16 «Микробиология» 241

видовую идентификацию, внутривидовую или штаммовую диф­ференциацию.

Для выделения чистой культуры используют селективные сре­ды с фурагином, бриллиантовым зеленым, пропонидом или этонием и пенициллином.

Видовую дифференциацию осуществляют на основании пос­тановки цитохромоксидазной пробы с использованием набора СИБ (система индикаторных бумажек). Для идентификации беспигмент­ных и слабопигментных штаммов синегнойной палочки исполь­зуют среды, усиливающие пигментообразование.

Серологическая диагностика включает методы двухмерной им-мунодиффузии (ИД), иммуноэлектрофореза (ИЭФ), РПГА, РСК, постановку опсонфагоцитарной реакции с использованием эрит­роцитов или латекса.

Лечение синегнойной инфекции проводят полимиксинами В и М, гентамицином, тобрамицином, амикацином, карбенициллином, азлоциллином и др. При необходимости применяют вак­цинотерапию химической рибосомальной вакциной или вакци­ной из белкового компонента эндотоксина.

Профилактика. Для предупреждения циркуляции синегной­ной палочки используют комплекс санитарно-противоэпидемических мероприятий, разработанных для госпитальных ин­фекций.

ХОЛЕРНЫЙ ВИБРИОН

Холера — острое карантинное (конвенционное) кишеч­ное заболевание, характеризующееся поражением тонкого кишеч­ника и нарушением водно-солевого обмена вследствие профузной ди­ареи и обильной рвоты.

Возбудитель холеры — Vibrio cholerae, относится к семейству Vibrionaceae и имеет четыре биовара: cholerae, el-tor, proteus, albensis. Патогенными для человека являются два из них: Vibrio cholerae биовар cholerae и Vibrio cholerae биовар el-tor.

Vibrio cholerae (классический возбудитель азиатской холеры) был открыт в 1883 году Р. Кохом и долгое время считался един­ственным возбудителем холеры. В 1906 году Ф. Готшлих выделил из содержимого кишечника паломников, умерших на карантин­ной станции Е1-Тor (Синайский полуостров), возбудителя холеры биовар el-tor.

Холероподобные заболевания изредка могут вызываться так называемыми НАГ-вибрионами (неагглютинирующиеся типовы­ми холерными сыворотками). НАГ-вибрионы выделяют из воды, организма морских ракообразных и других объектов. По морфо­логическим, биохимическим свойствам эти вибрионы не отлича­ются от истинно холерных.

242

Морфология и тинкториальные свойства. Холерный вибри­он представляет собой короткие, изогнутые в виде запятой па­лочки длиной 1,5—3 мкм. Биовар el-tor несколько короче и тол­ще. Под влиянием бактериофага и в старых культурах вибрион принимает спиралевидную, шаровидную и другие формы. Спор и капсул не образует, имеет полярно расположенный жгутик (монотрих), обусловливающий резко выраженную подвижность виб­риона.

Хорошо окрашивается анилиновыми красителями, грамотри-цателен.

Культуральные свойства. По типу дыхания холерный вибрион аэроб, или факультативный анаэроб, оптимальная температура роста 37°С. Хорошо растет на малопитательных средах (1 %-ная щелоч­ная пептонная вода, щелочной агар). Требователен к рН среды (от 7,6 до 9,2). На жидких средах через 6—8 часов образует по­мутнение и нежную голубоватую пленку; на агаре через 12-14 ча­сов — прозрачные колонии, опалесцирующие в проходящем свете. Селективными для холерного вибриона являются среды Аронсона, Монсура, ТСВS.

Ферментативные свойства. Холерный вибрион обладает мощ­ными ферментными системами. Разлагает до кислоты (без газа) сахарозу, мальтозу, маннит, маннозу, глюкозу, лактозу. Харак­терным является отношение к трем сахарам: разложение маннозы и сахарозы и отсутствие разложения арабинозы. Протеолитическая активность выражается в способности разжижать желатин, гидролизовать казеин, образовывать индол, восстанавливать ни­траты в нитриты. Сероводород не образует.

