Gosudarstvennaya_farmakopeya_RB

f= фактор разбавления.

2.2.38.УДЕЛЬНАЯ ЭЛЕКТРОПРОВОДНОСТЬ

Удельная электропроводность раствора (k) – величина обратная удельному сопротивлению (ρ). Удельное сопротивление определяют как отношение напряженности электрического поля к плотности тока. Сопротивление R (Ω) проводника, имеющего площадь сечения S (см2) и длину L (см), вычисляют по формуле:

R = ρ LS

Таким образом,

Единица удельной электропроводности в системе СИ – сименс на метр

(См·м-1). На практике удельную электропроводность растворов выражают в сименсах на сантиметр (См · см-1) или в микросименсах на сантиметр (мкСм · см-1). Единица удельного сопротивления в системе СИ – ом-метр (Ом · м). На практике обычно используют часть единицы – ом-сантиметр (Ом · см). Если нет других указаний в частной статье, значение удельной электропроводности или удельное сопротивление обозначают для температруры 20оС.

Прибор. Принцип работы используемого прибора (кондуктомера или омметра) основан на измерении удельной электропроводности столба жидкости

между электродами иммерсионного измерительного приспособления

(электропроводной камеры). Для избежания поляризации электродов используют переменный ток. Прибор снабжают температурным компенсатором или прецизионным термометром.

Измерительная камера вмещает два платиновых электрода, покрытых платиновой чернью, электроды с площадью поверхности S располагаются параллельно один к другому на расстоянии L. Обычно, оба электрода защищены стеклянной трубкой, обеспечивающей хороший ионный обмен между раствором и

электродами.

Постоянная измерительной камеры С (см-1) рассчитывается по формуле:

C = α SL ,

где:

α – безразмерный числовой коэффициент, зависящий от конструкции камеры.

Реактивы. Готовят три стандартных раствора калия хлорида Р, содержащих соответственно 0,7455 г, 0,0746 г и 0,0149 г калия хлорида Р в 1000,0 г раствора. В

качестве растворителя используют воду, свободную от диоксида углерода, Р,

приготовленную из воды дистиллированной Р, электропроводность которой не

превышает 2 мкСм · см-1.

Значения удельной электропроводности и удельного сопротивления

растворов при температуре 20оС приведены в Табл. 2.2.38.1.

Таблица 2.2.38.1.

Значения удельной электропроводности и удельного сопротивления раствора калия хлорида

Если измерения не могут быть проведены при температуре 20оС, значения

электропроводности растворов калия хлорида, указанные в Табл. 2.2.38.1,

корректируют по уравнению, действующем в температурном интервале (20+5)оС:

СТ = С20 [1 + 0,021 (Т-20)],

где:

Т – температура, при которой проводят измерения, указанная в частной статье; СТ – электропроводность раствора при ТоС;

С20 – электропроводность раствора при температуре 20оС.

ПРОВЕДЕНИЕ ИЗМЕРЕНИЙ

Определение постоянной камеры

Выбирают измерительную камеру, соответствующую электропроводности

испытуемого растора. Чем выше ожидаемая электропроводность, тем большей должны быть постоянная камеры (ниже ρ), то есть измеряемое значение R должно быть настолько высоким, насколько позволяет используемый прибор. Обычно

определения измерительной камеры имеют постоянную порядка 0,1 см-1, 1 см-1 и 10 см-1. Определяют тот из стандартных растворов калия хлорида Р, который больше подходит для проведения измерений. Измерительную камеру несколько раз промывают водой, свободной от диоксида углерода, Р, приготовленной из воды дистиллированной Р, и по крайней мере дважды раствором калия хлорида, используемого для определения постоянной камеры. Измеряют удельное сопротивление заполненной раствором калия хлорида камеры при температуре (20+0,1)оС или при температуре, указанной в частной статье. Постоянную С (см-1) измерительной камеры рассчитывают по формуле:

С = RKCl · k KCl ,

где:

RKCl – сопротивление измерений в мегоомах;

k KCl – электропроводность используемого стандартного раствора калия хлорида Р, в мкСм · см-1.

Измеренное значение постоянной С камеры не должно отличаться от указанного более, чем на 5%.

