Использование пцр в пульмонологии и фтизиатрии

В пульмонологии методы ДНК-анализа применяются для дифференциальной диагностики вирусных и бактериальных пневмоний, рецидивирующих хронических бронхитов, туберкулеза легких.

Обнаружение микобактерий туберкулезного комплекса в клинических образцах является одним из основных диагностических подходов во фтизиатрии. В настоящее время классические методы выявления возбудителя по своей эффективности уже не удовлетворяют клиницистов. Быстрый метод бактериоскопии обладает низкой чувствительностью: для обнаружения микобактерий туберкулеза необходимо, чтобы 1 мл материала содержал не менее 100 тыс. микробных клеток. Люминесцентная микроскопия увеличивает чувствительность бактериоскопии на 10-30 %. Чувствительность бактериологического посева значительно выше – 20-100 микробных клеток, однако исследование занимает длительное время – один – три месяца. Морфологическая диагностика сложна, так как требует получения биоптата из пораженного органа, либо заставляет идти на диагностическую операцию. В связи с этим микобактерии туберкулеза выявляют в среднем лишь у 50-60 % больных активным туберкулезом.

Методы диагностики с использованием серологических тестов – ИФА, РИА, РПГА, латекс-агглютинация и др. - имеют сомнительное диагностическое значение вследствие их низкой чувствительности и специфичности. Антитела к микобактериям в том или ином количестве присутствуют в крови не только больных, но и здоровых инфицированных людей. Титры антител в сыворотке крови больных активным туберкулезом и титры антител у людей с неактивным туберкулёзом зависят от состояния иммунной системы пациента и особенностями течения болезни, связанной с давностью инфицирования или тяжестью заболевания. Кроме того, бактерии могут находиться в мембранной упаковке (в фагосоме), в которой антигенные детерминанты микобактерий скрыты от иммунной системы и на фоне тотальной вакцинации населения БЦЖ имеют сомнительное диагностическое значение. Поэтому все большее значение приобретают альтернативные и дополнительные методы. Совершенствуются методы культивирования микобактерий. Примером может служить радиометрический метод с использованием системы “BACTEC”, сокращающий время бактериологического исследования туберкулеза до 10-20 дней. Для эффективного выявления M. tuberculosis в клинических образцах применяется метод полимеразной цепной реакции. Метод ПЦР позволяет дифференцировать виды бактерий, что облегчит диагностику атипичных случаев туберкулеза (микобактериозы), часто имеющих сходную с туберкулезом клинико-рентгенологическую картину. ПЦР имеет несомненное преимущество, поскольку не дает неспецифических реакций. Метод ПЦР сочетает в себе высокую чувствительность, которая не уступает культуральному методу и равна 2-50 копий генома, и высокую оперативность (время проведения анализа - 6-8 часов). В настоящее время разработаны и появились на рынке ПЦР-наборы для определения устойчивости микобактерий к противотуберкулезным препаратам и для дифференциальной диагностики микобактерий.

Молекулярно-биологическим методам исследования туберкулеза придается важная роль в повышении эффективности выявления и дифференциальной диагностики туберкулеза, контроле диспансерных больных, улучшении системы эпиднадзора за туберкулезом.

Частой причиной атипичных пневмоний, рецидивирующих хронических бронхитов являются микоплазмы, хламидии и вирусные агенты. Диагностика этих возбудителей традиционными методами микроскопии и бакпосева неэффективна. ПЦР позволяет не только диагностировать хламидиозы и микоплазмозы, но и проводить видовую идентификацию возбудителя (С. pneumoniae, C. trachomatis, M. hominis, M. pneumoniae и др.).