Добавил:
Sekretar
kiopkiopkiop18@yandex.ru
t.me/Prokururor I Вовсе не секретарь, но почту проверяю
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Ординатура / Хирургия / Библиотека им академика М.И. Перельмана / Книга_4108_Библиотеки_им_академика_М_И_Перельмана
.pdf
Система омплемента и механизмы реляции объема эритроцита…
101
воздействия любой этиолоии [10, 27]. Однао информация об из-
менении онцентрации этих веществ ардиохирричесих боль-
ных во время ИК в литератре отстствет.
Несмотря на послеоперационное снижение, ативность
Nа
+
/K
+
-ATФазы в эритроцитах больных с выраженным емолизом
соответствовала таовой пациентов с меренной емолобинемией
после ИК (см. рис. 5), что само по себе не может объяснить вариа-
бельность емолитичесих реаций. Принимая во внимание осо-
бенности методии определения ативности данноо фермента в
сспензии отмытых теней эритроцитов в пристствии эзоенноо
АТФ строо определенной онцентрации [39], полченные резль-
таты ардиохирричесих больных не читывали внтриэритро-
цитарное содержание АТФ а сбстрата для деятельности фермен-
та [3, 286, 377]. Межд тем, в эритроцитах был обнаржен дефицит
содержания АТФ
29
больных с выраженным постперфзионным
емолизом и нормальное содержание мароэра пациентов с ме-
ренной емолобинемией вне зависимости от этапа исследования
(см. рис. 5). Это вполне соласется с неоднозначными данными
литератры о модляции энеретичесоо метаболизма эритроцитов
на фоне атерослероза, демонстрирющими а недостато АТФ
в летах расной рови [199], та и ео нормальное оличество
[9, 80]. Среди возможных причин дефицита АТФ в эритроцитах
больных атерослерозом рассматриваются несольо механизмов:
наршение ативности лиолитичесих ферментов, повышенная
тилизация люозы в реациях пентозофосфатноо пти с целью
поддержания восстановительных процессов, расход АТФ и аденозин-
монофосфата (АМФ) через повышение ативности АМФ-дезаминазы
вследствие силения осидативноо повреждения эритроцитов [80].
В дооперационном периоде интенсивность процессов ПОЛ в
эритроцитах больных обеих рпп была одинаовой (см. табл. П.10),
что позволяет ислючить свободнорадиальный механизм
29
Содержание АТФ в эритроцитах определяли в емолизате, очищенном от
емолобина 20%-й трихлорссной ислотой, разделяя АТФ, АДФ и адено-
зинмонофосфат методом тонослойной хроматорафии в смеси растворителей
«диосан : изопропанол : аммиа : вода» с последющей элюцией АТФ из соот-
ветствющей области хроматораммы (верифицировали с помощью реаента
АТФ (Sigma, США)) в растворе 0,01N HCl [7, 36].
https://t.me/med1917
Глава 5
102
и предположить именно недостаточность ферментов лиолиза а
причин дефицита АТФ в летах лиц с выраженным емолизом,
оторых том же был зафисирован дефицит фермента пентозо-
фосфатноо шнта Г-6-ФДГ (см. табл. П.10). Последнее еще раз под-
черивает неполноценность молодой попляции эритроцитов, обра-
земой больных этой рппы на фоне напряженноо эритропоэза,
посоль известно, что ферменты лиолиза в ретилоцитах более
ативны, чем в старых летах [69, 74, 158]. Кроме тоо, на содержа-
ние АТФ в эритроцитах неативное влияние может оазывать интен-
сивное фнционирование АТФаз [10, 74, 381], в связи с чем пони-
женная ативность Nа
+
/K
+
-ATФазы эритроцитарной мембраны
больных с меренным емолизом мола способствовать сохранению
внтрилеточноо пла АТФ в пределах нормы (см. рис. 5).
