4.2.6. Жидкостная высокоскоростная (высокоэффективная) хроматография

Этот метод применяют для разделения растворимых нелетучих соединений. для того, чтобы уменьшить продолжительность разделения, растворитель (подвижная фаза) подается под давлением от 2 до 60 МПа (2- 600 атм), скорость растворителя от 10 до 60 мл/мин.

Схема жидкостного хроматографа представлена на рис. 4.9.

По составу неподвижной и подвижной фаз различают:

1. Жидко-твердофазная хроматография (ЖТХ). В качестве подвижной фазы применяют органические растворители или их смеси, твердой фазой (неподвижной фазой) является активированньгй оксид алюминия, диоксид кремния, кракмал, тальк, силикагель, полимерные макропористые сорбенты, поверхностно-пористые сорбенты и др.

2. Жидко-жидкостная хроматография (ЖЖХ). Хроматографическая колонка заполняется инертным носителем - гранулированные полимеры с высокой пористостью (полистирол, тефлон и др.), которые прочно удерживают растворитель - неподвижную фазу. Неподвижной фазой являются органические соединения, а подвижной - неорганические растворители. Если в качестве неподвижной фазы используют воду, то подвижной фазой будут органические растворители.

Рис. 4.9. Схема жидкостного хроматографа: 1- резервуар с растворителем; 2 - насос; З - устройство для ввода пробы: 4 - колонка хроматографическая; 5 - детектор; б - самописец; 7 - коллектор фракций

В жидкостной хроматографии применяются самые разнообразные сочетания подвижной и неподвижной фаз, так как широко используют для анализа смесей органических соединений, витаминов, нуклеиновых кислот, пестицидов и др.

Давление создается насосами различных конструкций (механические и пневматические). Образец, как и в газовой хроматографии, вводят в колонку с помощью микрошприцев. Колонки изготовлены из нержавеющей стали, стекла, тефлона, диаметр их 1,2-8 мм, длина 10-100 см. В высокоскоростной хроматографии наиболее распространены ультрафиолетовый детектор с фиксированной длиной волны 254 нм (иногда 280 нм). При этой длине волны поглощают все ароматические и многие другие органические соединения, а также неорганические комплексы, Кроме того, применяют флюориметрические (измерение интенсивности люминесценции), радиоактивные, рефрактометрические, полярографические детекторы.

Преимуществом высокоскоростной хроматографии является не только большая скорость разделения, но и высокая разделяющая способность, высокий предел обнаружения (10^-9 г), возможность многократного использования хроматографических колонок.

4.2.7. Гель-хроматография

Гель-хроматографию иначе называют гель-фильтрацией. Этот метод разделения и очистки веществ основан на различии в молекулярных массах компонентов смеси. Особенно эффективно разделение проводится в случае применения гранулированных гелей. В 1959 г. был получен продут растворимого полимера декстрана с эпихлоргидрином - универсальный гель - сефадекс. Гранулы геля помещают вместе с растворителем в колонку и вещества с разной молекулярной массой разделяются в ней при промывании геля чистым растворителем. Крупные молекулы не проникают внутрь гранул, а остаются только в окружающем их слое растворителя (внешний объем). Поэтому крупные молекулы перемещаются по колонке с большей скоростью, чем мелкие, движение которых постоянно тормозится диффузией в неподвижную фазу (гель)

Сефадекс применяют для различных биохимическях и технологических исследований с целью разделения на фракции белков, углеводов и т.д.