- •Пцр - анализ в клинической лаборатории
- •Р е ц е н з е н т ы
- •К о л л е к т и в а в т о р о в
- •Оглавление
- •Введение
- •История открытия и разработка метода пцр
- •Механизм полимеразной цепной реакции
- •Праймеры
- •Полимераза
- •Пробоподготовка (выделение днк/рнк)
- •Амплификация
- •Факторы, влияющие на эффективность амплификации
- •Использование «горячего старта» при постановке пцр
- •Приборное обеспечение
- •Регистрация результатов
- •Возможности лабораторной диагностики инфекционных болезней
- •Преимущества пцр перед другими методами клинической лабораторной диагностики
- •Универсальность процедуры выявления различных возбудителей
- •Специфичность
- •Чувствительность
- •Актуальность ответа (быстрота получения результата анализа)
- •Возможность экспертизы
- •Исследуемый биологический материал
- •Локализация возбудителей
- •Правила забора материала и транспортировки клинического материала для пцр-диагностики
- •Кровь, плазма, сыворотка
- •Соскоб с эпителиальных клеток для выявления днк возбудителей инфекций, передающихся половым путем
- •Факторы, влияющие на эффективность выявления урогенитальных патогенных микроорганизмов с помощью нк
- •Правила подготовки больного для пцр-диагностики урогенитальных инфекций
- •Мазок с конъюнктивы, слизистой зева и дыхательных путей
- •Гепатит а (hаv), е (hеv)
- •Гепатит в (hвv)
- •Гепатит d (вгd)
- •Гепатит с (hcv)
- •Использование пцр в пульмонологии и фтизиатрии
- •Применение пцр в урогинекологической практике
- •Основные клинические синдромы и урогенитальные инфекции
- •Генитальный герпес вызывает вирусы простого герпеса I и II типов
- •Криминология
- •Установление отцовства
- •Персонализированная медицина
- •Клонирование генов
- •Онкология
- •Применение пцр в практике службы крови
- •Управление качеством пцр-исследований
- •Преаналитический этап
- •Аналитический этап
- •Контроль качества пцр-исследований
- •Контроль реакции амплификации
- •Внутренний контроль вко
- •Проблема контаминации
- •Действия при возникновении контаминации нуклеиновыми кислотами
- •Постаналитический этап
- •Заключение
- •Вопросы для самопроверки
- •Ответы на вопросы для самопроверки
- •Список литературы
- •Приложение
- •Возможности пцр-диагностики в гуз иоккдц
- •Комплекс исследований на заболевания,
- •Передающиеся половым путем (зппп), 2ж3001
- •Хламидиоз, 2ж3002
- •Туберкулез, 2жз003
- •Гепатит с, 2ж3004
- •Микоплазма гоминис, 2ж3005
- •Трихомониаз, 2ж3006
- •Гепатит в, 2ж3007
- •Уреаплазма, 2ж3009
- •Папиллома (впч с определением онкогенности), 2ж3010
- •Гонорея, 2ж3011
- •Гепатит с количественный, 2ж3012
- •Генотипирование вируса гепатита с, 2ж3013
- •Микоплазма гениталиум, 2ж3015
- •Цмв, 2ж3019
- •Вирус Эпштейна-Барр, 2ж3020
- •Вирус герпеса I-го и II-го типов, 2ж3021
- •Вирус герпеса 6-го типа, 2ж3022
- •Токсоплазмы гондии, 2ж3023
- •Энтеровирус, 2ж3027
- •Гепатит в количественный, 2ж3031
- •Пцр - анализ в клинической лаборатории
- •664079, Г. Иркутск, м-н Юбилейный, 100, к. 302.
Генотипирование вируса гепатита с, 2ж3013
Исследуемый материал: кровь с ЭДТА, биоптат.
Забор крови осуществляется в пробирку с антикоагулянтом (ЭДТА).
Кусочек ткани объемом примерно 2 мм3 поместить в стерильную пробирку типа "Эппендорф" объемом 1,5 мл.
