- •Пцр - анализ в клинической лаборатории
- •Р е ц е н з е н т ы
- •К о л л е к т и в а в т о р о в
- •Оглавление
- •Введение
- •История открытия и разработка метода пцр
- •Механизм полимеразной цепной реакции
- •Праймеры
- •Полимераза
- •Пробоподготовка (выделение днк/рнк)
- •Амплификация
- •Факторы, влияющие на эффективность амплификации
- •Использование «горячего старта» при постановке пцр
- •Приборное обеспечение
- •Регистрация результатов
- •Возможности лабораторной диагностики инфекционных болезней
- •Преимущества пцр перед другими методами клинической лабораторной диагностики
- •Универсальность процедуры выявления различных возбудителей
- •Специфичность
- •Чувствительность
- •Актуальность ответа (быстрота получения результата анализа)
- •Возможность экспертизы
- •Исследуемый биологический материал
- •Локализация возбудителей
- •Правила забора материала и транспортировки клинического материала для пцр-диагностики
- •Кровь, плазма, сыворотка
- •Соскоб с эпителиальных клеток для выявления днк возбудителей инфекций, передающихся половым путем
- •Факторы, влияющие на эффективность выявления урогенитальных патогенных микроорганизмов с помощью нк
- •Правила подготовки больного для пцр-диагностики урогенитальных инфекций
- •Мазок с конъюнктивы, слизистой зева и дыхательных путей
- •Гепатит а (hаv), е (hеv)
- •Гепатит в (hвv)
- •Гепатит d (вгd)
- •Гепатит с (hcv)
- •Использование пцр в пульмонологии и фтизиатрии
- •Применение пцр в урогинекологической практике
- •Основные клинические синдромы и урогенитальные инфекции
- •Генитальный герпес вызывает вирусы простого герпеса I и II типов
- •Криминология
- •Установление отцовства
- •Персонализированная медицина
- •Клонирование генов
- •Онкология
- •Применение пцр в практике службы крови
- •Управление качеством пцр-исследований
- •Преаналитический этап
- •Аналитический этап
- •Контроль качества пцр-исследований
- •Контроль реакции амплификации
- •Внутренний контроль вко
- •Проблема контаминации
- •Действия при возникновении контаминации нуклеиновыми кислотами
- •Постаналитический этап
- •Заключение
- •Вопросы для самопроверки
- •Ответы на вопросы для самопроверки
- •Список литературы
- •Приложение
- •Возможности пцр-диагностики в гуз иоккдц
- •Комплекс исследований на заболевания,
- •Передающиеся половым путем (зппп), 2ж3001
- •Хламидиоз, 2ж3002
- •Туберкулез, 2жз003
- •Гепатит с, 2ж3004
- •Микоплазма гоминис, 2ж3005
- •Трихомониаз, 2ж3006
- •Гепатит в, 2ж3007
- •Уреаплазма, 2ж3009
- •Папиллома (впч с определением онкогенности), 2ж3010
- •Гонорея, 2ж3011
- •Гепатит с количественный, 2ж3012
- •Генотипирование вируса гепатита с, 2ж3013
- •Микоплазма гениталиум, 2ж3015
- •Цмв, 2ж3019
- •Вирус Эпштейна-Барр, 2ж3020
- •Вирус герпеса I-го и II-го типов, 2ж3021
- •Вирус герпеса 6-го типа, 2ж3022
- •Токсоплазмы гондии, 2ж3023
- •Энтеровирус, 2ж3027
- •Гепатит в количественный, 2ж3031
- •Пцр - анализ в клинической лаборатории
- •664079, Г. Иркутск, м-н Юбилейный, 100, к. 302.
Хламидиоз, 2ж3002
Исследуемый материал: соскоб урогенитальный или соскоб из зева, конъюнктивы, мокрота, промывные воды бронхов, синовиальная жидкость.
Соскоб поместить в стерильную пробирку типа "Эппендорф" объемом 1,5 мл. При вялотекущих и хронических инфекциях урогенитального тракта рекомендуется применять провокации (кроме химических).
Исследуемый материал должен быть без примесей крови и слизи.
