Методична вказівка з мікробіології, вірусології та імунології

для студентів

(спеціальність «Фармація»)

Заняття №15

Тема: Діагностичні реакції антиген–антитіло. Сероло­гічна діагностика, серо­логічна ідентифікація. Реакція зв'язування компле­менту.

Модуль 1.	Морфологія і фізіологія мікроорганізмів. Інфекція. Імунітет. Загальна вірусологія.
Змістовий модуль 10.	Діагностичні імунологічні реакції.

1. Значення теми: Серологічні реакції широко використовуються в діагностиці як інфекційних процесів, так і аутоімунних захворювань. При їх проведенні використовуються діагностичні препарати антитіл і мікробних антигенів, які виробляються на біофармацевтичних підприємствах. Тому знання принципів серологічної діагностики та ідентифікації, вміння вибрати необхідні для їх проведення препарати та інші інгредієнти важливі фармацевтам.

2. Мета:

Знати принципи серологічної діагностики інфекційних захворювань та серологічної ідентифікації мікроорганізмів, типи діагностичних реакцій антиген–антитіло та їх механізми, застосування у медичній практиці препаратів антитіл і мікробних антигенів з діагностичною метою.

Вміти інтерпретувати результати серологічних реакцій, здійснювати вибір необхідних для їх проведення препаратів антитіл і мікробних антигенів.

3. Завдання для самопідготовки до заняття:

1. До даної теми повторити:

1. Сироватка і плазма крові, способи їх одержання (курс нормальної фізіології).

2. Антитіла (імуноглобуліни), їх будову і властивості (курс імунології).

3. Хімічну природу, будову і властивості антигенів (курс імунології).

4. Структуру бактеріальної клітини (курс загальної мікробіології).

5. Антигенну будову бактеріальної клітини (курс імунології).

6. Бактеріологічний метод дослідження, зміст і мету його третього етапу (курс загальної мікробіології).

7. Реакцію аглютинації, способи її проведення і застосування (курс імунології).

8. Систему комплементу: її компоненти, фізіологічні функції. Класичний і альтернативний шляхи активації комплементу (курс імунології).

2. Опрацювати тематичний матеріал по підручнику і лекції. Перевірити свої знання за допомогою контрольних питань:

Контрольні питання для самопідготовки:

1. Серологічні реакції, їх різновиди, специфічність, чутливість. Основні компоненти. Механізм взаємодії антигенів і антитіл в серологічних реакціях. Способи реєстрації серологічних реакцій, їх практичне використання для ідентифікації антигенів та діагностичного виявлення антитіл.

2. Реакції, що ґрунтуються на феномені аглютинації: пряма і непряма аглютинація, реакція гальмування непрямої гемаглютинації, реакція Кумбса – антиглобуліновий тест.

3. Реакції, що ґрунтуються на феномені преципітації: кільцепреципітація, флокуляція, преципітація в гелі.

4. Реакції імунного лізису, імобілізації і нейтралізації (токсинів, вірусів). Опсоно-фагоцитарна реакція.

5. Реакція зв’язування комплементу, її механізм. Необхідні компоненти реакції і їх підготовка. Техніка постановки РЗК. Практичне значення РЗК для серологічної діагностики інфекційних захворювань.

6. Реакції з міченими антитілами або антигенами: реакція імунофлюорес­ценції (РІФ), імуноферментний аналіз (ІФА), радіоімунний аналіз (РІА), імуноблотінг, імуноелектронна мікроскопія.

7. Серологічна ідентифікація (встановлення виду та серовару) мікроорганізмів на основі визначення його антигенів за результатами реакцій з діагностичними сироватками. Основні серологічні реакції, що використовуються для ідентифікації мікроорганізмів, критерії оцінки їх результатів.

8. Використання серологічних реакції для індикації мікробних антигенів з метою експрес-діагностики інфекційних захворювань.

