60.Методы и единицы измерения активности ферментов плазмы крови. Лабораторная диагностика заболеваний печени. Алт и аст. Γ-Глютамилтранспептидаза. Щелочная фосфатаза. Гепатоцитолиз. Холестаз.

Принципы энзимодиагностики:

1. Состав ферментов и их тканевое деление постоянны и могут изменяться при разных патологических состояниях

2. Для каждой ткани (органа) характерен свой качественный и количественный состав белков, что обусловливает функциональные особенности каждой ткани;

3. Метаболические пути в разных тканях очень похожие, потому существует немного тканьспецифичных ферментов (например, кислая фосфатаза предстательной железы, орнитинкарбамоилтрансфераза и гистидаза печени);

4. Более специфическим для тканей является соотношение разных ферментов и изоферментов.

Принципы энзимодиагностики основаны на следующих позициях:

• при повреждении клеток в крови или других биологических жидкостях (например, в моче) увеличивается концентрация внутриклеточных ферментов повреждённых клеток;

• количество высвобождаемого фермента достаточно для его обнаружения;

• активность ферментов в биологических жидкостях, обнаруживаемых при повреждении клеток, стабильна в течение достаточно длительного времени И отличается от нормальных значений;

• ряд ферментов имеет преимущественную или абсолютную локализацию в определённых органах (органоспецифичность);

• существуют различия во внутриклеточной локализации ряда ферментов.

Единицы активности:

За международную единицу активности принимается количество фермента, способного превратить один микромоль (мкмоль) субстрата за 1 мин. в стандартных условиях. Международные единицы количества фермента отражаются символом Е (U). 1 Е (U) = 1 мкмоль/мин = 16,67 нмоль/с.

Удельная активность фермента равняется его массе (в миллиграммах), которая способна превратить 1 мкмоль субстрату за 1 мин в стандартных условиях, и выражается у мкмоль/(мин • мг) белка.

Рекомендуется также новая единица каталитической активности - катал (символ – кат.), что являет собой количество фермента, способное осуществить превращение 1 моля субстрата за 1 сек в стандартных условиях (кат = моль/с). Исходя из этого, 1 Е (1 U) = 16,67 нкат.

В пересчете на 1 л биологического материала активность фермента выражают в Е/л, (U/L), кат/л = моль/(с • л).

Лабораторная диагностика заболеваний печени:

Включает в себя следующие исследования:

Определение активности ферментов в клетках печени – энзимов (лактатдегидрогеназы, аминотрансферазы, глутаматдегидрогеназы и других), которые участвуют в различных химических реакциях.

Оценку уровня билирубина в крови. Это вещество участвует в процессах расщепления жиров в печени. Норма – 3,4 – 20,5 мкмоль/л. Рост билирубина свидетельствует о нарушении оттока и накоплении желчи.

Определение стеркобилина в кале. Осуществляется качественным тестом Шмидта и количественным — Адлера. Суточное количество стеркобилина оставляет 200-300 мг. При ОЖ в кале стеркобилин либо отсутствует, либо значительно уменьшается его количество. При гемолитической желтухе содержание его в кале увеличивается, а при паренхиматозной желтухе оно бывает в пределах нормы.

Билирубин мочи определяют с помощью реакции Гаррисона. Этот метод дает возможность определить даже незначительное количество билирубина в моче, что имеет большое значение для ранней диагностики острого гепатита. Если при желтухе моча бывает темного цвета (не содержит билирубина), то следует предположить гемолитическую желтуху. Повышение уровня уробилина в моче свидетельствует о серьезном поражении клеток печени.

Определение желчных кислот в желчи. Для этого обычно применяется тест Пентона и реакция с салициловой кислотой.

Выявление количества альбумина в крови. Уровень альбумина отражает способность печени вырабатывать белки, удерживает осмотическое давление крови. В норме его должно быть 35 – 50 г/л. Понижение его уровня говорит о наличии серьезных поражений печени.

Определение свертываемости крови. Ее нарушения отмечаются при острых и хронических заболеваниях печени.

