- •Пцр - анализ в клинической лаборатории
- •Р е ц е н з е н т ы
- •К о л л е к т и в а в т о р о в
- •Оглавление
- •Введение
- •История открытия и разработка метода пцр
- •Механизм полимеразной цепной реакции
- •Праймеры
- •Полимераза
- •Пробоподготовка (выделение днк/рнк)
- •Амплификация
- •Факторы, влияющие на эффективность амплификации
- •Использование «горячего старта» при постановке пцр
- •Приборное обеспечение
- •Регистрация результатов
- •Возможности лабораторной диагностики инфекционных болезней
- •Преимущества пцр перед другими методами клинической лабораторной диагностики
- •Универсальность процедуры выявления различных возбудителей
- •Специфичность
- •Чувствительность
- •Актуальность ответа (быстрота получения результата анализа)
- •Возможность экспертизы
- •Исследуемый биологический материал
- •Локализация возбудителей
- •Правила забора материала и транспортировки клинического материала для пцр-диагностики
- •Кровь, плазма, сыворотка
- •Соскоб с эпителиальных клеток для выявления днк возбудителей инфекций, передающихся половым путем
- •Факторы, влияющие на эффективность выявления урогенитальных патогенных микроорганизмов с помощью нк
- •Правила подготовки больного для пцр-диагностики урогенитальных инфекций
- •Мазок с конъюнктивы, слизистой зева и дыхательных путей
- •Гепатит а (hаv), е (hеv)
- •Гепатит в (hвv)
- •Гепатит d (вгd)
- •Гепатит с (hcv)
- •Использование пцр в пульмонологии и фтизиатрии
- •Применение пцр в урогинекологической практике
- •Основные клинические синдромы и урогенитальные инфекции
- •Генитальный герпес вызывает вирусы простого герпеса I и II типов
- •Криминология
- •Установление отцовства
- •Персонализированная медицина
- •Клонирование генов
- •Онкология
- •Применение пцр в практике службы крови
- •Управление качеством пцр-исследований
- •Преаналитический этап
- •Аналитический этап
- •Контроль качества пцр-исследований
- •Контроль реакции амплификации
- •Внутренний контроль вко
- •Проблема контаминации
- •Действия при возникновении контаминации нуклеиновыми кислотами
- •Постаналитический этап
- •Заключение
- •Вопросы для самопроверки
- •Ответы на вопросы для самопроверки
- •Список литературы
- •Приложение
- •Возможности пцр-диагностики в гуз иоккдц
- •Комплекс исследований на заболевания,
- •Передающиеся половым путем (зппп), 2ж3001
- •Хламидиоз, 2ж3002
- •Туберкулез, 2жз003
- •Гепатит с, 2ж3004
- •Микоплазма гоминис, 2ж3005
- •Трихомониаз, 2ж3006
- •Гепатит в, 2ж3007
- •Уреаплазма, 2ж3009
- •Папиллома (впч с определением онкогенности), 2ж3010
- •Гонорея, 2ж3011
- •Гепатит с количественный, 2ж3012
- •Генотипирование вируса гепатита с, 2ж3013
- •Микоплазма гениталиум, 2ж3015
- •Цмв, 2ж3019
- •Вирус Эпштейна-Барр, 2ж3020
- •Вирус герпеса I-го и II-го типов, 2ж3021
- •Вирус герпеса 6-го типа, 2ж3022
- •Токсоплазмы гондии, 2ж3023
- •Энтеровирус, 2ж3027
- •Гепатит в количественный, 2ж3031
- •Пцр - анализ в клинической лаборатории
- •664079, Г. Иркутск, м-н Юбилейный, 100, к. 302.
Гепатит в, 2ж3007
Исследуемый материал: кровь с ЭДТА, биоптат. Забор крови осуществляется в пробирку с антикоагулянтом (ЭДТА). Кусочек ткани объемом примерно 2 мм3 поместить в стерильную пробирку типа "Эппендорф" объемом 1,5 мл.
Вирус гепатита В считается наиболее изученным среди остальных вирусов гепатита. Однако в последнее десятилетие его генетическая изменчивость стала оказывать значительное влияние на течение и исход болезни.
Основным маркером инфицирования вирусом гепатита В является HBsAg. Однако в настоящее время накоплены данные о возможности существования «скрытой» HBsAg негативной ВГВ-инфекции. Часть случаев такой инфекции обусловлена наличием «ускользающего» варианта вируса, при котором не детектируются никакие маркеры вируса, но присутствует вирусная ДНК. Мутации в вирусном геноме, коинфицирование, а также начало или окончание инфекционного процесса могут сопровождаться снижением концентрации HBsAg в сыворотке крови до уровня ниже предела чувствительности большинства тест-систем. В этих случаях ПЦР диагностика является единственным диагностическим методом выявления мутантных агентов.