Известно, что роль АТФ в эритроцитах тесно связана с фн-
ционированием цитослета, при фосфорилировании белов ото-
роо деформиремость лето возрастает [99, 109, 156]. Поэтом не
ислючено, что дефицит АТФ в летах расной рови больных
с выраженным емолизом способствовал величению риидно-
сти (см. табл. П.7), обсловленном, предположительно, дефетом
стртры спетрин-атиновой сети. С дрой стороны, неоторые
бели цитоселета (β-спетрин, анирин и бело полосы 3) част-
вют в формировании мембранноо пла АТФ, необходимоо для
фнционирования АТФаз, а бело полосы 3 том же ассоцииро-
ван с ферментами лиолиза [10, 54, 149, 181]. За связь с данным
белом онрирет восстановленный емолобин, наапливаю-
щийся в эритроцитах на фоне периоперационной ипосии или
в словиях избыта 2,3-дифосфолицерата (2,3-ДФГ), оторый в
большом оличестве содержится в молодых эритроцитах [69, 80,
132, 149, 158]. Учитывая высоовероятню дисфнцию белов ци-
тоселета и значительный ретилоцитоз больных с выраженным
емолизом, оба фатора мот способствовать истощению мем-
бранноо пла АТФ при ео общем дефиците в лете (см. рис. 5),
опосредя нетение деятельности АТФаз, сбление ионноо
дисбаланса и емолиз. Следет отметить, что высоое содержание в
эритроцитах 2,3-ДФГ (ввид ретилоцитоза), снижающео сродст-
во емолобина ислород, вероятно, обсловливает чрезмерное
величение рО
2
в рови этих больных во время ИК (см. табл. П.4),
https://t.me/med1917
Система омплемента и механизмы реляции объема эритроцита…
103
оторое создается с целью 100%-о насыщения емолобина исло-
родом [65] и таим образом провоцирет манифестацию предсще-
ствющео дефицита антиосидантов (см. табл. П.10).
В послеоперационном периоде онцентрация АТФ в эритроци-
тах больных ИБС обеих рпп исследования изменялась не значи-
тельно (см. рис. 5), что продемонстрировано и дрими авторами [9,
174]. В словиях эспериментальноо деформационноо стресса в
эритроцитах возрастает потребление АТФ, но при наличии люозы
в инбационной среде омпенсаторно силиваются и процессы ео
ресинтеза. Поазано, что через 30–60 мин после начала сдвиовой
нарзи продция АТФ в летах становится больше исходных
значений, постепенно снижаясь в последющем [99]. Данный фат
объясняет зареистрированню нами отчетливю тенденцию сни-
жению ровня АТФ в эритроцитах ардиохирричесих больных
(см. рис. 5) через 100–120 мин ИК (см. табл. 4). При этом пациен-
тов с выраженным емолизом сохраняющийся после операции де-
фицит АТФ в эритроцитах сочетается со снижением исходно нор-
мальной ативности Nа
+
/K
+
-ATФазы (см. рис. 5), что, видимо, опо-
средет величение объема лети (по отношению таовом
больных с меренной емолобинемией, см. табл. П.13) и способст-
вет быстром лизис эритроцитов.
Дрим механизмом, способным влиять на леточный объем, яв-
ляется система Са
2+
-зависимых
K
+
-аналов (K
+
(Са
2+
)-аналов), от-
рывание оторых при повышении внтрилеточных онцентраций
Са
2+
приводит пассивном выход ионов K
+
из лети, что влечет за
собой даление Сl
-
по элетрохимичесом радиент и Н
2
О [117, 293,
414]. Это наиболее раннее событие в асаде цитотосичесих реа-
ций, индцированных ионами Са
2+
, блаодаря чем при величении
проницаемости мембраны объем лети стабилизирется и может да-
же меньшаться [3]. Данный механизм предохраняет эритроциты от
осмотичесоо лизиса при развитии миросфероцитоза и омпле-
мент-зависимоо повреждения [3, 45, 74,; 86, 203].
