Тема 6. Физиология системы крови

ЗАНЯТИЕ 31,32

Определение количества эритроцитов в крови. Определение содержания гемоглобина в крови, вычисление цветового показателя.

Основные вопросы

1.Функция крови. 2. Состав крови. 3. Основные этапы кроветворения: эритропоэз, лейкопоэз, тромбоцитопоэз. 4. Состав и функции плазмы. 5 .Белки плазмы: виды, количество, функции. 6.Основные гомеостатические показатели крови: вязкость, онкотическое давление, осмотическое давление (характеристика и механизмы регуляций). 7. Форменные элементы крови: состав, количество, функции. 8. Жизненный цикл эритроцита. 9. Виды гемолиза. 10. Жизненные циклы лейкоцитов. 11. Структура и функции тромбоцитов. 12. Регуляция эритро-, лейко- и тромбоцитопоэза.

Задача 1.Определение количества эритроцитов в 1мкл крови.

Нормальное среднее содержание эритроцитов в 1 л крови: у мужчин 4,0-5,0* /л; у женщин - 3,7-4,7* /л. Общее количество эритроцитов, циркулирующих в организме взрослого человека – 25* - 30*. Зрелые эритроциты человека не содержат ядра. Главной функцией эритроцитов является транспорт кислорода в составе оксигемоглобина. Кроме этого, эритроциты участвуют в транспорте гормонов, создании вязкости крови, поддержании кислотно-основного состояния и др. Эритроциты непрерывно образуются в костном мозге, созревают, "живут" в кровеносном русле до 120 сут и гибнут вследствие аутоиммунного гемолиза.

Уменьшение количества эритроцитов имеет место при кровотечениях, гемолитических, железо- и BI2 (фолиево)-дефицитной анемиях, лейкозах, метастазах злокачественных новообразований, гипо- и апластических процессах, сопровождающихся пониженной эритробластической функцией костного мозга, и др.

Увеличение количества эритроцитов выявляют при эритремии и эритроцитозах.

О с н а щ е н и е: микроскоп, смеситель для эритроцитов, счетная камера, покровное стекло, спирт, эфир, йод, вата, скарификатор, разводящая жидкость (3 % раствор NaCl).

С о д е р ж а н и е р а б о ты. Смеситель должен быть чистым и обязательно сухим. Погрузите в кровь кончик смесителя с резиновой трубкой и грушей и наберите кровь до отметки "0,5" или “1”. При взятии крови до метки "0,5", а разбавляющего раствора до метки "101" кровь разводится в 200 раз. Если кровь набрана до метки "1", а разводящий раствор до метки "101", происходит разведение в 100 раз.

Кончик капилляра до окончания насасывания крови нельзя вынимать из капли, но и не прижимать к пальцу, чтобы не перекрыть отверстие.

Наберите кровь строго до метки, а если получилось больше, выпустите лишнее на ватку или фильтровальную бумагу. Сразу же по окончании набора крови опустите кончик капилляра в разбавляющую жидкость (3 % раствор NaCl) и наберите ее до метки "101". Все манипуляции следует производить быстро, но аккуратно и точно.

Закончив набор жидкости, переведите смеситель в горизонтальное положение, снимите резиновую трубку, закройте капилляр с обеих сторон большим и указательным пальцами и тщательно перемешайте кровь с жидкостью, встряхивая смеситель.

После этого заполняйте счетную камеру Горяева.

Пробирочный метод. Удобным и достаточно точным является способ разведения крови в пробирках. Для этого в предварительно высушенную чистую пробирку точно отмеривают пипеткой 4 мл разводящей жидкости и осторожно выдувают в нее 0,02 мл капиллярной крови (кровь забирают пипеткой от гемометра Сали). Полученное разведение 1 :202 можно практически принять равным 1:200. Взвесь тщательно перемешивают и затем заполняют камеру.

Подсчет в камере Горяева.

Обычно пользуются камерой Горяева с двумя сетками, разграниченными глубокой поперечной канавкой (рис. 24.2, 1руководства по практич. занятиям). Сбоку от сеток находятся стеклянные прямоугольные пластинки, к которым притирают специальные шлифованные покровные стекла. Сетка Горяева состоит из 225 больших квадратов (15 х 15).

Большие квадраты, расчерченные вертикально и горизонтально на 16 малых квадратов, чередуются с квадратами, разделенными только вертикальными или горизонтальными линиями, и квадратами чистыми, без линий. Глубина камеры равна 1/10 мм, сторона малого квадрата - 1/20 мм; таким образом, объем малого квадрата равен 1/4000 мм. Большие квадраты, состоящие каждый из 16 малых, служат при счете ориентирами.

Перед заполнением камеру и шлифованное покровное стекло вымойте и высушите. Покровное стекло притирайте к камере так, чтобы появились радужные кольца (только при этих условиях соблюдается правильный объем камеры). Каплю разведенной крови внесите пипеткой под притертое покровное стекло камеры. После заполнения камеру оставьте на 1-2 мин в покое для оседания форменных элементов, затем приступайте к подсчету при малом увеличении микроскопа в затемненном поле зрения (диафрагма прикрыта и несколько опущен конденсор).

Эритроциты считайте в пяти больших квадратах (5 * 16 = 80 малых квадратов), расположенных по диагонали, поскольку распределение клеток в камере может быть неравномерным. Для этого под микроскопом отыщите левый верхний большой квадрат (разграфленный), подсчитайте количество находящихся в нем эритроцитов, затем по диагонали вниз и направо найдите следующий разграфленный квадрат и т. д. (рис. 24.2, руководства к практич. занятиям).

Найденное в каждом квадрате число эритроцитов заносите в протокол опыта.

Во избежание повторного подсчета одних и тех же эритроцитов руководствуйтесь следующим правилом : подсчитывайте все эритроциты, находящиеся внутри малого квадрата; нa разграничительных линиях подсчитывают их только тогда, когда они большей своей половиной заходят внутрь квадрата. Клетки, пересеченные разграничительной линией пополам, подсчитывайте лишь на двух сторонах квадрата - левой и верхней; клетки, выходящие большей своей половиной за пределы разграничительных линий, совсем не считайте. Результаты подсчетa эритроцитов в каждом из 5 больших квадратов записывайте отдельно и суммируйте. Для расчета количества эритроцитов в 1 л пользуйтесь следующей формулой:

Х *

где х- количество эритроцитов в 1 л крови; а - сумма эритроцитов, подсчитанных в определенном количестве мальrx квадратов; 4000 - множитель, приводящий результат к объему 1 мкл крови, поскольку объем малого квадрата 1/4000 мкл; б - степень разведения крови (200 раз); в - число мальrx квадратов, в которых считались эритроциты; - количество микролитров в 1 л.

При подсчете в 5 больших (80 малых) квадратах и при разведении крови в 200 раз формула для определения количества эритроцитов в 1 мкл крови приобретает следующий вид:

Х=

Для получения более точного результата производите подсчет в двух сетках и используйте для подсчета средний арифметический результат.

О ф о р м л е н и е п р о т о к о л а . 1. Произведите подсчет согласно инструкции или рассчитайте по формуле количество эритроцитов в 1 л крови.

2. Зарисуйте камеру Горяева.

3. Сделайте заключение о соответствии полученных результатов нормативным.