Оценку уровня холинэстеразы, активность которой падает при поражении клеток печени.

Определение аминотрансфераз. В практике большое значение имеет определение активности аланин и аспартат трансфераз.

Выявление отклонений в углеводном (проба нагрузки галактозой) и жировом обмене (определяется холестерин, фосфолипиды, липопротеиды) печени.

Определение жирового обмена. Осуществляется определением: 1) холестерина в сыворотке крови; 2) фосфолипидов; 3) уровня липопротеидов, а также проб Бурштейна и β-липопротсинового теста Сомы. Определенный интерес представляет определение липопротеидов.

Исследование экскреторной функции печени. Об этой функции печени получают представление с помощью бромсульфалеиновой пробы. Последняя основана на внутривенном введении бромсульфалеина и учете времени его экскреции. Это имеет особенно большое значение для диагностики нежелтушных заболеваний печени.

Аланинаминотрансфераза (АЛТ) – фермент, который является катализатором для обратимых переносов аланина из аминокислоты для альфа-кетоглутарата. В результате переноса амино-группы получается глутаминовая и пировиноградная кислоты. Аланин в тканях организма человека необходим, так как является аминокислотой, способной быстро превращаться в глюкозу. Таким образом возможно получение энергии для работы головного мозга и центральной нервной системы.

Аспартатаминотрансфераза (АСТ) – фермент, который катализирует преобращение оксалоацетата в аспартат, перенося NH3 на первую молекулу. Вторым продуктом реакции является α-кетоглутарат. Реакция играет важную роль в высвобождении NH3 из аминокислот, который затем перерабатывается в цикле мочевины, так как аспартат, полученный в процессе реакции, нужен для образования аргининосукцината.

Повышение АСТ, превышающее повышение АЛТ, характерно для повреждения сердечной мышцы; если же показатель АЛТ выше, чем АСТ, то это, как правило, свидетельствует о разрушении клеток печени.

Гамма-глутамилтрансфераза (ГГТ; синоним — гамма-глютамилтранспептидаза, ГГТП) — фермент, участвующий в обмене аминокислот. Катализирует перенос гамма-глутамилового остатка с гамма-глутамилового пептида на аминокислоту или другой пептид.

Значительное повышение активности наблюдается при заболеваниях печени и внутрипеченочных желчевыводящих путей с явлениями обтурации (обструктивные поражения печени, внепечёночная обтурация жёлчных протоков, цирроз, гепатит, инфекционный мононуклеоз, состояние после пересадки почки, гипертироидизм, сахарный диабет, панкреатит, алкоголизм и алкогольная интоксикация, рак поджелудочной железы, рак предстательной железы, гепатома).

Умеренное повышение - при алкогольной интоксикации и хроническом алкоголизме, остром панкреатите, поражениях паренхимы почек, отравлениях гепатотропными ядами.

Щелочная фосфатаза — фермент гидролаза, отщепляющая фосфат (дефосфорилирование) от многих типов молекул, например, нуклеотидов, белков и алкалоидов.

Активность ЩФ сыворотки крови часто растет при обструктивных заболеваниях печени, холестазе, гепатите, явлениях гепатотоксичности, болезни Педжета, остеомаляции, новообразованиях печени и костей.

Низкая активность ЩФ отмечена при гепатолентикулярний дегенерации Коновалова-Вильсона. Применение гиполипидемичних препаратов (в частности клофибрату) также ингибирует активность ЩФ.

Холестаз – заболевание, характеризуемое уменьшением поступления желчи в двенадцатиперстную кишку по причине нарушения ее экскреции, образования или выведения. Холестаз, симптомы которого проявляются, прежде всего, в кожном зуде, темной моче и светлом кале, в зависимости от особенностей этиологии может быть внепеченочным или внутрипеченочным, в зависимости от характера течения – острым либо хроническим, с желтухой либо без нее.

Биохимическими маркерами холестаза являются щелочная фосфатаза и гамма-глутамилтранспептидаза.