Одним из способов оцени проводимости K
+
(Са
2+
)-аналов сл-
жит реистрация Са
2+
-индцированноо
иперполяризационноо от-
вета (ГПО) эритроцитов, оторый дает представление не тольо о со-
стоянии K
+
(Са
2+
)-аналов, но и освенные сведения об ативности
Са
2+
-АТФазы мембраны эритроцитов [79, 86]. Та, изчение ГПО
https://t.me/med1917
Глава 5
104
эритроцитов
30
поазало, что сорость иперполяризации мембраны и
амплитда ГПО больных ИБС соответствовали норме вне зависимо-
сти от выраженности постперфзионноо емолиза и этапа исследо-
вания (см. табл. П.13). Соласно данным литератры, эти поазатели
харатеризют сммарню проводимость K
+
(Са
2+
)-аналов, оторых в
эритроците насчитывается несольо десятов, и фнционирют
они по принцип «все или ничео», т.е. мот находиться тольо в двх
состояниях – либо полностью отрыты, либо полностью зарыты [86,
293, 414]. Являясь пассивным ионным транспортером, K
+
(Са
2+
)-а-
налы, по всей видимости, менее чвствительны изменениям липид-
ноо спетра мембраны эритроцитов на фоне атерослероза, чем
АТФазы, что объясняет нормальные значения V
1
и ∆E больных ИБС.
Кроме тоо, поазано, что K
+
-проводимость мембраны эритро-
цитов
при патолоии может а снижаться (онолоичесие, воспа-
лительные заболевания), представляя собой неспецифичесий ответ
эритроцитов на повреждение, та и возрастать, являясь следствием
ретилоцитоза при емолитичесих реациях (миросфероцитоз)
[86, 315]. Вероятно, больных ИБС сочетание неспецифичесой
альтерации эритроцитов на фоне атерослероза с силением их и-
бели и ативацией эритропоэза определило в целом нормальные
поазатели отрывания K
+
(Са
2+
)-аналов.
В то же время пациентов с выраженной емолобинемией отме-
чалось неоторое величение сорости иперполяризации мембраны
V
1
и амплитды ∆E ГПО эритроцитов до операции (см. табл. П.13),
что, предположительно, связано с высоим содержанием ретилоци-
тов в рови (см. табл. П.3), та а молодые формы эритроцитов об-
ладают большей проводимостью K
+
(Са
2+
)-аналов [380]. В после-
операционном периоде была зареистрирована отчетливая тенден-
ция снижению величины данных поазателей (см. табл. П.13), что
демонстрирет, очевидно, повреждение мембраны эритроцитов при
30
Проводимость K
+
(Са
2+
)-аналов эритроцитов оценивали методом реист-
рации мембранноо потенциала при Са
2+
-индцированном иперполяризацион-
ном ответе лето, в ходе отороо мембранный потенциал эритроцитов при
добавлении Са
2+
и альциевоо ионофора А23187 сначала возрастает (иперполя-
ризация), что обсловлено отрыванием K
+
(Са
2+
)-аналов, а затем восстанавлива-
ется до поазателей нормы вследствие ативации Са
2+
-АТФазы,
даляющей ионы
Са
2+
из цитоплазмы и опосредющей зарывание этих стртр [79, 86].
https://t.me/med1917
Система омплемента и механизмы реляции объема эритроцита…
105
выраженном емолизе. У пациентов с меренной емолобинемией,
напротив, сорость иперполяризации мембраны эритроцитов даже
несольо возрастала, что, вероятно, явилось следствием более зна-
чительноо ретилоцитоза (см. табл. П.3, П.13).
Несмотря на то, что поазатели отрывания K
+
(Са
2+
)-аналов не
отличались больных сравниваемых рпп, параметры зарывания
этих стртр оазались различными (см. табл. П.13). Сорость вос-
становления мембранноо потенциала эритроцитов V
2
до операции
больных с меренным емолизом была сщественно ниже, чем па-
циентов с выраженной емолобинемией и здоровых доноров
(см. табл. П.13). Это соласется с данными литератры об нетении
ативности Са
2+
-АТФазы в мембране эритроцитов лиц, страдающих
атерослерозом [64, 74]. Механизм ее инибирования, очевидно, ана-
лоичен таовом для Nа
+
/K
+
-ATФазы – величение соотношения
ХС/ФЛ в мембране эритроцитов, наршение ее ФЛ-спетра, атива-
ция ПОЛ, что поазано нами для больных ИБС (см. табл. П.8, П.10,
П.11). При этом нормальная дооперационная величина V
2
и, соответ-
ственно,
ативность Са
2+
-АТФазы (а и Nа
+
/K
+
-ATФазы) в эритро-
цитах пациентов с выраженным емолизом мот быть связаны с
высоим содержанием ретилоцитов в рови (см. табл. П.3), в ото-
рых ативность ионных насосов выше, чем в старых летах [143].
