Ход работы.
Налейте в среднюю градуированную пробирку гемометра Сали 0,1 N раствор соляной кислоты до деления 2. Затем в капилляр для взятия крови из хвостовой вены рыбы наберите кровь до круговой метки - 20 мм3. Кончик капилляра опустите в среднюю пробирку гемометра в раствор соляной кислоты и осторожно выдуйте кровь из капилляра с последующим 2-3 кратным всасыванием и выдуванием раствора из капилляра в пробирку. Содержимое пробирки тщательно перемешайте мягкими ударами о ладонь руки нижним концом пробирки и поставьте пробирку в штатив на 5 мин. За это время произойдет разрушение эритроцитов, выход гемоглобина в раствор и образование под влиянием соляной кислоты солянокислого гематина. Через 5 минут в пробирку с помощью пипетки добавляйте по каплям дистиллированную воду, все время тщательно перемешивая раствор и сравнивая его цвет с цветом стандартного раствора в боковых пробирках. Дистиллированную воду добавляйте до того момента, пока цвет раствора во всех пробирках не окажется одинаковым. После этого снимите показания и занесите в рабочую тетрадь. Цифры, соответствующие уровню раствора в средней пробирке, покажут грамм-проценты гемоглобина и единицы гемометра исследуемой крови. На основании полученных результатов сделайте вывод о физиологическом качестве исследуемой рыбы и условиях ее обитания.
Вопросы для контроля.
1. Биологическая роль гемоглобина в организме.
2. Метод количественного определения гемоглобина.
3. Абсолютное и относительное содержание гемоглобина в крови.
5. Определение реакции оседания эритроцитов (роэ)
Цель: Изучение методики определения РОЭ в крови рыб
Материал и оборудование: живая рыба, аппарат Панченкова, фарфоровая чашка или часовое стекло, вата, марля, 5 % раствор лимоннокислого или щавелевого натрия, спирт, эфир.
Задание: I. Отберите кровь из хвостовой вены рыбы.
2. Зарядите аппарат Панченкова и проведите определение РОЭ.
3. Сделайте выводы.
Теоретическое обоснование
Реакция оседания эритроцитов (РОЭ) заключается в склеивании эритроцитов и оседании их на дне сосуда, в котором находится кровь. Эритроциты заряжены отрицательно и, поэтому они, отталкиваясь друг от друга, не склеиваются. Однако, при адсорбции различного рода частиц (например, белка) эритроциты теряют свой заряд, что делает возможным их склеивание с другими эритроцитами. Образовавшиеся комочки эритроцитов начинают оседать на дно сосуда. Оседание эритроцитов происходит потому, что их удельный вес больше, чем удельный вес плазмы. Скорость оседания эритроцитов зависит от белкового состава плазмы, главным образом, от соотношения альбуминов и глобулинов (в норме альбумино-глобулиновый коэффициент А / Г = 1,5 – 2,3). Незначительное изменение этого соотношения вызывает уменьшение или увеличение скорости оседания эритроцитов. Увеличение количества глобулинов ускоряет оседание эритроцитов, что часто бывает при различных патологических процессах и токсикозах. Поэтому РОЭ широко применяется в рыбоводной практике для оценки физиологического качества рыбы и для диагностики различных заболеваний и токсикозов.
Для определена РОЭ пользуются прибором Панченкова, который состоит из нескольких стеклянных, специально проградуированных капилляров, помещенных в штатив. Капилляры закрепляются в строго вертикальном положении между резиновой пробкой и верхней упорной планкой (рис. 14).