9. Діагностичні імунні сироватки, класифікація, одержання, титрування. Підвищення специфічності діагностичних сироваток шляхом адсорбції антитіл за Кастеллані. Використання діагностичних сироваток для серологічної ідентифікації антигенів.

10. Серологічний метод діагностики інфекційних захворювань, його діагнос­тичні можливості і обмеження. Визначення концентрації антитіл в сироватці. Поняття про титр сироватки і діагностичний титр.

11. Принцип диференціації наявного інфекційного захворювання від перенесеного раніше на основі результатів серологічних реакцій. Критерії серологічного діагнозу: виявлення антитіл до збудника в діагностичному титрі, виявлення діагностичного наростання титру антитіл в «парних сироватках», виявлення специфічних до збудника антитіл, що належать до класу IgM.

12. Діагностичні препарати мікробних антигенів – діагностикуми. Їх одержання і використання для серологічної діагностики інфекційних захворювань.

с) Завдання для закріплення засвоєного матеріалу:

1. Зарисувати схему реакції зв’язування комплементу.

4. Завдання для самостійної роботи на занятті:

1. Виконати реакцію зв’язування комплементу.

2. Зарисувати схематично механізми реакцій прямої та непрямої імуно­флюоресценції, твердофазного імуноферментного аналізу, імуноблотінгу.

3. Ознайомитися з наборами реактивів і роботою апаратури для імунофермент­ного аналізу.

4. Ознайомитися з діагностичними препаратами антитіл і мікробних антигенів.

V. Інструкція до практичної роботи:

Для постановки реакції реакції зв’язування комплементу в пробірки вносять необхідні інгредієнти за схемою:

№ пробірки Інгредієнти	1	2	3	4	5
Сироватка хворого	0,5	-	-	-	-
Імунна сироватка	-	0,5	-	0,5	0,5
Нормальна сироватка	-	-	0,5	-	-
Антиген	0,5	0,5	0,5	-	0,5
Комплемент	0,5	0,5	0,5	0,5	-
Фізіологічний розчин	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5
Інкубація в термостаті при 37°С протягом 30 хв.
Гемолітична система	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5
Інкубація в термостаті при 37°С протягом 1 години.

Врахувати результати реакції. Зробити висновок.

5. Матеріальне забезпечення, наглядність заняття:

1. Таблиці.

2. Набір інгредієнтів для проведення реакції зв’язування комплементу.

3. Спектрофотометр.

4. Планшети і набір реактивів для імуноферментного аналізу.

5. Діагностичні препарати антитіл і мікробних антигенів.

VII. Джерела навчальної інформації.

1. Література теоретична:

1. Дикий И.Л., Холупяк И.Ю., Шевелева Н.Е., Стегний М.Ю. Микробиология: Учебник для студентов фармацевтических факультетов.- К.: Професіонал, 2007

2. Данилейченко В.В., Федечко Й.М., Корнійчук О.П. Мікробіологія з основами імунології.-К.: Медицина, 2009.

3. Крок-1. Фармація.-Київ: Медицина, 2004.

4. Конспекти лекцій.

2. Література практична:

1. Микробиология: Руководство к лабораторным занятиям. Учебное пособие / И.Л.Дикий, И.И.Сидорчук, И.Ю.Холупяк и др.-К.: Професіонал, 2004.

2. Климнюк С.І., Ситник І.О., Творко М.С., Широбоков В.П. Практична мікробіологія.-Тернопіль: Укрмедкнига, 2004.

3. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии / Под ред. Л.Б.Борисова.-Москва: Медицина, 1984.

МЕТОДИЧНУ ВКАЗІВКУ ПІДГОТУВАЛА ас. Семанів М.В.

МЕТОДИЧНА ВКАЗІВКА ЗАТВЕРДЖЕНА

НА ЗАСІДАННІ КАФЕДРИ МІКРОБІОЛОГІЇ

ПРОТОКОЛ № 8 від 04.01.2012 р.

Завідувач кафедри мікробіології

д.мед.наук Р.В.Куцик