Вопросы для контроля

1. Основные методы взятия крови, применяемые в гематологии.

2. Методы отбора проб крови наиболее безвредные для организма рыб.

3. Основное условие правильного отбора проб крови.

2. Видовые различия форменных элементов крови рыб.

Цель: Изучение особенностей строения эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов различных видов рыб

Материал и оборудование: Набор окрашенных препаратов крови рыб, микроскоп.

Задание: I. Рассмотреть под малым и большим увеличениями микроскопа препараты крови различных видов рыб;

2. Зарисуйте форменные элементы крови рыб;

3. Сделайте выводы.

Рис.11. Форменные элементы крови рыб:

1. эритроцит,

2. тромбоцит,

3.нейтрофил,

4. моноцит,

5. эозинофил,

6. базофил,

7. лимфоцит.

Теоретическое обоснование

Основная масса форменных элементов крови - красные кровяные тельца – эритроциты. Зрелые эритроциты представляют собой овальные клетки с продолговато-округлым ядром. Их цитоплазма красится в розово-желтый цвет, что свидетельствует о хорошем насыщении ее гемоглобином; ядро располагается в центре, окрашивается в фиолетовый цвет; глыбки хроматина лежат плотно друг к другу.

Тромбоциты - узкие, удлиненные, веретенообразные клетки с темно-фиолетовым вытянутым ядром и узким слоем светло-голубой цитоплазмы.

Из клеток белой крови у рыб обнаруживаются эозинофилы, нейтрофилы, относящиеся к гранулоцитам; лимфоциты, моноциты, полиморфноядерные лейкоциты, относящиеся к агранулоцитам. Гранулоциты имеют зернистую цитоплазму, глыбки хроматина окрашиваются в розово-фиолетовый цвет, ядра - в светло-фиолетовый. Агранулоциты имеют гомогенную или комковатую цитоплазму, окрашивающуюся в голубой или синий цвет, ядра - в фиолетовый.

Ход работы

Для работы используются окрашенные препараты крови рыб. Рассмотрите мазки крови рыб под микроскопом при малом увеличении, а затем под большим. Зарисуйте особенности строения эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов, обращая внимание на размер, форму, наличие ядра.

Сделайте вывод о различиях в форме, строении и окраске у основных групп форменных элементов крови рыб.

Вопросы для контроля

1. Отличительные особенности строения форменных элементов крови рыб.

2. Основные физиологические функции эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов.

3. Определение количества форменных элементов крови рыб.

Цель: Изучить методику определения эритроцитов в крови рыб

Материал и оборудование: живая рыба, микроскоп, счетная камера Горяева, покровное стекло, серологические пробирки -10 мл, пипетки гемометра Сали - 20 мкл, 2 пипетки - 5 мл, I пипетка - I мл, скальпель, ножницы, марля, вата, 1 % раствор метиленовой сини, антикоагулят - 5/6 раствор лимоновокислого натрия, спирт, эфир.

Задание: I. Отберите кровь из хвостовой вены рыбы.

2. Разбавьте ее антикоагулятом и зарядите счетную камеру Горяева.

3. Проведите подсчет эритроцитов и лейкоцитов.

4. Сделайте вывод.

Теоретическое обоснование

Абсолютное количество эритроцитов и лейкоцитов во всем объеме крови рыбы определить достаточно трудно. Поэтому количество форменных элементов крови определяют в 1 мм³ цельной крови. У рыб в этом объеме содержание эритроцитов и лейкоцитов зависит от многих факторов и, прежде всего, от видовой принадлежности, физиологического состояния организма, от условий обитания, сезона года, от цитологических процессов, вызванных заболеванием и других факторов. Однако, среднее количество эритроцитов и лейкоцитов у каждого вида рыб в нормальных условиях обитания удерживается на постоянном уровне за счет непрерывного распада и образования новых элементов крови. Недифференцированный подсчет форменных элементов крови у рыб осуществляется с помощью счетных камер различных типов, принцип работы с которыми одинаков. Чаще всего при подсчете количества эритроцитов у рыб используют камеру Горяева, схема устройства которой представлена на рисунке 12.

Рис.12 Камера Горяева.

Камера исчисления Горяева состоит из толстого предметного стекла, поперечно поделенного каналами на три площадки. Центральная площадка в свою очередь поделена на два отдела продольной бороздой. На шлиповерхностях этих отделов выгравированы сетки. Постоянной величиной каждой из этих сеток является малый квадрат поверхности объемом 1 / 4000 мм³. Счетная камера Горяева содержит 225 больших квадратов, 15 рядов по 15 квадратов. В большом разграфленном крест на крест квадрате содержится по 16 малых квадратов. Подсчет эритроцитов производится в пяти больших квадратах: в четырех квадратах, расположенных по углам, и в одном, расположенном в центре стекла. Иначе говоря, содержание эритроцитов считают в 80 малых квадратах. Можно вести подсчет в пяти больших квадратах, расположенных по диагонали. Считают все клетки, лежащие не только внутри самого квадрата, но и на его пограничных линиях, если большая часть клетки приходится на внутреннюю часть квадрата. Форменные элементы, пересеченные пополам, считают только на двух сторонах.

Среднее количество клеток определяют путём деления всех подсчитанных клеток на число квадратов, в которых подсчитывались форменные элементы крови. Полученная цифра соответствует, среднему количеству клеток, содержащемуся в 1/4000 мм. Умно­жив полученный результат на 4000 и на степень разведения, получают среднее содержание эритроцитов в I мм³ крови.

Для исчисления количества эритроцитов в одном мм³ крови используют формулу:

X - количество эритроцитов в I мм³,

а - сумма форменных элементов красной крови, подсчитанных в 5 больших квадратах,

б - степень разведения крови (200),

в - количество подсчитанных малых квадратов (80).

Для установления количества лейкоцитов в I мм в разных участках камеры Горяева подсчитывают три поперечных полосы больших квадратов (15 х 3 = 45) и 5 квадратов из четвертой по­лосы или по 25 квадратов в двух противоположных углах сетки. Полученное количество лейкоцитов в 50 больших квадратах, то есть в 800 маленьких, подставляют в формулу:

Х - количество лейкоцитов в I мм³,

а - количество лейкоцитов в 50 больших квадратах,

б - степень разведения крови (20),

в - количество подсчитанных малых квадратов (800).