

___________________________________________________________________

___________________________________________________________________

Препараты для этиотропной терапии гриппа:

1)Ремантадин –______________________________________________________

___________________________________________________________________

2)Арбидол –_________________________________

___________________________________________________________________

3) Противогрипозный гамма-глобулин –_________________________________

___________________________________________________________________

4) Лейкоцитарный интерферон –________________________________________

___________________________________________________________________

5) Реаферон –_______________________________________________________

___________________________________________________________________

Препараты для специфической профилактики гриппа:

1)вакцина гриппозная инактивированная –_______________________________

___________________________________________________________________

2)живая гриппозная вакцина –_________________________________________

___________________________________________________________________

3) АГХ-вакцина –___________________________________________________

___________________________________________________________________

#А# ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ГРИППА

Показания к проведению лабораторной диагностики гриппа:

___________________________________________________________________

I ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКА

Исследуемый материал – мазки-отпечатки со слизистой оболочки носовых ходов ( РИФ ). Смывы, мокрота, секционный материал - ПЦР.

Метод – РИФ Диагностический препарат –________________________________________

17

___________________________________________________________________

II ВИРУСОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД (целесообразно проводить в первые 3 дня заболевания)

Исследуемый материал:____________________________________________

_____________________________________________________________________

1 этап

Подготовка исследуемого материала:_________________________________

_____________________________________________________________________

2 этап

Заражение 10-11 дневных куриных эмбрионов в аллантоисную и амниотическую полости. Эмбрионы инкубируют 48-72 часа при 33-35°С

3 этап

Вскрытие эмбрионов, отсасывание амниотической и аллантоисной жидкостей в пробирку. Выявление вируса в РГА.

РГА с целью выявления вируса гриппа.

Исследуемый материал:____________________________________________

Принцип метода:__________________________________________________

_____________________________________________________________________

Диагностический препарат:_________________________________________

Вывод:_____________________________________________________________

___________________________________________________________________

4 этап

Титрование вируса для определения рабочей дозы перед постановкой РТГА с целью его идентификации.

Титрование вируса в РГА

Титр вируса –________________________________________________ ________

Рабочая доза для РТГА –______________________________________________

для РСК –_______________________________________________

5 этап

Идентификация (серотипирование) вируса в РСК и/или в РТГА (с помощью РСК можно идентифицировать S-Аг и определить ТИП вируса; с помощью РТГА можно идентифицировать V-Аг и определить ПОДТИП).

19