- •Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования
- •Практическое занятие № 1
- •Практическое занятие № 2
- •Учебная карта Вопросы для подготовки к занятию
- •Практическая часть занятия Высаливание белков сыворотки
- •Тепловая денатурация белков
- •Домашнее задание
- •Практическое занятие №3 Лабораторный практикум
- •Учебная карта занятия Вопросы для подготовки к занятию
- •Практическая часть Специфичность действия ферментов
- •Влияние температуры на активность фермента
- •Влияние активаторов и ингибиторов на активность ферментов
- •Практическое занятие №4
- •Учебная карта занятия Вопросы для подготовки к занятию
- •Практическая часть занятия
- •Практическое занятие № 5
- •Практическое занятие №6 Коллоквиум
- •Учебная карта занятия Вопросы для самоподготовки
- •Практическое занятие № 7
- •Учебная карта занятия вопросы для подготовки студентов к занятию
- •Практическая часть
- •Домашнее задание
- •Практическое занятие 8
- •Учебная карта вопросы для подготовки к занятию
- •Задания для контроля исходных и текущих знаний студентов
- •Практическое занятие 9
- •Учебная карта занятия вопросы для подготовки к занятию:
- •Домашнее задание
- •Практическое занятие 10
- •Учебная карта занятия вопросы для подготовки к занятию:
- •Домашнее задание
- •Практическое занятие № 11
- •Учебная карта занятия вопросы для подготовки к занятию:
- •Практическая часть Семинар
- •Практическое занятие № 12 (семинар)
- •Учебная карта занятия вопросы для подготовки к занятию:
- •Практическое занятие № 13
- •Учебная карта занятия вопросы для подготовки к занятию
- •Практическая работа Определение содержания мочевой кислоты в сыворотке крови и моче по методу Мюллера-Зейферта
- •1.1. Первичная гиперурикемия
- •Синдром Леша-Нихена (ювенильная гиперурикемия)
- •Подагра
- •Вторичная гиперурикемии
- •2.Гипоурикемия
- •3. Нарушение обмена пиримидиновых нуклеотидов
- •Нарушение катаболизма пиримидинов Наследственная оротовая ацидурия
- •Практическое занятие № 14
- •Учебная карта занятия Вопросы для подготовки к занятию
- •Практическое занятие № 15
- •Учебная карта занятия вопросы для подготовки к занятию:
- •Практическая часть занятия
- •Практическое занятие № 16
- •Учебная карта занятия вопросы для подготовки к занятию:
- •Практическая часть Определение активности алт и аст
- •Источники и пути обезвреживания аммиака в разных тканях
- •Практическое занятие № 17
- •Учебная карта занятия вопросы для подготовки к занятию:
- •Практическое занятие № 18
- •Учебная карта занятия вопросы для подготовки к занятию: Содержание темы
Влияние температуры на активность фермента
-амилазы слюны (термолабильность ферментов)
Активность ферментов зависит от температуры. Та температура, при которой активность фермента наибольшая, называется температурным оптимумом (opt-t). Для организма человека opt-t находится в пределах 37-40С. Снижение t приводит к уменьшению активности ферментов, и при очень низких температурах (О - +4С) ферментативная активность практически прекращается, т.к. резко изменяются кинетические свойства ферментов. Поэтому снижение активности ферментов имеет обратимый характер: при повышении температуры ферментативная активность полностью восстанавливается.
Повышение t выше opt-t приводит к постепенному снижению активности и при достижении определенной t для каждого фермента – к полной инактивации фермента, которая является необратимой. При t - 60С, (для некоторых 70-100С) происходит денатурация белка-фермента, разрушение активного центра фермента, образование Е-S-комплекса становится невозможным, и ферментативная реакция прекращается.
( На термолабильность ферментов определенное влияние оказывают концентрация S, рН среды и др. факторы.)
