- •Пцр - анализ в клинической лаборатории
- •Р е ц е н з е н т ы
- •К о л л е к т и в а в т о р о в
- •Оглавление
- •Введение
- •История открытия и разработка метода пцр
- •Механизм полимеразной цепной реакции
- •Праймеры
- •Полимераза
- •Пробоподготовка (выделение днк/рнк)
- •Амплификация
- •Факторы, влияющие на эффективность амплификации
- •Использование «горячего старта» при постановке пцр
- •Приборное обеспечение
- •Регистрация результатов
- •Возможности лабораторной диагностики инфекционных болезней
- •Преимущества пцр перед другими методами клинической лабораторной диагностики
- •Универсальность процедуры выявления различных возбудителей
- •Специфичность
- •Чувствительность
- •Актуальность ответа (быстрота получения результата анализа)
- •Возможность экспертизы
- •Исследуемый биологический материал
- •Локализация возбудителей
- •Правила забора материала и транспортировки клинического материала для пцр-диагностики
- •Кровь, плазма, сыворотка
- •Соскоб с эпителиальных клеток для выявления днк возбудителей инфекций, передающихся половым путем
- •Факторы, влияющие на эффективность выявления урогенитальных патогенных микроорганизмов с помощью нк
- •Правила подготовки больного для пцр-диагностики урогенитальных инфекций
- •Мазок с конъюнктивы, слизистой зева и дыхательных путей
- •Гепатит а (hаv), е (hеv)
- •Гепатит в (hвv)
- •Гепатит d (вгd)
- •Гепатит с (hcv)
- •Использование пцр в пульмонологии и фтизиатрии
- •Применение пцр в урогинекологической практике
- •Основные клинические синдромы и урогенитальные инфекции
- •Генитальный герпес вызывает вирусы простого герпеса I и II типов
- •Криминология
- •Установление отцовства
- •Персонализированная медицина
- •Клонирование генов
- •Онкология
- •Применение пцр в практике службы крови
- •Управление качеством пцр-исследований
- •Преаналитический этап
- •Аналитический этап
- •Контроль качества пцр-исследований
- •Контроль реакции амплификации
- •Внутренний контроль вко
- •Проблема контаминации
- •Действия при возникновении контаминации нуклеиновыми кислотами
- •Постаналитический этап
- •Заключение
- •Вопросы для самопроверки
- •Ответы на вопросы для самопроверки
- •Список литературы
- •Приложение
- •Возможности пцр-диагностики в гуз иоккдц
- •Комплекс исследований на заболевания,
- •Передающиеся половым путем (зппп), 2ж3001
- •Хламидиоз, 2ж3002
- •Туберкулез, 2жз003
- •Гепатит с, 2ж3004
- •Микоплазма гоминис, 2ж3005
- •Трихомониаз, 2ж3006
- •Гепатит в, 2ж3007
- •Уреаплазма, 2ж3009
- •Папиллома (впч с определением онкогенности), 2ж3010
- •Гонорея, 2ж3011
- •Гепатит с количественный, 2ж3012
- •Генотипирование вируса гепатита с, 2ж3013
- •Микоплазма гениталиум, 2ж3015
- •Цмв, 2ж3019
- •Вирус Эпштейна-Барр, 2ж3020
- •Вирус герпеса I-го и II-го типов, 2ж3021
- •Вирус герпеса 6-го типа, 2ж3022
- •Токсоплазмы гондии, 2ж3023
- •Энтеровирус, 2ж3027
- •Гепатит в количественный, 2ж3031
- •Пцр - анализ в клинической лаборатории
- •664079, Г. Иркутск, м-н Юбилейный, 100, к. 302.
Гепатит а (hаv), е (hеv)
Для гепатитов HАV и HЕV не характерно развитие хронического (протекающего больше 6 мес.) заболевания печени.
Вирусы гепатита А и Е передаются фекально-оральным путем и чаще всего обнаруживаются в местах с плохими санитарными условиями.
РНК вируса гепатита HАV появляется в крови больного гепатитом А гораздо раньше, чем антитела (anti-HAV IgM). Для диагностики вирусного гепатита А традиционно используются ИФА тест-системы (для выявления антител к вирусу гепатита А класса IgM). Иммуноглобулины класса IgM сохраняются после перенесенного заболевания в течение нескольких месяцев (до года), что может приводить к гипердиагностике HAV при развитии в этот период поражения печени другой этиологии. Использование тест систем для выявления РНК HАV в плазме крови больных позволяет наиболее точно установить этиологию заболевания и его острую фазу и правильно интерпретировать данные серологических исследований. Кроме того, метод ПЦР позволяет эффективно выявлять HАV в концентратах проб воды из эпидемических очагов заболевания.
Гепатит в (hвv)
Особую ценность представляет ПЦР для обнаружения вирусов гепатита В, позволяя:
Диагностировать его острую фазу. ДНК вируса гепатита В начинает обнаруживаться в крови больного в среднем на 20 дней раньше, чем HBsAg («Австралийский» антиген).
Осуществлять этиологическую диагностику хронического гепатита, в т. ч. и смешанных форм HCV/ HВV, HВV/ HDV и HВV/HGV. Результатом одновременного инфицирования HВV и HDV является некровоспалительное заболевание печени различной степени тяжести, протекающее в разных формах с худшим ответом на лечение противовирусными препаратами, чем при моноинфицировании гепатита В, с большей вероятностью рецидива болезни и неблагоприятным прогнозом.
Выявлять мутантные штаммы вируса гепатита В. В результате естественной эволюции, в процессе лечения интерфероном, вакцинацией и др. маркерными генетическими событиями, наряду с интактными (дикими), селекционировались варианты с измененным серологическим профилем. В результате мутаций в геноме НВV появились HBeAg-негативный и HBV штаммы с измененной структурой HbsAg, которые приводят к более частой хронизации процесса, к фульминантному течению гепатита и резистентности к интерферонотерапии. Мутация YMDD приводит к устойчивости вируса гепатита В к ламивудину. Раннее выявление мутантного штамма вируса у пациентов, находящихся на монотерапии зефиксом (ламивудином), необходимо для назначения адекватной антивирусной терапии и своевременной коррекции лечения вирусного гепатита. Выявление ДНК HВV у мутантных штаммов может стать единственным свидетельством репликации вируса.
Осуществлять мониторинг активности вирусной репликации.
Контролировать эффективность противовирусной терапии.
Выявлять виремию у доноров крови.
В качестве дополнительных маркеров для объяснения тяжелой ВГВ-инфекции стали применяться отличительные данные по генотипу возбудителя инфекции: наличие характерных мутационных замен, вставок и делеций в геноме инфицирующих штаммов ВГВ у больного. Для гепатита В известно по меньшей мере восемь генотипов (A–H). Считается, что вероятность развития гепатоцеллюлярной карциномы при поражении печени различных генотипов гепатита В может быть различной. С этой точки зрения наиболее опасным генотипом HBV вируса считается генотип С, который ассоциирован с продолжительностью заболевания и тяжестью печеночных изменений.