Rabochaya_tetrad_-_4_Virusologia_Chastnaya_bakteriologia
.pdfИдентификация вируса в РТГА
Принцип метода:__________________________________________________
_____________________________________________________________________
Исследуемый материал:____________________________________________
Диагностический препарат:_________________________________________
_____________________________________________________________________
Дополнительные ингредиенты реакции:_______________________________
_____________________________________________________________________
Диагности- |
|
|
Разведения сыворотки |
|
Контроли |
|
|||||
ческая сы- |
|
1/10 |
1/20 |
1/40 |
1/80 |
1/160 |
сыв. |
вируса |
|
эритр. |
|
воротка |
|
|
|
||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
H1N1 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
H2N2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
H3N2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
B |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Результат: |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Сыворотка Н1N1 ингибирует гемагглютинацию в титре – ____ |
|
||||||||||
__''__ |
H2N2_____''____ ____''________ ___''____________ |
|
|||||||||
__''__ |
H3N2_____''____ ____''________ ___''___ _________ |
|
|||||||||
__''__ |
|
В_______''____ ____''________ ___''___ _________ |
|
||||||||
Вывод:_____________________________________________________________
___________________________________________________________________
III СЕРОДИАГНОСТИКА
Серодиагностика гриппа с помощью РСК
Исследуемый материал:____________________________________________
Диагностический препарат:_________________________________________
___________________________________________________________________
Дополнительные ингредиенты реакции:_______________________________
___________________________________________________________________
1 сыворотка
Диагностикум |
|
Разведения сыворотки |
|
Контроли |
|||||
1/10 |
1/20 |
1/40 |
|
1/80 |
1/160 |
1/320 |
сыв-ки |
д-ма |
|
H1N1 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
H2N2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
H3N2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
B |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
2 сыворотка |
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|||||
Диагностикум |
|
Разведения сыворотки |
|
Контроли |
|||||
|
|
|
|
|
|
|
|
||
1/10 |
1/20 |
1/40 |
|
1/80 |
1/160 |
1/320 |
сыв-ки |
д-ма |
|
H1N1 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
H2N2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
20 |
|
|
|
|
|
H3N2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
B |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Результат: |
|
|
|
|
|
Диагностикум |
|
|
|
Титры антител |
|||||
|
|
1 сыворотка |
|
2 сыворотка |
|||||
|
|
|
|
|
|||||
H1N1 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
H2N2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
H3N2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
B |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Вывод:________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
Серодиагностика гриппа с помощью РТГА
Исследуемый материал:_____________________________________________
______________________________________________________________________
Диагностический препарат:__________________________________________
______________________________________________________________________
Дополнительные ингредиенты реакции:________________________________
_____________________________________________________________________
1 сыворотка
Диагностикум |
|
|
|
Разведения сыворотки |
|
Контроли |
|||||||
|
1/10 |
1/20 |
1/40 |
|
1/80 |
1/160 |
1/320 |
сыв-ки |
|
д-ма |
|||
H1N1 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
H2N2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
H3N2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
B |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
2 сыворотка |
|
|
|
|
|
|
||
Диагностикум |
|
|
|
Разведения сыворотки |
|
Контроли |
|||||||
|
1/10 |
1/20 |
1/40 |
|
1/80 |
1/160 |
1/320 |
сыв-ки |
|
д-ма |
|||
H1N1 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
H2N2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
H3N2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
B |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Результат: |
|
|
|
|
|
|
||
Диагностикум |
|
|
|
|
Титры антител |
|
|
|
|||||
|
|
1 сыворотка |
|
|
2 сыворотка |
|
|||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||
H1N1 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
H2N2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
H3N2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
21 |
|
|
|
|
|
|
|
B
Вывод:_____________________________________________________________
___________________________________________________________________
Сравнительная характеристика возможностей РСК и РТГА при серодиагностике гриппа:__________________________________________
___________________________________________________________________
___________________________________________________________________
АДЕНОВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ
#С# КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА АДЕНОВИРУСОВ
Форма:_____________________________________________________________
Размер:_____________________________________________________________
Наличие суперкапсида:_______________________________________________
Тип НК:____________________________________________________________
Антигены:__________________________________________________________
___________________________________________________________________
Наличие сероваров и серотипов:_______________________________________
Методы культивирования:_____________________________________________
___________________________________________________________________
Локализация в организме человека:_____________________________________
___________________________________________________________________
Источник инфекции:_________________________________________________
Пути передачи:______________________________________________________
Клинические формы аденовирусной инфекции:___________________________
___________________________________________________________________
#А# ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА АДЕНОВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ
1.ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКА
1.РИФ
Исследуемый материал:____________________________________________
___________________________________________________________________
Диагностический препарат:_________________________________________
___________________________________________________________________
2. Цитоскопический метод Принцип метода:__________________________________________________
___________________________________________________________________
___________________________________________________________________
22
Морфологические исследования соскобов с конъюнктивы глаза при аденовирусном конъюнктивите
3. ПЦР
23
II ВИРУСОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД
Исследуемый материал:____________________________________________
____________________________________________________________________
1 этап
Подготовка исследуемого материала:_________________________________
_____________________________________________________________________
2 этап
Заражение культур клеток (HeLa, HЕp-2 и др.). Инкубация в термостате в течение 10 дней с ежедневной микроскопией.