Антигенная структура. Возбудитель холеры имеет два антиге­на: термостабильный соматический О-антиген и термолабиль­ный жгутиковый Н-антиген. Последний является общим для всего рода Vibrio. О-антиген обладает видо- и типоспецифичностью. По О-антигену вибрионы делят на несколько серологических групп. V. cholerae биовар cholerae и биовар el-tor относят к 01 серологической группе (агглютинируются 01 агглютинирующей сывороткой), 01-антиген представлен тремя компонентами (А, В, С), различное сочетание которых определяет наличие трех сероваров холерного вибриона: Инаба, Огава, Гикошима. Эти сероло­гические варианты наблюдаются как у классического вибриона, так и у el-tor.

Факторы вирулентности. Холерный вибрион образует два типа токсинов — эндотоксин и экзотоксин. Эндотоксин имеет липо-полисахаридную природу, выделяется при разрушении вибрионов и способствует формированию антибактериального иммунитета.

Экзотоксин (холероген) оказывает энтеротоксическое дейст­вие; ему принадлежит основная роль в обезвоживании организма. Холерный вибрион продуцирует ферменты патогенности — гиа-

луронидазу, лецитиназу, фибринолизин, плазмокоагулазу, коллагеназу.

Резистентность. Холерный вибрион хорошо переносит низкие температуры и замораживание. Во льду сохраняется несколько месяцев, в морской и речной воде — несколько недель. В воде поверхностных водоемов, иле, организме некоторых гидробионтов в теплое время года возможно не только длительное сохране­ние, но и размножение вибриона. Хорошо выживает в сточных водах. Кипячение убивает его в течение одной минуты, быстро погибает под влиянием солнечного света, высушивания.

Возбудитель холеры чувствителен даже к слабым концентра­циям серной и соляной кислот, а также к дезинфицирующим сред­ствам. Вибрионы el-tor более устойчивы.

Эпидемиология. Холера — антропонозное заболевание. Ис­точником инфекции служит только человек, больной различ­ными клиническими формами холеры, и вибриононоситель. Механизм передачи фекально-оральный. Пути распространения инфекции — водный, алиментарный, контактно-бытовой. Веду­щий путь передачи — водный.

Холера относится к группе карантинных инфекций и может принимать характер эпидемий и пандемий. Человечество пере­жило шесть пандемий холеры, возбудителем которых был Vibrio cholerae (классический). С 1961 года получила распространение холера el-tor, обусловив седьмую пандемию. Особенностями хо­леры, вызванной биоваром el-tor, является возможность длитель­ного вибриононосительства и часто встречающиеся стертые фор­мы болезни.

Патогенез. Заражение холерой происходит через рот. Попав в желудок, часть холерных вибрионов гибнет в его кислой среде, высвобождая эндотоксин. Проникнув в тонкий кишечник, где щелочная среда и обилие продуктов распада белков (пептонов), вибрионы активно размножаются, выделяя экзотоксин (холероген) и так называемый фактор проницаемости, играющий опре­деленную роль в нарушении проницаемости сосудов и клеточных мембран кишечной стенки. Под действием холерогена в эпители­альных клетках тонкого кишечника активизируется фермент аденилциклаза, способствующий усилению синтеза аденозинмонофосфата, приводящего к повышенной секреции электролитов и воды из клетки в просвет кишечника. В результате этого сли­зистая оболочка тонкого кишечника начинает выделять огромное количество изотонической жидкости, которую не успевает всасы­вать толстая кишка. Это служит причиной профузного поноса. Потеря жидкости происходит также вследствие обильной рвоты, Суточный объем испражнений и рвотных масс может достигать 10л и более. Столь значительная потеря организмом жидкости и солей приводит к сгущению крови, повышению ее вязкости

244

уменьшению объема циркулирующей крови, нарастанию гемо-динамических расстройств, нарушению тканевых обменных про­цессов с развитием ацидоза и гипоксии тканей. Из-за резкого обезвоживания прекращается мочеотделение, что, в свою оче­редь, вызывает уремические явления. Неправильное лечение или отсутствие его приводит к развитию острой почечной недоста­точности и гипокалиемии. Последняя, в свою очередь, может вызвать атонию кишечника, гипотонию, аритмию, изменения в миокарде.

Клиника. Инкубационный период колеблется от нескольких часов до пяти суток (чаще двое-трое). Клиническая картина отли­чается большим разнообразием — от легчайших проявлений эн­терита до тяжелейших форм, протекающих с резким обезвожива­нием и заканчивающихся летальным исходом на 12-е сутки болезни.