В послеоперационном периоде ардиохирричесих боль-
ных определялись реципроные тенденции в изменении сорости
восстановления мембранноо потенциала: при меренной емо-
лобинемии она несольо снижалась, а при выраженной – сще-
ственно возрастала, превышая таовю больных первой рппы
(см. табл. П.13). Время достижения масимальноо потенциала
мембраны при ГПО эритроцитов ∆Т
пациентов с выраженным
емолизом соращалось менее нормы, чео не отмечалось них до
операции, а таже больных с меренным емолизом на обоих эта-
пах исследования (см. табл. П.13).
Графичесая реистрация Са
2+
-индцированноо ГПО эритро-
цитов ардиохирричесих больных после операции обнаржила
неоднозначный харатер ривой: при меренном емолизе ее форма
харатеризовалась орлой вершиной и плавным спсом, в слчае
выраженной емолобинемии – остроонечным масиммом и бы-
стрым восстановлением мембранноо потенциала (рис. 6).
https://t.me/med1917
Глава 5
106
а
б
Рис. 6. Примеры ривых изменения рН инбационной среды при рафиче-
сой реистрация Са
2+
-индцированноо иперполяризационноо ответа эрит-
роцитов больных ишемичесой болезнью сердца с меренным (а) и выражен-
ным (б) емолизом после операции с иссственным ровообращением: V
1
–
сорость иперполяризации мембраны эритроцитов; V
2
– сорость восстанов-
ления мембранноо потенциала эритроцитов; ∆Е – масимальное изменение
мембранноо потенциала при ГПО; ∆T – время, через оторое отмечалась
масимальная иперполяризация мембраны эритроцитов при ГПО
рН
рН
V
1
V
2
V
1
V
2
∆Е
∆Т
∆Т
∆Е
Пациент Д., 60 лет
Пациент М., 58 лет
https://t.me/med1917
Система омплемента и механизмы реляции объема эритроцита…
107
При анализе подобных диарамм становится очевидным, что
площадь, ораниченная рафиом и изолинией, больных с выра-
женным емолизом намноо меньше таовой в рппе сравнения
(рис. 6). Это означает, что больных с меренной емолобинемией
из-за пониженной ативности Са
2+
-АТФазы в мембране эритроци-
тов реверсия внтрилеточной онцентрации Са
2+
до вазистацио-
нарноо состояния лети происходит медленно, потом медленно
зарываются K
+
(Са
2+
)-аналы, блаодаря чем из лети даляется
большее оличество ионов K
+
, а объем эритроцита сильно мень-
шается,
предохраняя ео от цитолиза на фоне возросшей проницае-
мости мембраны во время ИК. В слчае выраженноо емолиза с-
оренная индция Са
2+
-АТФазы при повышенной ативности
фермента обсловливает соренню элиминацию ионов Са
2+
из
лети, K
+
(Са
2+
)-аналы быстро зарываются (т.. реистрирется
соращение ∆Т) и объем эритроцита меньшается незначительно
(см. табл. П.13), что при высоой проницаемости цитолеммы
(см. табл. П.12) способствет сорейшем лизис лети.
Следовательно, частие K
+
(Са
2+
)-аналов в патоенезе выра-
женноо постперфзионноо емолиза является весьма важным
фатором, но определяется оно интраоперационным изменением
инетии Са
2+
-АТФазы. При этом, видимо, меняется не стольо ее
ативность, сольо сорость индции фермента: время достиже-
ния масимма ГПО эритроцитов соращается и становится мень-
ше нормальных значений (см. табл. П.13). Не ислючено таже из-
менение инетичесих параметров самих K
+
(Са
2+
)-аналов, в ре-
зльтате чео они начинают зарываться при внтрилеточных
онцентрациях Са
2+
, несольо больших, чем в норме.