3 этап
Выявление вируса по ЦПД. Пассажи вируса на культурах тканей для дифференциации ЦПД вируса от возможного токсического действия исследуемого материала.
ЦПД аденовирусов на культуре клеток ______.
4 этап
Титрование вируса по ЦПД в культуре клеток для выбора рабочей дозы перед постановкой реакции нейтрализации.
5 этап
Идентификация (серотипирование) вируса в РН.
III СЕРОДИАГНОСТИКА
Исследуемый материал: парные сыворотки. Используемые реакции: РСК, РН, ИФА. Диагностические препараты:
для РСК -________________________________________________________
для РН -__________________________________________________________
Выводы:____________________________________________________________
___________________________________________________________________
___________________________________________________________________
___________________________________________________________________
24
Занятие № 3 |
Дата____________ |
ТЕМА: Энтеровирусные инфекции. Вирусные гепатиты.
Цель: Познакомиться с биологическими свойствами основных представителей семейства Picornaviridae и рода Enterovirus, изучить элементы лабораторной диагностики, лечения, профилактики энтеровирусных инфекций. Изучить классификацию, биологические свойства, особенности распространения и патогенеза, лабораторную диагностику вирусных гепатитов.
ОСНОВНЫЕ ВОПРОСЫ, РАЗБИРАЕМЫЕ НА ЗАНЯТИИ:
1.Классификация пикорнавирусов, энтеровирусов.
2.Строение энтеровирусов и их репродукция.
3.Полиомиелит, эпидемиология, механизм передачи, иммунитет. Специфическая профилактика.
4.Заболевания, вызываемые вирусами ЕСНО и Коксаки, лабораторная диагностика заболеваний, вызванных вирусами полиомиелита, ЕСНО и Коксаки.
5.Классификация вирусных гепатитов (А, В, С, D, Е), основные биологические свойства возбудителей, их значение в структуре инфекционных заболеваний.
6.Вирус гепатита А, патогенез и лабораторная диагностика гепатита А.
7.Вирус гепатита В, патогенез и лабораторная диагностика гепатита В.
8.Специфическая и неспецифическая профилактика гепатитов.
#C# СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЭНТEРОВИРУСОВ
Вирусы |
Вирусы |
Вирусы |
Вирус |
|
Коксаки |
ЕCНО |
|||
полиомиелита |
гепатита А |
|||
|
|
Способы культивирования:
-куриный эмбрион
-культура клеток
-организм лабораторных животных
Наличие сероваров
Источник инфекции
Пути передачи
Роль в патологии человека:
25
#С# КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПИКОРНАВИРУСОВ
Форма:____________________________________________________________
Размер:____________________________________________________________
Наличие суперкапсида:______________________________________________
Тип НК:___________________________________________________________
Устойчивость во внешней среде ______________________________________
ПОЛИОМИЕЛИТ 1. Клинические формы полиомиелита
Клиническая форма инфекции |
Локализация |
Эпидемическое |
|
вируса |
значение |
||
|
|||
|
|
|
|
Инаппаратная (вирусоносительство) |
|
|
|
Абортивная (малая болезнь) |
|
|
|
Непаралитическая (менингеальная) |
|
|
|
Паралитическая |
|
|
|
|
|
|
2. Специфическая профилактика полиомиелита:
Вакцина Солка___________________________________________________
________________________________________________________________
Вакцина Сэбина -_________________________________________________
________________________________________________________________
ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ПОЛИОМИЕЛИТА
I ВИРУСОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД
Исследуемый материал:___________________________________________
1 этап
Обработка исследуемого материала для уничтожения сопутствующей микрофлоры. Материал суспендируют, центрифугируют и обрабатывают антибиотиками.
2 этап
Заражение культур клеток HeLa, ФЭЧ (фибробласты эмбриона человека) и др. Инкубация в течение 3-7 дней с ежедневным осмотром.