Степень дегидратации определяет различные клинические фор­мы холеры: легкую, средней тяжести, тяжелую и очень тяжелую (алгидную). Для легкой формы характерна дегидратация I сте­пени: жидкий стул и рвота у больных появляются не чаще пяти раз в сутки, общая потеря жидкости не превышает 3 % массы тела. Такие больные чувствуют себя удовлетворительно, жалобы сводятся к ощущению слабости, сухости во рту, жажды.

Холера средней тяжести обусловлена дегидратацией II степе­ни (потеря жидкости составляет до 6 % массы тела): острое нача­ло с появления жидкого стула, который учащается до 15—20 раз в сутки, постепенно теряет каловый характер и приобретает вид рисового отвара. К поносу присоединяется обильная рвота. Быс­тро нарастают явления обезвоживания: кожа сухая и бледная, на ощупь холодная, тургор ее снижен. Появляются кратковремен­ные судороги икроножных и жевательных мышц, мышц кистей, стоп. Возникает цианоз губ и пальцев рук, охриплость голоса.

Тяжелая форма холеры характеризуется дегидратацией III сте­пени (потеря жидкости составляет до 9 % массы тела): развитие всех симптомов обезвоживания в первые 10-12 часов болезни. Быстро нарастает слабость, цианоз кожи, черты лица заостряются.

Дегидратация IV степени (потеря жидкости доходит до 10 % массы тела и более) соответствует наиболее тяжелой форме холе­ры (алгидная форма): кожа, собранная в складки, не расправляет­ся («руки прачки»), голос беззвучен, глазные яблоки запавшие, артериальное давление понижено, температура тела — 35—34,5 °С. Диурез резко уменьшается, прекращается понос и рвота, больной теряет сознание, развивается холерная кома.

К наиболее тяжелым формам течения относятся сухая и мол­ниеносная холера. Сухая начинается внезапно с явлений вы­раженной интоксикации, повышения температуры тела. Рвоты и поноса нет. Появляется ригидность различных групп мышц, раз-

245

вивается сосудисто-сердечная слабость. Исходы при этой форме заболевания часто летальные. Почти так же протекает молниеносная холера, при которой, кроме тяжелых общих проявлений, возникают выраженные кишечные расстройства.

У некоторых больных во время реконволесценции внезапно повышается температура, появляются головная боль, беспокойст­во, бред. Развивается чрезвычайно тяжелое осложнение — холер­ный тифоид, в патогенезе которого играют роль повышение про­ницаемости слизистой оболочки кишок и активизация нормальной микрофлоры.

Иммунитет. После перенесенного заболевания остается про­чный иммунитет.

Лабораторная диагностика. Основным методом лабораторной диагностики холеры является бактериологический. Материалом для исследования служат испражнения, рвотные массы, секционный материал, а также вода, пищевые продукты. В связи с тем, что холера — особо опасная инфекция, исследования проводятся в спе­циализированных лабораториях.

Диагностика холеры осуществляется поэтапно:

1. Из испражнений готовят мазки, окрашивают по Граму и разведенным фуксином. В мазках обнаруживают изогнутые па­лочки, расположенные в виде стаек рыб.

2. Производят посев исследуемого материала на 1 %-ную ще­лочную пептонную воду и щелочной агар для выделения чистой культуры.

3. Идентифицируют выделенную культуру по: морфологи­ческим признакам (в мазке); подвижности в препарате «висячая капля»; ферментативным свойствам на средах Гисса (отсутствие ферментации арабинозы), на мясо-пептонном желатине (воронко­образное разжижение) и нитрозоиндоловой пробе (розовое окра­шивание вследствие появления нитрозоиндола под влиянием хо­лерного вибриона); антигенным свойствам в реакции агглютинации с 01 агглютинирующей сывороткой.

4. Для дифференциации биовара V. cholerae и биовара el-tor исследуют гемолитические свойства выделенной культуры, опре­деляют ее чувствительность к полимиксину и бактериофагам. Биовар V. cholerae эритроциты барана не гемолизирует, чувствите­лен к полимиксину и бактериофагу С Мукерджи четвертого типа.

Биовар el-tor вызывает гемолиз бараньих эритроцитов, устой­чив к полимиксину, лизируется бактериофагом el-tor II.

