- •Пцр - анализ в клинической лаборатории
- •Р е ц е н з е н т ы
- •К о л л е к т и в а в т о р о в
- •Оглавление
- •Введение
- •История открытия и разработка метода пцр
- •Механизм полимеразной цепной реакции
- •Праймеры
- •Полимераза
- •Пробоподготовка (выделение днк/рнк)
- •Амплификация
- •Факторы, влияющие на эффективность амплификации
- •Использование «горячего старта» при постановке пцр
- •Приборное обеспечение
- •Регистрация результатов
- •Возможности лабораторной диагностики инфекционных болезней
- •Преимущества пцр перед другими методами клинической лабораторной диагностики
- •Универсальность процедуры выявления различных возбудителей
- •Специфичность
- •Чувствительность
- •Актуальность ответа (быстрота получения результата анализа)
- •Возможность экспертизы
- •Исследуемый биологический материал
- •Локализация возбудителей
- •Правила забора материала и транспортировки клинического материала для пцр-диагностики
- •Кровь, плазма, сыворотка
- •Соскоб с эпителиальных клеток для выявления днк возбудителей инфекций, передающихся половым путем
- •Факторы, влияющие на эффективность выявления урогенитальных патогенных микроорганизмов с помощью нк
- •Правила подготовки больного для пцр-диагностики урогенитальных инфекций
- •Мазок с конъюнктивы, слизистой зева и дыхательных путей
- •Гепатит а (hаv), е (hеv)
- •Гепатит в (hвv)
- •Гепатит d (вгd)
- •Гепатит с (hcv)
- •Использование пцр в пульмонологии и фтизиатрии
- •Применение пцр в урогинекологической практике
- •Основные клинические синдромы и урогенитальные инфекции
- •Генитальный герпес вызывает вирусы простого герпеса I и II типов
- •Криминология
- •Установление отцовства
- •Персонализированная медицина
- •Клонирование генов
- •Онкология
- •Применение пцр в практике службы крови
- •Управление качеством пцр-исследований
- •Преаналитический этап
- •Аналитический этап
- •Контроль качества пцр-исследований
- •Контроль реакции амплификации
- •Внутренний контроль вко
- •Проблема контаминации
- •Действия при возникновении контаминации нуклеиновыми кислотами
- •Постаналитический этап
- •Заключение
- •Вопросы для самопроверки
- •Ответы на вопросы для самопроверки
- •Список литературы
- •Приложение
- •Возможности пцр-диагностики в гуз иоккдц
- •Комплекс исследований на заболевания,
- •Передающиеся половым путем (зппп), 2ж3001
- •Хламидиоз, 2ж3002
- •Туберкулез, 2жз003
- •Гепатит с, 2ж3004
- •Микоплазма гоминис, 2ж3005
- •Трихомониаз, 2ж3006
- •Гепатит в, 2ж3007
- •Уреаплазма, 2ж3009
- •Папиллома (впч с определением онкогенности), 2ж3010
- •Гонорея, 2ж3011
- •Гепатит с количественный, 2ж3012
- •Генотипирование вируса гепатита с, 2ж3013
- •Микоплазма гениталиум, 2ж3015
- •Цмв, 2ж3019
- •Вирус Эпштейна-Барр, 2ж3020
- •Вирус герпеса I-го и II-го типов, 2ж3021
- •Вирус герпеса 6-го типа, 2ж3022
- •Токсоплазмы гондии, 2ж3023
- •Энтеровирус, 2ж3027
- •Гепатит в количественный, 2ж3031
- •Пцр - анализ в клинической лаборатории
- •664079, Г. Иркутск, м-н Юбилейный, 100, к. 302.
Актуальность ответа (быстрота получения результата анализа)
Скорость и высокая производительность (возможность параллельного анализа большого количества образцов) являются бесспорными преимуществами данного метода.
Для проведения ПЦР-анализа не требуется выделение и выращивание культуры возбудителя, что занимает большое количество времени. Преимущество ПЦР в скорости получения результата по сравнению с культуральными методами особенно заметно при исследовании медленнорастущих микроорганизмов, при идентификации возбудителей с высокой антигенной изменчивостью или паразитирующих внутри клетки, при определении лекарственной устойчивости у штаммов микобактерий туберкулеза.
Унифицированный метод обработки биоматериала и детекции продуктов реакции и автоматизация процесса амплификации дают возможность провести полный анализ в течение рабочего дня.
ПЦР позволяет осуществить определение возбудителя инфекции или дефектного гена в организме еще до развития заболевания. Например, при инфекциях в инкубационном периоде (серонегативной фазе) или при латентном характере заболевания. Кроме того, возможно проведение ПЦР в архивном (фиксированном) материале или биологических остатках, что важно для идентификации личности или отцовства.
Проведение анализа возможно в минимальном объеме пробы (до нескольких микролитров), что крайне важно в неонатологии, судебной медицине, клинической генетике и т.п.
Возможность одновременной диагностики нескольких возбудителей заболеваний или аномальных генов в одной пробе без ущерба для чувствительности или специфичности результата.
Возможность экспертизы
Комплексное обследование пациента различными лабораторными методами дает возможность врачу-клиницисту получать более полную информацию, как о наличии инфекционного агента, так и об иммунном статусе. Это позволяет более точно ставить диагноз, назначать соответствующее этиотропное лечение и вести последующий контроль терапии.
Исследуемый биологический материал
Материалом для ПЦР могут быть соскобы эпителиальных клеток, кровь и ее компоненты, костный мозг, плевральная, синовиальная и спинномозговая жидкости, моча и ее клеточный осадок, мокрота, бронхоальвеолярный лаваж, слюна, плевральный выпот, сперма, секрет простаты, желудочный сок, слезная жидкость, выделения молочных желез, смывы и другие биологические жидкости, биоптаты, секционный (аутопсийный) материалы, отделяемое везикул, фиксированные или парафинированные ткани. Биологическим материалом для ПЦР-диагностики может служить бактериальная культура, сточные воды, почва, продукты питания, корма.
Локализация возбудителей
Вирусные гепатиты В, С (кровь, биоптаты, соскобы, слюна).
Туберкулез (кровь, моча, секционный материал, мазки, мокрота, смывы, БАЛ, плевральный выпот).
Папилломавирусы человека (эпителий слизистой, биоптаты).
Трихомонады, гонококки, хламидии, микоплазмы, уреаплазмы, герпетические инфекции, кандиды - мазки, соскобы (со слизистых оболочек урогенитального тракта), клеточный осадок мочи. Для выявления ДНК Chlamydia trachomatis и др. инфекционных агентов, возможно также использовать мазки с конъюнктивы, синовиальную жидкость. Для выявления ДНК из герпетической группы можно использовать отделяемое везикул (пузырьковых высыпаний).
Токсоплазма гондии (ликвор, кровь).
Энтеровирусы (ликвор, сточные воды, носоглоточное отделяемое, моча)