Можно предположить, что причиной ативации Са
2+
-АТФазы в
эритроцитах больных с выраженным емолизом слжит интраопе-
рационноая интенсифиация ПОЛ, посоль известно, что незна-
чительная свободнорадиальная модифиация Са
2+
-АТФазы, а и
частичный ее протеолиз эндоенным альпаином или дрими про-
теазами, приводят величению ативности фермента [10, 45, 346].
Ативация протеининазы С оазывает аналоичный эффет; тода
а ативация цАМФ-протеининазы и опосредованное ею фосфо-
рилирование белов цитоселета нетают фнционирование Са
2+
-
АТФазы [74, 186].
https://t.me/med1917
Глава 5
108
Кроме тоо, сществют альмодлин- и фосфолипид-зависимая
реляция ативности Са
2+
-АТФазы, молелы оторой обладают
различными сайтами связывания для этих фаторов. В пристствии
высоих онцентраций лФХ, ФС, ФИ, ФХ и ФЭА в липидном бислое
деятельность Са
2+
-АТФазы возрастает [10, 74, 296]. Однао содержа-
ние ФС и ФЭА в мембране эритроцитов после операции больных
обследованных рпп было равным, доля лФХ во время операции при
выраженном емолизе нарастала, но не превышала значений рппы
сравнения, а в отношении ФХ и ФИ обнарживался даже дефицит
таовых (см. табл. П.11). В связи с этим наиболее вероятно, что ати-
вация Са
2+
-АТФазы в мембране эритроцитов при выраженном емо-
лизе происходила через альмодлин-зависимые механизмы.
Кальмодлин содержится в эритроцитах в большом оличестве,
превышающем онцентрацию Са
2+
, блаодаря чем выполняет роль
цитоплазматичесоо бфера. При величении интрацеллюлярной
онцентрации Са
2+
, образющийся омплес альмодлин-Са
2+
ати-
вирет Са
2+
-АТФаз [10, 74, 296, 346]. Несмотря на то что оцена со-
держания Са
2+
в эритроцитах ардиохирричесих больных в на-
стоящем исследовании не проводилась, мы реистрировали пациен-
тов с выраженным емолизом, в отличие от представителей дрой
рппы, все освенные признаи наопления Са
2+
в лете после опе-
рации: ативацию фосфолипазы А
2
(ФЛ-А
2
) (по наоплению лФХ в
мембране эритроцитов, см. табл. П.11), эхиноцитарню трансформа-
цию лето (см. табл. П.6) и собственно ативацию Са
2+
-АТФазы
(меньшение V
2
при ГПО эритроцитов, см. табл. П.13). Учитывая дан-
ный фат, и то что неспецифичесая проницаемость мембраны эрит-
роцитов после операции больных обеих рпп была одинаово по-
вышенной (см. табл. П.12), при выраженной емолобинемии, веро-
ятно, имеет место избирательное постпление Са
2+
в эритроциты.
Сществют данные о том, что ислые фосфолипиды, ФС и ФК
мот элетрохимичеси связывать Сa
2+
, а последняя даже названа
природным ионофором альция, посоль транспортирет ео
внтрь лети [10, 296]. Межд тем, роль данноо механизма в ве-
личении проницаемости мембраны эритроцитов для Сa
2+
маловеро-
ятна, та а содержание ФК в липидном бислое возрастало после
операции а при выраженном, та и при мерненном емолизе
(см. табл. П.11). Поэтом амляция Сa
2+
в эритроцитах паци-
ентов с выраженной емолобинемией обсловлена либо отрыва-
https://t.me/med1917
Система омплемента и механизмы реляции объема эритроцита…
109
нием Сa
2+
-аналов, либо частием неспецифичесих ионных ана-
лов [99, 109, 204, 273].