Окончательное заключение о выделенной культуре выдают через 36—48 часов.

Для ретроспективной диагностики применяют серологический метод — реакцию агглютинации и реакцию непрямой гемагглютинации. Ускоренные методы диагностики: иммунофлюоресцентный; иммобилизация вибрионов О1 холерной сывороткой.

Лечение. Основными целями терапии при холере являются восстановление объема циркулирующей крови, электролитного состава крови, тканей и воздействие на возбудителя.

При холере средней тяжести восстановление водно-солевого баланса осуществляется пероральным введением глюкозо-солевых растворов «Регидрон», «Оралит». При тяжелых формах внутривенно вводят полиионные растворы «Дисоль», «Трисоль», «Квартасоль», «Ацесоль», «Хлосоль».

После прекращения рвоты наряду с регидратацией проводят этиотропную терапию, назначая тетрациклин или левомицетин.

Профилактика холеры включает охрану государственных гра­ниц от возможности проникновения заболевания и комплекс противоэпидемических мероприятий: выявление больных и виб-риононосителей, их изоляция, лечение, санация; надзор за водо­снабжением; борьба с загрязнением водоемов; санитарно-просве-тительская работа и пр.

Для специфической профилактики население вакцинируют по эпидпоказаниям холероген-анатоксином в сочетании с О-антигеном холерного вибриона.

ВОЗБУДИТЕЛИ ЗООНОЗНЫХ ИНФЕКЦИЙ

Возбудитель чумы

Чума — острая, природно-очаговая, особо опасная каран­тинная инфекция, характеризующаяся поражением слизистых обо­лочек, кожи, лимфатических узлов, легких и сепсисом.

Возбудитель чумы относится к семейству Enterobacteriaсeae, роду Yersinia, виду Yersinia pestis. Впервые выделен и описан А. Иерсеном и Ш. Китазато в 1894 году во время чумы в Гонконге.

Морфология. Возбудитель чумы — неподвижная, грамотри-цательная палочка овоидной формы, с характерным биполярным окрашиванием, длиной 0,7—1,5, шириной 0,3—0,5 мкм. Спор не образует, имеет нежную капсулу. Характерным признаком явля­ется полиморфизм.

Культуральные и ферментативные свойства. Факультативные анаэробы, растут на простых питательных средах при оптимуме температуры 28 ⁰С. Рост на МПБ характеризуется образованием белого рыхлого осадка и нежной пленки с нитями в виде сталак­титов. На плотных средах колонии имеют характерный вид: уп­лотненный центр окружен неровным фестончатым краем и напо­минает кружевной платочек.

Иерсинии обладают сахаролитической активностью, сбраживая ряд углеводов: глюкозу, левулезу, галактозу, арабинозу, ксилозу, маннит до кислоты, индол не образуют, желатин не разжи­жают.

Антигенная структура. Возбудитель чумы имеет 0-соматический антиген, капсульный антиген, V—W-антиген, связанный с вирулентностью бактерий.

Факторы патогенное™. Возбудители чумы образуют «мыши­ный» токсин из двух белковых фракций (А и В), продуцируют ферменты агрессии: гемолизины, фибринолизин, гиалуронидазу, плазмокоагулазу.

Резистентность. В патологическом материале, трупах возбу­дитель чумы сохраняется в течение месяца. Хорошо выдержива­ет низкие температуры, при температуре 55°С погибает в тече­ние 10—15 минут. Чувствителен к дезинфицирующим веществам:

5—10 %-ному раствору фенола, хлорной извести, 2 %-ному раст­вору хлорамина. Под действием солнечного света он гибнет в те­чение 1—2 часов.

Эпидемиология. Чума относится к природно-очаговым зоонозным инфекциям. Источниками ее являются дикие грызуны и зайцеобразные (более 200 видов), местообитание которых мо­жет быть латентным очагом инфекции.

Механизм заражения в природных очагах инфекции — транс-миссивный, пути передачи — укусы эктопаразитов грызунов (блох, клещей), при дальнейшем эпидемическом распространении чумы возможны также контактный, аэрогенный, алиментарный меха­низмы заражения. При эпидемиях человек может выступать как источник инфекции.