3а 3–5 суток до забора материала необходимо прекратить прием химиопрепаратов и лечебные процедуры.
Мокрота и моча собираются утром в домашних условиях в одноразовые пластиковые пробирки объемом 10–15 мл.
Возбудитель урогенитального хламидиоза – Chlamydia trachomatis – облигатный внутриклеточный паразит со сложным циклом развития. C. trachomatis имеет строгую специфичность в отношении цилиндрического эпителия цервикального канала, уретры и прямой кишки. Инкубационный период хламидийной инфекции составляет от 5 до 30 дней. Клиническая картина зависит от места поражения, времени с момента инфицирования и выраженности реакций макроорганизма. Из заболеваний, которые хламидии способны вызывать у мужчин, чаще всего встречаются уретрит и его осложнения: эпидидимит и простатит. Для женщин хламидийная инфекция представляет наибольшую угрозу из-за слабо выраженной симптоматики и связанными с этим поздней диагностикой и несвоевременным назначением лечения. У женщин урогенитальная хламидийная инфекция может долгое время протекать с минимальными клиническими проявлениями, приводя к развитию восходящей инфекции с поражением органов малого таза. У них хламидийная инфекция чаще всего является причиной развития цервицита, а его осложнениями являются сальпингит и сальпингоофорит. У новорожденных, рожденных от матерей, больных урогенитальным хламидиозом, может развиваться хламидийный конъюнктивит, уретрит, вульвовагинит, артрит, пневмония и поражения других органов.
Обследование на наличие хламидий даже при отсутствии симптомов заболевания рекомендуется проводить лицам, входящим в группы риска, в том числе сексуально активным девушкам-подросткам, особо подверженным заражению хламидийной инфекцией, если они часто меняют половых партнеров и не пользуются барьерными контрацептивами. Целесообразно также ежегодно проводить обследование женщин детородного возраста, особенно тех, кто использует гормональные контрацептивные средства, меняет половых партнеров, в анамнезе которых имеются указания на внематочную беременность и воспалительные заболевания органов малого таза.
Хламидии не относятся к нормальной микрофлоре человека, их обнаружение говорит о наличии инфекционного процесса.
Туберкулез, 2жз003
Исследуемый материал: кровь, соскоб, моча, биоптат, мокрота, смывы, плевральный выпот, секционный материал, спинномозговая жидкость. Забор крови осуществляется в пробирку с антикоагулянтом (ЭДТА). Кусочек ткани объемом примерно 2 мм3, соскоб, мазок или спинномозговую 0,2 мл жидкость поместить в стерильную пробирку типа "Эппендорф" объемом 1,5 мл. Мокрота и моча собираются утром в домашних условиях в одноразовые пластиковые пробирки объемом 10–15 мл.
Туберкулёз, вопреки распространённому мнению, болезнь не только органов дыхания. Микобактерии могут разноситься с кровью и способны поражать практически все органы и системы. ПЦР-исследование на туберкулез является экспресс – диагностикой, позволяющей выявлять различные формы туберкулеза, которые трудно диагностируются другими лабораторными методами. Показаниями к назначению анализа может быть лихорадка, характеризующаяся ежедневным двойным повышением и понижением температуры тела, острые воспалительные заболевания верхних и нижних дыхательных путей с длительным контактом с туберкулезным больным в анамнезе. Положительная реакция на туберкулиновую пробу (гиперчувствительность или анергия) на фоне обострения какого-либо системного заболевания, подозрение на системную волчанку.
ПЦР – диагностика туберкулеза различных локализаций позволяет диагностировать активный туберкулез в несколько раз быстрее, чем бактериоскопический и бактериологический методы. С другой стороны, с помощью ПЦР можно осуществлять эпидемиологический контроль за бактериовыделителями, и тем самым индивидуально решать вопросы продолжения антибактериального лечения, несмотря на кажущуюся клинико-рентгенологическую стабилизацию специфического процесса.
Материалами для анализа могут служить мокрота, бронхоальвеолярный лаваж, спинномозговая жидкость, экссудаты, моча и пр., что позволяет эффективно выявлять как легочные, так и внелегочные формы инфекции.