Збереження і оцінка якості клітин

На даний час з тканин людини та інших багатоклітинних тварин отримані тисячі різних клітинних ліній. Багато з них походять від нормальних тканин і володіють певним обмеженим потенціалом подвоєння. Інші лінії клітин можуть розмножуватися необмежено внаслідок того, що вони виникають завдяки змінам у первинній клітинній продукції, або тому, що вони початково отримані з пухлинних тканин. І лінії клітин з обмеженим потенціалом розмноження, і постійні лінії можуть бути розмножені для отримання великої кількості клітин, заморожені і потім охарактеризовані для широкого використання.

Переваги роботи з добре вивченими лініями клітин, не зараженими мікроорганізмами, вважається беззаперечним. На жаль на практиці постійно доводиться мати справу з труднощами, пов’язаними з використанням клітинних ліній. Так відмічені чисельні випадки, коли обмін клітинними лініями між різними лабораторіями приводив до забруднення клітин клітинами інших ліній. Проблема перехресного міжвидового забруднення культивованих ліній клітин людини була поставлена біля 30 років тому і втрати часу та ресурсів, що витікають з циєї проблеми, надзвичайно великі.

Бактерійні і грибкові забруднення, розглянуті вище, являють додаткові труднощі, але у більшості випадків (за винятком мікоплазмового забруднення) вони яскраво проявляються і легко виявляються, і таким чином приводять до менш серйозних наслідків.

Створення банку клітинних ліній

Лінії клітин, що являють інтерес, відбираються вченими і консультантами відповідного банку за результатами постійного аналізу наукової літератури. Зазвичай початкові культури або ампули отримують від донора і розмножують у відповідності до інструкцій для отримання першого “пробного” заморожування. Культури, отримані з пробного матеріалу, піддаються ретельному вивченню згідно відповідній схемі. Якщо за матеріалами випробувань клітини заслуговують на увагу, їх додатково розмножують для отримання запасу для розсіву і запасу для розподілу. Слід підкреслити, що охарактеризований запас для розсіву слугує замороженим “резервуаром” для поповнення запасу при розподілі на протязі багатьох років. Оскільки ампули посівного запасу використовуються для отримання матеріалу для розподілу, отримувач культури може бути впевненим, що всі отримані культури відповідають таким, що отримання 2,5,10 та більш років тому. Це є найбільш критичним моментом у створенні процедури для отримання банку клітин. Проблеми, пов’язані з генетичною нестабільністю, відбором клітинних ліній, старінням і трансформацією, можна вирішувати, якщо строго дотримуватися цього правила.

Робота з усіма первинними культурами і лініями клітин, для яких не показана специфічними методами відсутність домішкових біологічно шкідливих агентів, проводять у спеціальних боксах з посиленим захистом працюючого, що захищає персонал, працюючий з культурами клітин та лабораторію від інфекції та забруднення. Більш того, існують рекомендації щодо дотримання подібних пересторог при роботі з лініями пухлинних клітин людини внаслідок присутності в клітинах онкогенів і показаної можливості трансфекції, принаймні у системі клітинних культур.