Ход работы
В 4 пробирки отмерить по 4 мл 0,5% раствора крахмала и по 1 мл слюны, разведенной в 10 раз. Пробирку 1 поместить в кипящую баню, 2 пробирку в ледяную баню, пробирку 3 –в термостат при температуре 38С, пробирку 4 оставить при комнатной температуре. Через 10 минут содержимое каждой пробирки разделить на 2 части и провести пробу Фелинга, а с другой частью –пробу Люголя.
Реакция Люголя. Реакция обнаруживает крахмал. К содержимому пробирки добавить 1 каплю раствора Люголя. Появление синего окрашивания свидетельствует о наличии крахмала.
Реакция Фелинга. К содержимому пробирки добавить примерно половину объема 10% раствора КОН и по каплям 1% раствора CuSO4 до образования неисчезающей мути на фоне голубой окраски раствора. Верхний слой жидкости нагреть на пламени спиртовки. Появление желтого окрашивания, преходящего в кирпично-красное, указывает на наличие редуцирующих углеводов.
Результат оформляют в виде таблицы, объясняют причины разной активности -амилазы в зависимости от температуры.
Nпроб |
Температура С |
Реакция с реактивом Люголя |
Проба Фелинга |
выводы |
1 |
|
|
|
|
2 |
|
|
|
|
3 |
|
|
|
|
4 |
|
|
|
|
Влияние рН на активность амилазы
Оптимум - рН для различных ферментов имеет различное значение, это зависит от аминокислотного состава ферментов,
оpt рН для -амилазы слюны – 6,8-7,0;
- липазы панкреатической – 7,0-8,5;
пепсина 1,5 - 2,5;
аргиназы – 9,5- 10,0;
сахаразы кишечной- 5,8-6,2.
Любое изменение реакции среды (в кислую или щелочную сторону от оптимума – рН) снижает активность фермента. Последнее связано с изменением диссоциации ионогенных групп ферментного белка (в том числе и в активном центре). В результате меняется конформация всей молекулы фермента и форма активного центра. Таким образом, комплементарность между субстратом и активным центра фермента нарушается, образование фермент-субстратного комплекса замедляется и активность фермента снижается.
Изменение диссоциации ионогенных групп может происходить и в некоторых субстратах, что также приводит к нарушению комплементарности между активным центром и субстратом.
Смещение же рН в сильно кислую или щелочную сторону может вызывать денатурацию ферментного белка, потерю нативной конформации и разрушение активного центра фермента. Последнее исключает возможность образования фермент-субстратного комплекса и приводит к инактивации фермента.
Ход работы
1.В три пробирки вносят по 3 мл буферных растворов с рН 2,0; 7,0; 9,0.
2.Во все пробирки прибавляют по 2 мл 0,5% раствора крахмала и по 1 мл разбавленной в 10 раз слюны. Содержимое пробирок перемешивают и помещают в термостат при 40С на 10 минут.
3.Пробирки охлаждают, и с содержимым проделывают реакции Люголя и реакцию Фелинга. При этом следует учесть, что реакция на крахмал с раствором Люголя положительна только в кислой или нейтральной среде, а проба Фелинга протекает в щелочной среде. (Принцип метода: Проба Фелинга и Ниландера основаны на восстановительных свойствах глюкозы, которая в щелочной среде при нагревании, окисляясь восстанавливает металл (в пробе Фелинга до Сu2О - красный цвет, в пробе Ниландера до свободного Bi - черный цвет).
ПРОБА ФЕЛИНГА.
К I мл исследуемого раствора (мочи) приливают 0,5 мл реактива Фелинга, нагревают пробирку до кипячения и кипятят I мин. В случае положительной реакции на глюкозу наблюдается красное окрашивание вследствие образования оксида меди (Сu2O).
4.Наблюдают результаты и данные вносят в таблицу.
Nпроб |
Рh среды |
Реакция с реактивом Люголя |
Проба Фелинга |
Выводы |
1 |
|
|
|
|
2 |
|
|
|
|
3 |
|
|
|
|
4 |
|
|
|
|