Ход работы

Перед началом подсчета форменных элементов крови про­верьте и подготовьте счетную камеру к работе. Для этого про­трите камеру и покровное стекло спирто-эфирной смесью и высу­шите. Положите покровное стекло на камеру и тщательно приж­мите его большими пальцами рук до появления ньютоновых колец, окрашенных в цвет радуги. После этих операций камера готова к работе. Для разбавления крови и окраски форменных элементов крови залейте в серологическую пробирку 4 мл антикоагулята, куда предварительно было добавлено три капли красителя - метиленовой сини. Ополосните пипетку для взятия крови антикоагу­лятом, а затем отберите в нее кровь из хвостовой вены рыбы до метки 20 мкл и осторожно выдуйте в серологическую пробирку с антикоагулятом и красителем. Содержимое тщательно перемешайте, отберите раствор крови пипеткой гемометра и нанесите каплю под покровное стекло, где располагается сетка. Камеру поместите на предметный столик микроскопа, найдите сетку при малом увели­чении, а затем установив большое увеличение, произведите под­счет эритроцитов и лейкоцитов по ранее описанной методике. Произведите расчет, результаты занесите в рабочую тетрадь, на основании которых сделайте вывод о физиологическом качестве рыбы и условиях ее обитания.

Вопросы для контроля.

1. Устройство камеры Горяева.

2. Отличительные особенности подсчета эритроцитов и лейкоцитов.

4. Определение количества гемоглобина в крови рыб.

Цель: Изучить методику определения количества гемоглобина в крови рыб. Материал и оборудование: живая рыба, гемометр Сали, пипетка для взятия крови, тонкая стеклянная палочка, пипетка для взятия дистиллированной воды , 0,1 N раствор соляной кислоты HCI, вата, марля, спирт, эфир, дистиллированная вода.

Задание: 1. Отберите кровь из хвостовой вены рыбы.

2. Зарядите гемометр и проведите определение количества гемоглобина.

3.Сделайте выводы.

Теоретическое обоснование.

Гемоглобин является дыхательным пигментом позвоночных животных, в том числе и рыб, который содержится в красных кровяных форменных элементах крови -эритроцитах, составляя до 90% сухого веса последних. Важнейшая физиологическая роль гемоглобина - перенос кислорода от органов дыхания к тканям и органам организма. Гемоглобин относится к группе сложных белков, молекула которого состоит из белковой части (глобин) и небелковой части - простетической группы (гем). В составе гемоглобина находится одна молекула глобина и 4 молекулы гема. Молекула гема содержит 1 атом железа. Гемоглобин является коллоидом, имеющим высокий молекулярный вес (64000 - 68000), благодаря чему не может проникать через оболочку эритроцитов. Содержание гемоглобина в крови зависит от видовой принадлежности рыб, возраста, пола, физиологического состояния, сезона года, условий обитания. Определение количества гемоглобина используют для оценки физиологического качества рыбы, а также для диагностики различных заболеваний.

Для определения содержания гемоглобина в крови рыб используют специальный колориметрический прибор - гемометр Сали (рис. 13). Он состоит из штатива, в котором задняя стенка сделана из матового стекла. В штатив вставлены три стеклянных пробирки на фоне матового стекла. Две крайние заняты и заполнены стандартным раствором солянокислого гематина (в 100 г раствора содержится 16,67 г гемоглобина). Средняя пробирка градуирована. На ней нанесены две шкалы. Одна шкала показывает количество гемоглобина в граммах на 100 мл крови, то есть грамм-проценты гемоглобина (г%), вторая шкала показывает единицы гемометра, или

с

Рис.13 Гемометр

одержание гемоглобина в процентах по отношению к норме, за которую принимается 16,67 г в 100 мл крови. Цифры шкалы единиц гемометра в шесть раз больше, чем цифры шкалы грамм-процентов гемоглобина. Поэтому, если имеется только шкала грамм-процентов гемоглобина, легко определить единицы гемометра, умножив соответствующее показание на 6.