3.8. Аппаратура люминесцентного анализа

Большинство пищевых продуктов люминесцирует как в ультрафиолетовой, так и в видимой областях спектра. В качестве источника возбуждения люминесценции применяют ртутные и ртутно-кварцевые. лампы. Отечественная промышленность выпускает различные типы люминесцентных ламп и флуориметры. Широкое применение нашел лабораторный флуориметр ЭФ-ЗМА, предназначенный лля измерения концентрации флуоресцирующих растворов путем сравнения яркостей свечения исследуемого и эталонных растворов. Оптическая схема флуориметра представлена на рис. 3.2.

Свет (определенной длины волны λ = 350-480 нм) от ртутно-кварцевой лампы 1 проходит через отверстие диафрагмы 2, первичный светофильтр 3, линзы 4 и направляется на кювету с исследуемым веществом 5, вызывая его свечение. Свет флуоресцирующего раствора (длиной волны λ = 510-650 нм) попадает в систему линз 6, расположенных с двух сторон кюветы, проходит через вторичные светофильтры 7 и поступает на фотоэлементы 8. Фотоэлемент, преобразовывая световую энергию флуоресценции в злектрическую, подает ее на вход электронного усилителя. В анодной цепи электронного усилитеяя подключен гальвавометр, показания которого прямо пропорциональны концентрации вещества.

Рис. 3.2. Оптическая схема флуориметра ЭФ-3МА:

1 – кварцевая лампа; 2 – диафрагма; 3 – светофтльтр первичный; 4 – линзы;

5 – кювета с исследуемым раствором; 6 – линзы; 7 – вторичные светофильтры;

8 – фотоэлементы.

РАБОТА 1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИТАМИНА В₂ (РИБОФЛАВИНА) ФЛУОРОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ АНАЛИЗА

Витамин В₂ играет большую роль в обмене веществ. Недостаток рибофлавина в пище вызывает нарушение аппетита, падение веса, слабость, резь в глазах, болезненные ощущения в слизистых оболочках рта.

В твердом виде рибофлавин представляет собой желто-оранжевые иглы горького вкуса. Насыщенный водный раствор его имеет рН = 6, окрашен в желто-зеленый цвет с характерной желто-зеленой флуоресценцией в видимом и УФ-свете. Спектр флуоресценции лежит в области 515-615 нм, λ = 565 нм.

Рибофлавин легко восстанавливается рядом восстановителей в лейкорибофлавин. Встряхивание растворов лейкорибофлавина на воздухе приводит к тому, что он вновь переходит в окисленную форму - рибофлавин, с восстановлением окраски и флуоресценции.

Встречается в природе в свободном виде, но чаще всего в виде нуклеотидных форм (формы, связанные белком).

Для освобождения рибофлавина от его нуклеотидных форм применяют кислотный гидролиз и обработку ферментными препаратами.

В водных растворах химически чистого витамина В₂ интенсивность флуоресценции измеряют непосредственно, без предварительной обработки раствора.

Флуоресцирующая способность рибофлавина дает возможность определигь его количественно с помощью методов люминесцентного анализа.

Аппаратура ы реактивы

1. Флуориметр ЭФ-3МЛ,

2. Мерные колбы вместитеяьностью 50 мл,

3. Бюретка вместимостью 25 мл,

4. Стандартный раствор рибофлавина, 1 мл стандартного раствора содержит 40 мкг витамина В₂. Раствор хранят в темноте на холоде в течение месяца.