Заключение

В настоящее время ПЦР-анализ остается наиболее распространен­ной и динамично развивающейся диагностической технологией. Ежегодно стремительно увеличивается количество ПЦР-лабораторий, появляется множество новых тест-систем для ПЦР-анализа, предназначенных как для выявления нуклеотидных последовательностей различных микроорганизмов – возбудителей заболеваний, так и для исследования генов человека. При этом себестоимость ПЦР-анализа неуклонно снижается, что способствует более широкому использованию этого метода диагностики.

Перспективы ПЦР-диагностики лежат в автоматизации всех процедур и совершенствовании преаналитического этапа диагностики, а также развитии мультиплексного и микрочипового подходов.

ПЦР является самым чувствительным и специфичным методом прямого обнаружения возбудителей, позволяющим не только устанавливать этиологию заболевания, но и осуществлять контроль над течением инфекционного процесса и оценивать эффективность проводимой терапии. Учитывая все вышесказанное, становится очевидным, что полимеразная цепная реакция является необходимым и обязательным методом обследования пациентов и должна находиться в арсенале каждого врача, занимающегося инфекционной и наследственной патологиями.

Вопросы для самопроверки

Для закрепления изученного материала по разделу контроля качества рекомендуем ответить на вопросы. Правильные ответы приведены в конце вопросов.

1. Молекулярная биология изучает:

1. Протекание биологических процессов на молекулярном уровне.

2. Строение клетки.

3. Морфологическое и физиологическое многообразие бактерий и вирусов.

2. Нуклеотид – это мономер:

1. Белков.

2. Нуклеиновых кислот.

3. Жиров.

3. ДНК содержит:

1. Рибозу, остаток фосфорной кислоты, одно из четырех азотистых оснований: аденин, гуанин, цитозин, тимин.

2. Дезоксирибозу, остаток фосфорной кислоты, одно из четырех азотистых оснований: аденин, гуанин, цитозин, тимин.

3. Дезоксирибозу, остаток фосфорной кислоты, одно из четырех азотистых оснований: аденин, гуанин, цитозин, урацил.

4. Основания, расположенные комплементарно друг другу:

1. А – Т; Г – Ц.

2. А – Ц; Г – Т.

3. А – Г; Ц – Т.

5. Основной фермент репликации:

1. ДНК-полимераза.

2. Геликаза.

3. Лигаза.

6. К первичной структурной организации ДНК относится:

1. Трехмерная спираль.

2. Две комплементарные друг другу антипараллельные полинуклеотидные цепи.

3. Полинуклеотидная цепь.

7. РНК в ядре сосредоточено в:

1. Ядерной оболочке.

2. Ядрышке.

3. Нуклеоплазме.

8. При работе с контрольной сывороткой возможны погрешности:

1. Потеря вещества при открывании ампулы.

2. Несоблюдение времени растворения пробы.

3. Хранение контрольной сыворотки при комнатной температуре.

4. Многократное замораживание контрольной сыворотки.

9. Формы контроля качества:

1. Внутрилабораторный.

2. Межлабораторный.

3. Инспекционная проверка.

10. На результат исследований влияет:

1. Центрифугирование.

2. Пипетирование.

3. Осаждение.

4. Изменение температуры.

11. Принципы проведения внутрилабораторного контроля качества:

1. Систематичность и повседневность.

2. Включение положительных и отрицательных образцов.

3. Включение контроля в обычный ход работы.

12. Межлабораторный контроль качества дает возможность:

1. Сравнить качество работы нескольких лабораторий.

2. Аттестовать контрольные материалы.

3. Стандартизировать методы и условия исследования.

4. Оценить качество используемых методов и аппаратуры.

13. Цель внешнего контроля качества:

1. Учет состояния качества проведения отдельных методов исследования в лабораториях определенной территории.

2. Контроль состояния качества проведения методов исследования в отдельных лабораториях.

3. Проверка надежности внутреннего контроля качества в отдельных лабораториях.

4. Воспитательное воздействие на улучшение качества проведения методов исследования.

