III. Этап. Подтверждающие тесты.
На данном этапе обследования вместо плазмы больного для коррекции гипокоагуляции применяют нормальные фосфолипиды, например отмытые тромбоциты (Тромбоцитин “Технология-Стандарт”). Смешивают равные объемы тромбоцитина и плазмы больного. Если время укорачивается в 2 и более раза, приближаясь к контрольным величинам, то пишут о наличии ингибитора ВА. Иногда нет коррекции с тромбоцитами. Тогда в плазме присутствует ингибитор, но какой – не известно, известно, что не волчаночной природы.
Фирмой “Технология-Стандарт” выпускаются два набора для диагностики АФС “Эксперсс-люпус-тест” и “Люпус-тест”. Набор “Эксперсс-люпус-тест” не дает полной диагностики. Они работают вместе. Существуют методики с противовесными тестами, т.е. ВА-чувствительные и ВА-нечувствительные (ВА+ и ВА-).
В ядовых тестах: текстарин/экариновый индекс, карпан/экриновый индекс, лебетокс/эхитоксовый индекс. Разведенный яд эфы не чувствительный к ВА, а яд гюрзы ВА+.
В фосфолипидзависимых тестах: АПТВ ВА+ и ВА-, ПВ ВА+ и ВА-.
Имея такие противовесные тесты можно в схему обследования не включать корригирующий этап. Каолиновое время остается в диагностике, т.к. оно позволяет выявлять другие виды ингибиторов.
В
2003
г.
Скрининговые тесты
(
I
этап)
Каолиновый С разведеннным ядом С разведеннным С плателином
г юрзы или гадюки Рассела тромбопластином LS
Подтверждающие тесты
(
II
этап)
Лебетокс/эхитоксовый
индекс
Микрофильтрационный
Коррекция
стромой тромбоцитов или эритрофосфатидом
Алгоритм выявления ВА по разработкам Алтайского ЦНИЛ
2005 г.
Скрининговые и противовесные тесты
АПТВ (ВА+)
Лебетоксовый (с
разведенным ядом)
ПВ с разведенным тромбопластином
(ВА+)
АПТВ (ВА+)
Эхитоксовый (с
разведенным ядом)
ПВ с разведенным тромбопластином
(ВА-)
Коррекционные (подтверждающие) тесты
Коррекция
компенсирующими фосфолипидами
Коррекция БТП
Включение в схему противовесных тестов исключает из нее этапа коррегироующих тестов.
Бывает так, что все тесты в норме, кроме одного. В таком случае достоверно поставить диагноз невозможно. Выход один – определять At к фосфолипидам. В норме у здоровых людей бывает повышенный титр At к кардиолипину. Диагностическое повышение титра At к кардиолипину в 3 и более раз.
Расположение по диагностической важности методик: тест с ядом гюрзы и гадюки, далее каолиновое время, АПТВ ВА+ и ВА-, ПВ ВА+ и ВА-. ПВ наиболее устойчиво к удлинению. Яд гадюки Рассела лучше исследовать на коагулометре в оптическом режиме.
АПТВ ВА+ и ВА- одинаково удлиняются при болезни Виллебранда, гепаринотерапии, дефиците факторов свертывания, лечения НАК, но по-разному при АФС. “Экспресс-люпус-тест” дает возможность экспресс диагностики по расчету нормализованного отношения (НО). Принцип расчета:
Чувствительность реагента |
АПТВ здорового |
АПТВ больного |
НО |
|
ВА+ |
37 сек |
85 сек |
0,70-1,19 |
отрицательный |
ВА- |
38 сек |
46 сек |
1,20-1,29 |
сомнительный |
|
85/37=2,3 |
46/38=1,2 |
Более 1,30 |
положительный |
НО |
2,3/1,2=1,92 |
|
|
|
При сомнительном результате нормализованного отношения АПТВ ВА+ и ВА- в тесте “Экспресс-люпус-тест” необходимо делать развернутую (классическую трехэтапную) схему диагностики. Классическая схема дает качественную реакцию: “да” или “нет”.
Сочетание в лабораторной диагностике АФС коагулологического и иммунологического исследований обязательно, т.к. иммунологическое исследование информативно только в 70-80 % случаев. 20-30 % больных с ВА-.