Ход работы

Для определения РОЭ необходимо избежать свертывания крови. С этой целью в капилляр до метки Р ртом насосите из колбы противосвертывающее вещество – 5 % раствор лимоннокислого натрия и осторожно в виде капли выдуйте его на дно фарфоровой чашки или в углубление часового стекла. После этого приступайте к взятию крови из хвостовой вены рыбы. Получив крупную, нерастекающуюся каплю крови на отсеченном скальпелем хвостовом отделе рыбы поднесите к ней капилляр, промытый цитратом натрия, первоначально под углом 45°. По мере того как кровь будет подниматься в капилляр, меняйте его положение до горизонтального и несколько ниже. Следите за тем, чтобы в капилляр не попадали пузырьки воздуха. Наберите кровь до метки К и осторожно выдуйте ее в раствор цитрата натрия на дне фарфоровой чашки или в углубление часового стекла. Далее, в фарфоровой чашке тщательно перемешайте кровь с раствором цитрата натрия, набирая ее несколько раз в капилляр и опять выдувая. Затем наберите раствор крови в капилляр до метки К, закройте свободное верхнее отверстие капилляра указательным пальцем, укрепите узкий его конец между прокладкой и верхней перекладиной в строго вертикальном положении. Помните, что верхний конец капилляра можно открыть только тогда, когда его нижний конец придавит резинку. В рабочем журнале отметьте время, когда капилляр был поставлен в гнездо аппарата. Вследствие постепенного оседания эритроцитов верхний слой раствора, находящегося в пипетке, становится светлым. По высоте этого светлого неокрашенного столба плазмы крови через час определите на сколько миллиметров осели эритроциты (мм/ч). На основании полученных результатов сделайте вывод о физиологическом качестве исследуемой рыбы.

Вопросы для контроля

1. Факторы, определяющие скорость оседания эритроцитов.

2. Зависимость РОЭ от различных факторов и физиологического состояния организма.

3. Значение альбуминов и глобулинов для РОЭ.

6. Определение лейкоцитарной формулы.

Цель: Изучить значение определения лейкоцитарной формулы у рыб

Материал и оборудование: окрашенные мазки крови рыб, микроскоп с подвижным станком, осветители СИ – 32 или СИ – 19, счетчик для подсчета лейкоцитов клавишный, вата, марля, иммерсионное масло, стеклянная палочка.

Задание: 1. Определите лейкоцитарную формулу у рыб.

2. Сделайте выводы.

Теоретическое обоснование

Лейкоциты содержатся в крови рыб в значительно меньшем количестве, чем эритроциты. При анализе лейкоцитов обнаруживается большое разнообразие их форм. Процентное отношение разных видов лейкоцитов к их общему числу называется лейкоцитарной формулой. При некоторых физиологических, и особенно при патологических, состояниях наблюдается значительное колебание как в общем числе эритроцитов, так и в соотношении их видовых форм. Определение лейкоцитарной формулы способствует диагностике инфекционных и паразитарных заболеваний.

По форме и структуре протоплазмы лейкоциты делятся на две большие группы: гранулоциты (зернистые) - полиморфноядерные клетки и агранулоциты (незернистые) – одноядерные клетки. Морфологические различия виловых форм лейкоцитов представлены на рисунке.

К гранулоцитам относятся эозинофилы и нейтрофилы, к агранулоцитам - лимфоциты, моноциты, полиморфноядерные лейкоциты.

Эозинофилы – крупные клетки с выраженной зернистой цитоплазмой. Ядро круглое или овальное, располагается у края клетки, окрашивается в светло-фиолетовый цвет, темно-фиолетовые глыбки хроматина располагаются рыхло. Цитоплазма окрашивается в розовый цвет, а зернистость в розово-фиолетовые тона.

Нейтрофилы - круглые клетки разных размеров с нежной зернистой цитоплазмой, окрашивающейся нейтрально. Круглее или овальное ядро располагается у края клетки, имеет рыхлые глыбки хроматина и окрашивается в светло-фиолетовый цвет.

Лимфоциты - небольшие округлые клетки. Ядро круглое, плотное, занимает большую часть клетки, окрашивается в темно-фиолетовый цвет, а цитоплазма - в светло-голубой. Края цитоплазмы часто бывают неровными, нередко она охватывает не все ядро, иногда представлена несколькими выростами, либо цитоплазмы вовсе не видно и лимфоцит выглядит голоядерным.

Полиморфноядерные лейкоциты - довольно крупные клетки, имеют ядро, разделенное на несколько лопастей либо сегментов, соединенных между собой широкими или узкими мостиками. Скрашивается ядро в красновато-фиолетовый цвет. Цитоплазма гомогенная или имеет пенистое строение и окрашивается в голубовато-серый цвет.

Моноциты - самые крупные клетки крови, имеют бобовидное или овальное ядро. Цитоплазма комковая, окрашивается в синий цвет и в центре, в области ядра, имеет прогиб. Эти клетки обнаруживаются у рыб единично.