Уреаплазма, 2ж3009
Исследуемый материал: мазок урогенитальный или мазок из зева, мокрота, промывные воды бронхов.
Соскоб поместить в стерильную пробирку типа "Эппендорф" объемом 1,5 мл. При вялотекущих и хронических инфекциях урогенитального тракта рекомендуется применять провокации (кроме химических).
Исследуемый материал должен быть без примесей крови и слизи.
За 3–5 суток до забора материала необходимо прекратить прием химиопрепаратов и лечебные процедуры.
Мокрота и моча собираются утром в домашних условиях в одноразовые пластиковые пробирки объемом 10–15 мл.
Уреаплазмоз – заболевание, вызываемое уреаплазмой (Ureaplasma urealyticum). Очень часто уреаплазмоз рассматривают вместе с микоплазмозом. Оба эти микроорганизма занимают промежуточное положение между вирусами и бактериями, относятся к внутриклеточным микробам и передаются половым путем. Клиническая роль уреаплазм до сих пор остается предметом жарких дискуссий. Трудности доказательства этиологической роли уреаплазм заключаются в их широкой распространенности среди клинически здоровых лиц, в связи с чем проводится поиск диагностических маркеров, позволяющих отличить здоровое носительство от инфекции. Достоверным патологическим маркером уреаплазм является плотность обсемененности или бактериальная нагрузка, оцениваемые при бактериологическом посеве и выражающиеся в значениях цвето-изменяющих единиц на 1 мл (ЦОЕ/мл). Среди врачей-клиницистов сегодня сформировался определенный стереотип, согласно которому существует клинически значимый титр – более 104 ЦОЕ/мл, при котором необходимо назначать лечение, и состояние, оцениваемое как носительство, если концентрация микроорганизма находится в пределах 103 ЦОЕ/мл.
Папиллома (впч с определением онкогенности), 2ж3010
Исследуемый материал: мазок урогенитальный, биоптаты.
Соскоб поместить в стерильную пробирку типа "Эппендорф" объемом 1,5 мл.
При вялотекущих и хронических инфекциях урогенитального тракта рекомендуется применять провокации (кроме химических).
Исследуемый материал должен быть без примесей крови и слизи. За 3–5 суток до забора материала необходимо прекратить прием химиопрепаратов и лечебные процедуры.
Вирусы папилломы человека (ВПЧ) являются широко распространенной и гетерогенной группой вирусов. ВПЧ имеют кольцевой ДНК содержащий геном размером порядка 8 тысяч пар оснований. Таксономически вирусы папилломы делятся на роды (обозначаются греческими буквами (a, b, g и т.д.), виды (обозначаются арабскими цифрами и буквой рода), например a7, a9, b1 и др.), типы (обозначаются арабскими цифрами, например, 16, 18, 6, 11 и др.). Эпидемиологически выделяют «кожные», тропные к ороговевающему эпителию типы (в основном роды b и g), и слизистые, или аногенитальные (тропные к слизистым оболочкам), типы вируса (род a). Среди последних выделяют подгруппы низкого (в основном виды a1, a8, a10) и высокого канцерогенных рисков (виды a5, a6, a7, a9) по их способности или неспособности оказывать трансформирующее воздействие на клетки эпителия. Эпидемиологическими исследованиями последних лет показано, что к группе высокого риска принадлежат типы 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68, 73 и 82. Типы 26, 53 и 66 относятся к категории предположительно высокого риска. К группе низкого риска принадлежат типы 6, 11, 40, 42, 43, 44, 54, 61, 72, 81. Остальные типы относятся к категории неустановленного риска и чаще всего не ассоциированы с развитием патологий.
Типы ВПЧ как высокого, так и низкого рисков способны оказывать продуктивное воздействие на клетки эпителия, приводя к развитию классических проявлений папилломовирусной инфекции – остроконечных кондилом гениталий – и дисплазий легкой степени (L-SIL или CIN1). Типы высокого онкогенного риска отличает способность оказывать трансформирующее воздействие на эпителиоциты, приводя к развитию предрака (дисплазии средней и высокой степени тяжести, H-SIL или CIN2,3) и рака. Следует подчеркнуть, что развитие дисплазий не обязательно сопровождается появлением остроконечных кондилом.
Генитальный ВПЧ поражает слизистые оболочки, передается при половом контакте или новорожденному от инфицированной матери при прохождении через родовые пути. В клинической практике очень важна ранняя диагностика заболевания.