26. Бактериологические методы исследования туберкулеза (посев, метод абсолютных концентраций).

Для различных препаратов установлена определенная концентрация, при которой наблюдают размножение критической доли микобактериальной популяции. Эти концентрации носят название "критические". В качестве критерия устойчивости используют величину роста популяции микобактерий на питательной среде с препаратом в критической концентрации.

В отечественной фтизиатрической практике при определении лекарственной устойчивости не ограничиваются определением только критических концентраций. Это связано с тем, что расширенное определение уровня лекарственной устойчивости возбудителя позволяет клиницисту более правильно сформировать тактику химиотерапии, используя знания о потенцирующем действии комбинаций лекарственных препаратов, предвидеть перекрестную устойчивость или применить более эффективные препараты используемой группы противотуберкулезных препаратов.

Метод абсолютных концентраций наиболее прост, однако и наиболее чувствителен к допускаемым ошибкам при его выполнении. Более достоверным, особенно при определении чувствительности к препаратам 2-го ряда, и распространенным вне России является метод пропорций. В нем учтены недостатки метода абсолютных концентраций, однако в исполнении он более трудоемок.

Метод очень похож на метод абсолютных концентраций. Приготовление тестовых пробирок с лекарственными препаратами производят так же, как при методе абсолютных концентраций. Однако посевная доза суспензии микобактерий туберкулеза снижена в 10 раз, что нивелирует частоту спонтанной устойчивости некоторых штаммов микобактерий туберкулеза к таким препаратам, как этамбутол, протионамид , капреомицин. В качестве контрольных используют 2 или 3 пробирки с посевной дозой, равной в тестируемых пробирках, последовательно разведенных в 10 и 100 раз. Критерием устойчивости служит доля визуально наблюдаемого роста микобактерий туберкулеза. Для препаратов 1-го ряда критерием устойчивости служит превышение роста 1% от исходной популяции, для препаратов 2-го ряда - рост 1 или более 10% от исходной, в зависимости от выбранной критической концентрации.

27. Бактериологические методы исследования туберкулеза (система bactec mgit 960).

Длительность роста Mycobacterium tuberculosis (МБТ) на плотных питательных средах является основной причиной того, что клиницист-фтизиатр получает сведения о лекарственной чувствительности возбудителя туберкулеза практически к моменту завершения интенсивной фазы лечения, назначая больным туберкулезом с самого начала эмпирическое лечение без достоверной информации о наличии лекарственной чувствительности МБТ. В связи с этим внедрение в микробиологическую диагностику туберкулеза быстрых специфических и высокочувствительных методов определения лекарственной чувствительности возбудителя туберкулеза к противотуберкулезным препаратам является крайне актуальным.

Разработанная специалистами фирмы "Becton Dickinson" автоматизированная система "Bactec MGIT 960" максимально стандартизировала методику, так как реактивы для пробоподготовки и компоненты питательных сред производят в заводских условиях на контролируемом производстве, и позволила автоматически регистрировать рост в каждой из 960 пробирок. При значительном количестве возбудителя туберкулеза в мокроте (положительной бактериоскопии) получение результатов теста на лекарственную чувствительность возможно в течение 2 - 3 недель. Однако рост на жидкой питательной среде неспецифичен, поэтому возможен рост нетуберкулезных микобактерий, грибов и других микроорганизмов, устойчивых к действию щелочи, антибиотиков и противогрибковых препаратов. Методика подтверждения специфичности роста на жидких питательных средах предусматривает посев выросшей в пробирке культуры на кровяной агар для идентификации микробной контаминации и окраску мазков по Цилю-Нильсену для обнаружения кислотоустойчивых палочек и корд-фактора.

Вместе с тем коррекция указанных недостатков метода с включением в алгоритм исследования современных молекулярно-генетических методов позволяет не только не потерять в скорости получения конечного результата, но и существенно снизить затраты на выявление возбудителя туберкулеза.