В алгоритм лабораторного обследования гепатита С включено определение генотипа ВГС (1,2,3). Важным прогностическим маркером эффективности противовирусной терапии при инфекции вирусом гепатита С (HCV) является его генотип. Генотип HCV определяет дозу препарата и продолжительность курса лечения. Пациенты, инфицированные ВГС 1-го генотипа, хуже отвечают на противовирусное лечение препаратами интерферонов, чем пациенты, инфицированные ВГС 2-го или 3-го генотипов. Факторами, обусловливающими эффективность лечения, являются генотипы 2 или 3, низкая вирусная нагрузка и незначительные гистологические изменения при биопсии печени. Для практического врача, принимающего решение о назначении этиотропной терапии, результат теста, определяющего генотип вируса, не менее важен, чем определение репликативной активности HCV и вирусной нагрузки.
С целью выбора эффективной схемы лечения достаточно дифференцировать случаи инфицирования генотипом 1-м («genotype 1») от случаев инфицирования другими генотипами («genotype non-1»), не проводя при этом не только детализацию на уровне субтипов вируса, но и не уточняя, к какому генотипу – 2-му или 3-му, они принадлежат.
Микоплазма гениталиум, 2ж3015
Исследуемый материал: мазок урогенитальный, моча, секрет предстательной железы, сперма, синовиальная жидкость. Чаще всего материалом для исследования является соскоб из урогенитального тракта (у женщин из цервикального канала, у мужчин – из уретры), при выборе другого биоматериала, проконсультируйтесь с врачом. У детей: у девочек берут соскоб с вульвы, у мальчиков – мочу.
Соскоб поместить в стерильную пробирку типа "Эппендорф" объемом 1,5 мл. При вялотекущих и хронических инфекциях урогенитального тракта рекомендуется применять провокации (кроме химических).
Исследуемый материал должен быть без примесей крови и слизи.
3а 3–5 суток до забора материала необходимо прекратить прием химиопрепаратов и лечебные процедуры.
Мокрота и моча собираются утром в домашних условиях в одноразовые пластиковые пробирки объемом 10–15 мл.
M. genitalium (класс молликуты) – самый мелкий из известных в природе свободно живущих микроорганизмов, размер его генома составляет 580 тыс.п. оснований, является паразитом человека, колонизирующим слизистые оболочки урогенитального тракта и вызывающим развитие воспалительных процессов. M. genitalium вызывает слизисто-гнойный цервицит в отсутствие N. gonorrhoeae и C. trachomatis. При этом клинические проявления цервицита, вызванного M. genitalium, практически не отличаются от цервицита хламидийной этиологии. Кроме того, было показана связь M. genitalium с воспалительными заболеваниями верхних отделов органов репродукции женщин. M.genitalium была обнаружена в биопсийном материале трубного эпителия при остром сальпингите у женщин. Инфицирование M. genitalium слизистой эндометрия сопровождается клинической и морфологической картиной острого эндометрита.
У мужчин M. genitalium является этиологическим агентом острого и хронического уретрита, при этом, в отличие от уреаплазм, практически не встречается у здоровых людей. Более того, уретрит, вызванный M. genitalium, протекает в манифестной форме чаще, чем хламидийный уретрит. По данным разных авторов доля уретритов, вызванных M. genitalium, составляет от 10 до 25 %.
Диагностика M. genitalium невозможна с использованием методов, традиционно применяемых для выявления других возбудителей ИППП – микроскопии, вследствие чрезвычайно малых размеров возбудителя; бактериологического посева, вследствие низкой скорости деления клеток микоплазм и высоких требований к составу сред; ИФА, вследствие того, что M. genitalium обладает низкими иммуногенными свойствами, а кроме того несет родовые антигены, встречающиеся у других представителей молликут, колонизирующих человеческий организм. В связи с этим единственными доступными методами лабораторной диагностики инфекции, вызванной M. genitalium, являются методы амплификации нуклеиновых кислот
В отличие от других микоплазм и уреаплазм, M. genitalium практически не встречается среди клинически здоровых лиц. В настоящее время M. genitalium рассматривается, как безусловно-патогенный микроорганизм, являющийся самостоятельным этиологическим агентом воспалительных заболеваний органов репродукции человека.