Патогенез. Возбудитель чумы проникает в организм челове­ка через кожу, слизистые оболочки глаз, рта, носоглотки, дыха­тельных путей, желудочно-кишечного тракта. Первоначально он размножается в регионарных лимфатических узлах, ближайших к входным воротам инфекции, вызывая лимфаденит, затем про­никает в кровь, вызывая бактериемию.

Клиника. Механизм передачи и место проникновения возбу­дителя в организм определяют патогенез и клиническую форму чумы. В зависимости от места локализации различают: кожную, бубонную, кишечную, первично-септическую, вторично-септичес­кую, первично-легочную и вторично-легочную формы.

Инкубационный период продолжается от нескольких часов до трех — шести дней. Болезнь начинается остро, без продромального периода: появляются озноб, температура повышается до 39—40°С; сильная головная боль, головокружение, тошнота, рвота — типичные признаки начала болезни. Некоторые больные заторможены, другие — возбуждены, вскакивают с постели, ста­раются убежать. Лицо у них бледное, выражает страдание, ужас (facies pestis), черты заострены, под глазами темные круги. Кожа горячая и сухая на ощупь. В тяжелых случаях интоксикации раз­виваются множественные петехии и геморрагические пораже-

ния капилляров, придающие трупу синюшно-багровый оттенок, что и дало основание называть чуму «черной» смертью.

Вследствие интоксикации в ближайшие часы поражается сер­дечно-сосудистая система. Помимо общих проявлений болезни появляются симптомы, свойственные различным ее формам, ко­торые могут быть ведущими в клинике чумы.

В случае проникновения возбудителя через кожные покровы развивается бубонная чума, при аэрогенном механизме зараже­ния — первичная легочная чума, характеризующаяся быстрой ге­нерализацией процесса, выраженной интоксикацией, высокой летальностью.

Иммунитет. После перенесения болезни вырабатывается стой­кий и длительный иммунитет.

Лабораторная диагностика. Поскольку чума относится к ка­рантинным, особо опасным инфекциям, лабораторные исследо­вания патологического материала проводят в специальных лабо­раториях, в противочумных костюмах, с соблюдением строгого режима.

В качестве материала для исследования могут быть: пунктаты из бубона, мокрота и материал из зева, кровь больного, испраж­нения, отделяемое язв и пр.

Исследования проводят в несколько этапов.

Предварительное заключение:

микроскопия мазков-отпечатков из крови, мокроты, органов трупа. Мазки фиксируются в смеси Никифорова, окрашиваются но Граму. Наличие в препаратах овоидных биполярно окрашен­ных палочек позволяет поставить предварительный диагноз чумы;

при экспресс-диагностике препараты обрабатываются специ­фической люминесцентной сывороткой — РИФ;

серологические исследования основаны на выявлении специ­фического чумного антигена и антител — РПГА, РТПГА, реакций нейтрализации Аг и Ат.

Окончательное заключение:

посев исследуемого материала на питательные среды, выделе­ние чистой культуры и ее идентификация. Для подавления сопут­ствующей микрофлоры в мясо-пептонный агар вводят раствор генцианового фиолетового;

биологическая проба воспроизводится на морских свинках. Пунктат бубонов, кровь и другой материал вводятся внутрибрюшинно, на второй-третий день животных убивают и из их органов выделяют культуру микробов чумы.

Лечение. Для этиотропного лечения чумы наиболее эффек­тивными являются антибиотики стрептомицинового ряда (стреп­томицин, дигидрострептомицин), группы тетрациклина (окситетрациклин, хлортетрациклин), аминогликозиды. Из средств патогенетической терапии показано введение дезинтоксикацион-

-)40

ных жидкостей (гемодез, растворы глюкозы и физиологический;

раствор, сухая плазма «Трисоль», «Квартасоль» и др.).

Для лечения тяжелых форм чумы используют противочумный иммуноглобулин и специфический фаг.

Профилактика. Методы профилактики чумы предусматривавют: предупреждение заболевания людей и возникновения вспышек в природных очагах; раннюю диагностику чумы; проведение в очагах тщательной дезинфекции и дератизации; предупрежде­ние заражения лиц, работающих с заразным материалом; предуп­реждение завоза чумы из-за рубежа.

Специфическую профилактику проводят по эпидпоказаниям сухой живой вакциной ЕV. Продолжительность иммунитета от шести месяцев до года.