26
3 этап
Выявление вируса по ЦПД. Пассажи вируса на культурах клеток для
дифференциации ЦПД |
вируса |
от возможного токсического действия |
|||
исследуемого материала. |
|
|
|
|
|
Нормальные |
|
|
|
ЦПД вируса |
|
Клетки |
HeLa |
|
|
|
полиомиелита |
|
|
|
|
|
|
4 этап
Титрование вируса для выбора рабочей дозы перед постановкой реакции нейтрализации (в цветной пробе Солка)
Результат |
Разведения вируссодержащего материала Контроль культуры |
||||
|
|
|
|
|
клеток |
|
|
|
|
|
|
|
10-1 |
10-2 |
10-3 |
10-4 |
10-5 |
ЦПД +/-
Титр вируса:______________________
Рабочая доза для РН________________
5этап
Идентификация (серотипирование) вируса в РН (в цветной пробе Солка).
1. РН с поливалентной сывороткой.
Исследуемый материал:______________________________________________
Диагностический препарат:___________________________________________
Дополнительные ингредиенты реакции:________________________________
Реакцию инкубируют в термостате в течение нескольких дней. Учет результатов проводят после появления ЦПД в пробирке "Контроль дозы вируса".
|
Опыт (100 доз |
Контроль дозы вируса |
Контроль культуры |
|
вируса + сыворотка |
(100 доз вируса + |
|
Результат |
клеток (культура |
||
|
+ культура клеток) |
культура клеток) |
клеток) |
|
|
|
|
ЦПД |
|
|
|
|
|
|
|
Вывод:____________________________________________________________
__________________________________________________________
__________________________________________________________
27
2. РН с моновалентными сыворотками
|
|
Тип сыворотки |
Контроль |
дозы Контроль |
|
|
|
вируса |
культуры клеток |
||
Результат |
|
|
|
||
I |
II |
III |
|
|
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
ЦПД |
|
|
|
|
|
Вывод:____________________________________________________________ ___
_______________________________________________________________
ЗАКЛЮЧЕНИЕ: _______________________________________________
Вирусы полиомиелита, выделенные из материала от больного направляют в специализированную лабораторию, где проводят дифференциацию вакцинных и «уличных» штаммов. Для этого используют ряд дополнительных тестов, например, сопоставляют интенсивность репродукции вируса при 40° и 23°С. Вакцинные штаммы лучше размножаются при 23°С.
II СЕРОДИАГНОСТИКА Исследования парных сывороток в РН по цветной пробе Солка.
Исследуемый материал:__________________________ ________________
Диагностический препарат:_______________________________________
Дополнительные ингредиенты реакции:_____________________________
1 сыворотка
Живые |
Разведения сыворотки |
|
Контроль |
||
|
|
|
|
||
эталонные |
|
|
|
|
|
1/10 1/20 1/40 |
1/80 |
1/160 |
клеток вируса сыворотки |
||
штаммы |
|||||
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
Полиовирус I |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Полиовирус II |
|
|
|
|
|
Полиовирус III
Результат: титр антител к полиовирусу ___ типа = ________
2 сыворотка
Живые |
|
Разведения сыворотки |
|
|
Контроль |
||||
эталонные |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
1/10 |
1/20 |
1/40 |
1/80 |
|
1/160 |
клеток |
вируса |
сыворотки |
|
штаммы |
|
||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Полиовирус I |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Полиовирус II |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Полиовирус III |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
28 |
|
|
|
|
|
Результат: титр антител к полиовирусу ___ типа = ________
Вывод:_____________________________________________________
ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ЗАБОЛЕВАНИЙ, ВЫЗЫВАННЫХ ВИРУСАМИ EСHO И КОКСАКИ
1. Вирусологический метод
Исследуемый материал (фекалии, носоглоточные смывы) подвергают обычной обработке для вирусологического исследования.
Заражение исследуемым материалом
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Культуры клеток HeLa, ФЭЧ и др. |
|
|
|
|
Мышей-сосунков |
|
|||||||
|
(ЕСНО) |
|
|
|
|
(24-48 час. от рождения) |
|
||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Исследования аналогичны вы- |
|
|
В мозг |
|
Внурибрюшинно |
|
|||||||
делению вируса полиомиелита. |
|
(Коксаки В) |
|
(Коксаки А) |
|
||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Наблюдение до 14 дней; заболевают мыши на 4-7 день. Различия в патологической картине погибших мышей позволяет установить принадлежность вирусов Коксаки к группе А или В.
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
поражение головного мозга (некроз) |
|
диффузное поражение попе- |
||||
изменения в коричневом жире, очаго- |
|
речно-полосатых мышц |
||||
вый миозит, некроз в клетках печени |
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|||
и поджелудочной железе |
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Готовят 10% суспензию из тушек погибших животных
Титрование вируса на мышах-сосунках (выбор рабочей дозы)
Серотипирование выделенного вируса в РН на мышах-сосунках
Доказательство этиологической роли выделенного вируса - постановка РН с парными сыворотками29 больного и вирусом, выделенным от больного