14. Качественным исследованием можно назвать исследование,

которое:

1. Получило положительную оценку при проверке вышестоящей организацией.

2. Назначено для нуждающегося в нем пациента.

3. Своевременно выполнено.

4. На достаточном аналитическом уровне.

5. Имеет информацию для интерпретации.

15. Ошибки чаще всего встречаются на следующем этапе лабораторного исследования:

1. Преаналитическом.

2. Аналитическом.

3. Постаналитическом.

16. В памятке по обследованию пациентов методом ПЦР может отсутствовать информация, касающаяся:

1. Показаний для назначения необходимых анализов.

2. Подготовка пациента к обследованию.

3. Правил взятия биологического материала.

4. Порядка маркировки пробы и заполнения направления.

5. Условий транспортировки проб в лабораторию и сроков их доставки.

6. Температурного режима и продолжительности хранения материала.

7. Регистрации направлений и материала.

8. Порядка сортировки проб в лаборатории.

9. Рекомендуемого лечения в случае обнаружения возбудителя.

17. У пациентки М., 25 лет, в гинекологическом мазке методом микроскопии обнаружен возбудитель Trichomonas vaginalis. После проведенного лечения сделано исследование методом ПЦР на трихомониаз и гонорею. Результат ПЦР исследования трихомониаз – отрицательный, гонорея – положительный. Наиболее вероятное объяснение:

1. В лаборатории перепутали мазки.

2. Больная в период лечения заразилась гонореей.

3. Больная была поражена двумя инфекциями, но наличие возбудитель трихомониаза в мазке маскировало присутствие Neisseria gonorrhoeae до проведения лечения.

18. У пациентки Ж., 35 лет, при обследовании перед ЭКО методом ПЦР в гинекологическом мазке обнаружена ДНК возбудителя хламидиоза Chlamydia trachomatis. У пациентки в анамнезе вылеченная 10 лет назад хламидийная инфекция. У мужа аналогичное ПЦР исследование дало отрицательный результат. Наиболее вероятное объяснение:

1. ПЦР является одним из наиболее чувствительных клинических методов, позволяющих детектировать единичные молекулы ДНК, в мазке обнаружена ДНК возбудителей, которые погибли в результате химиотерапии 10 лет назад.

2. У пациентки хроническая хламидийная инфекция.

3. В лаборатории перепутали мазки.

19. Больной П. проходит лечение по поводу вирусного гепатита С. Перед началом лечения в крови больного методом ПЦР определено количество РНК HCV в крови (вирусная нагрузка) которая составила 10⁶ МЕ/мл. Через месяц после проведенного лечения аналогичное исследование показало 10³ МЕ/мл. Интерпретация результата:

1. Лечение неэффективно.

2. Лечение эффективно.

3. Необходимо определить генотип вируса гепатита С.

20. Пациент И., 5 лет, проходит обследование как контактный по поводу вспышки энтеровирусной инфекции в детском дошкольном учреждении. При ПЦР - исследовании на энтеровирусную инфекцию мазка из зева и крови пациента, РНК энтеровируса обнаружена в мазке из зева, но не обнаружена в крови. Дальнейшая тактика обследования пациента:

1. Срочная госпитализация с проведением диагностической спинномозговой пункции с последующим ПЦР исследованием ликвора на энтеровирус.

2. Результат отрицательный, больной здоров.

3. У больного отсутствует вирусемия, необходимо амбулаторное наблюдение в течении инкубационного периода.

21. У пациентки Н. беременность 2 недели, выявлены IgM против краснухи в высоком титре. ПЦР - исследование крови на краснуху возбудителя не выявило. IgG против краснухи не выявлены. Интерпретация результата.

1. Перекрестная иммунологическая реакция с другим антигеном, поскольку ПЦР отрицательна, пациентка здорова

2. Признаки начала заболевания, необходимо повторное ПЦР - исследование через 2 недели для подтверждения заболевания.

3. При краснухе период вирусемии очень короток и к моменту появления иммуноглобулинов вирус в крови обычно не обнаруживается. Диагноз может быть подтвержден при повторном серологическом исследовании.