В настоящее время поазано, что постпление Сa
2+
в эритроциты
происходит через неспецифичесие атионные аналы TRPC6 типа,
оторые ативирются при оислительном стрессе и воздействии
просталандина Е
2
[204, 269]. Посоль больных с выраженным е-
молизом, в отличие от пациентов с меренной емолобинемией, от-
мечалось интраоперационное наопление ТБК-ативных продтов и
ативация ФЛ-А
2
(по нарастанию ровня лФХ в эритроцитах), то, ви-
димо, отрытие TRPC6 аналов инициировало вход Сa
2+
в лет.
Вместе с тем, постпление Сa
2+
в эритроциты может ораничиваться в
пристствии эритропоэтина (EPO), оторый в онцентрациях до
1000 мМЕ/мл дозозависимо блоирет этот процесс [272, 316].
Измерение онцентрации EPO
31
в плазме рови ардиохирр-
ичесих больных поазало, что пациентов с меренным емоли-
зом данный поазатель превышал таовой в рппе сравнения на
обоих этапах исследования (см. табл. П.3). Это означает, что эрит-
роциты пациентов с меренным емолизом более защищены от
постпления Сa
2+
в лет. У больных с высоой интенсивностью
емолитичесих реаций избыто Сa
2+
в эритроцитах после опера-
ции, по-видимом, обсловливался сочетанием двх фаторов: си-
лением ативирющих влияний на TRPC6-аналы (ативация ПОЛ
и ФЛ-А
2
) и недостаточной эритропоэтин-зависимой протецией
лето, в то время а при меренном емолизе ативационные
стимлы сохранялись на дооперационном ровне при значительном
величении протетивной роли EPO. Более тоо, последний меха-
низм, сорее всео, является основополаающим, та а, соласно
резльтатам ластерноо анализа
32
, онцентрация EPO в плазме
31
Концентрацию эритропоэтина в плазме рови определяли методом твер-
дофазноо иммноферментноо анализа с помощью оммерчесоо набора
«Эритропоэтин-ИФА-БЕСТ» (ЗАО «Ветор-Бест», Новосибирс) соласно
инстрции производителя.
32
Кластерный анализ выполняли в объединенной попляции больных
ИБС (с меренным и выраженным емолизом) методом k-средних, считая ре-
зльтат статистичеси значимым в слчае наличия достоверных различий меж-
д образованными ластерами при ровне статистичесой значимости р < 0,05.
Графичеси алоритм ластеризации отражали в виде дендрорамм.
https://t.me/med1917
Глава 5
110
рови после операции позволяет распределить общю попляцию
больных ИБС на рпп с меренной и выраженной емолобине-
мией (см. табл. П.14, рис. 7). Взаимосвязь «ЕРО – K
+
(Са
2+
)-аналы –
объем лети» таже подтверждается тенденцией ластеризации
для параметра V
2
ГПО эритроцитов (р = 0,069) и резльтатами дис-
персионноо анализа: содержание EPO в рови после операции
вносит 13,2% (р < 0,05) в вариабельность постперфзионной емоло-
бинемии, параметр ∆Т (отражает время ативации Са
2+
-АТФазы) –
18,7% (р < 0,05), а средний объем эритроцитов – 23,9% (р < 0,05).
C_89
C_88
C_78
C_76
C_93
C_75
C_83
C_79
C_92
C_73
C_90
C_77
C_72
C_85
C_70
C_149
C_132
C_87
C_131
C_144
C_143
C_130
C_129
C_127
C_125
C_145
C_141
C_138
C_135
C_136
C_126
C_146
C_133
C_139
C_69
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Величина эвлидовоо расстояния
Рис. 7. Дендрорамма ластеризации больных ишемичесой болезнью сердца
в зависимости от содержания эритропоэтина в плазме рови после операции
и выраженности постперф#зионной емолобинемии (С – од пациента,
под оторым зашифрована пара значений «онцентрация эритропоэтина»
и «онцентрация свободноо емолобина»)
Таим образом, в основе ионноо дисбаланса эритроцитов и
внтрисосдистоо емолиза во время ИК лежат сложные механиз-
мы. У больных с меренным постперфзионным емолизом атив-
ность АТФаз в мембране лето расной рови до операции пони-
Код пациента
https://t.me/med1917
Соседние файлы в папке Библиотека им академика М.И. Перельмана