Определение удельной электропроводности испытуемого раствора

После того, как прибор откалиброван с использованием одного из стандартных растворов, измерительную камеру промывают несколько раз водой,

свободной от диоксида углерода, Р, приготовленной из воды дистиллированной Р,

и по крайней мере дважды водным испытуемым раствором при температуре (20+0,1)оС или при температуре, указанной в частной статье. Затем измерения проводят так, как указано в частной статье.

2.2.39. МОЛЕКУЛЯРНО-МАССОВОЕ РАСПРЕДЕЛЕНИЕ ДЕКСТРАНОВ

Определение проводят методом эксклюзионной хроматографии (2.2.30).

Испытуемый раствор. 0,200 г испытуемой субстанции растворяют в подвижной фазе и доводят объем раствора этим же растворителем до 10 мл.

Маркерный раствор. 5 мг глюкозы Р и 2 мг декстрана Vo ФСО растворяют в

1 мл подвижной фазы.

Градуировочные растворы. Навеску каждого из указанных стандартных образцов: 15 мг декстрана 4 для градуировки ФСО, 15 мг декстрана 10 для градуировки ФСО, 20 мг декстрана 40 дляградуировки ФСО, 20 мг декстрана 70 для градуировки ФСО и 20 мг декстрана 250 для градуировки ФСО отдельно растворяют в 1 мл подвижной фазы.

#Возможно использование стандартных образцов декстранов для

градуировки с другими паспортными данными М ω , в этом случае для градуировки хроматографической системы рекомендуется использовать дополнительно еще не менее двух стандартных образцов декстранов.

#Условия хроматографирования как, например, размер и количество колонок, тип сорбента, состав и скорость подвижной фазы, объем вводимой пробы

идругие параметры, указываются в частных статьях и могут варьировать. При этом должны выполняться требования к градуировке и условия теста «Проверка пригодности хроматографической системы»

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. 20 мг декстрана 40 для проверки пригодности хроматографической системы ФСО

(для анализа субстанции декстрана 40) или 20 мг декстрана 60/70 для проверки

пригодности хроматографической системы ФСО (для анализа субстанций декстрана 60 и декстрана 70) растворяют в 1 мл подвижной фазы.

Хроматографирование может быть проведено на хроматографе с дифференциальным рефрактометрическом детектером при следующих условиях:

-колонка, заполненная агарозой поперечно-сшитой для хроматографии Р или серий колонок размером 0,3 м х 10 мм каждая, заполненные полиэфирным гидроксилованным гелем для хроматографии Р;

-подвижная фаза: раствор 7 г натрия сульфата безводного Р и 1 г хлорбутанола Р в 1 л воды Р;

-скорость подвижной фазы от 0,5 мл/мин до 1 мл/мин, поддерживаемая

постоянно с точностью +1% в час;

-петлевой дозатор с объемом петли от 100 мкл до 200 мкл;

-температура системы поддерживается постоянной с точностью +0,1оС.

ГРАДУИРОВКА ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОЙ СИСТЕМЫ

Хроматографируют несколько раз выбранный объем маркерного раствора. На хроматограмме должны присутствовать два пика: первый пик соответствует декстрану Vо ФСО, второй пик соответствует декстрозе (глюкозе) Р. Исходя из объема элюирования декстрана Vо, рассчитывают объем эксклюзии Vо; полный объем Vt рассчитывают по пику, соответствующему глюкозе.

Хроматографируют определенный объем каждого из градуировочных растворов. Для каждой полученной хромотограммы проводят базовую линию, обращая внимание на правильнойть определения начала и конца пика. Каждую хроматограмму делят вертикальными равноудаленными линиями на р секций (количеством не менее 60), что соответствует равным объемам элюирования. Для каждой секции i, соответствующей объему элюирования Vi, измеряют высоту (yi) от базовой линии до линии хроматограммы и рассчитывают коэффициенты распределения (Кi) по формуле:

где:

Vo – объем эксклюзии, определенный по пику, соответствующему декстрану Vo ФСО на хроматограмме маркерного раствора ;

Vt - полный объем колонки, определенный по пику, соответствующему глюкозе на хроматограмме маркерного раствора;

Vi - объем элюирования для секции i, полученный для хроматограммы каждого из

градуировочных растворов.

Градуировку проводят, используя один из следующих методов.

Градуировка по градуировочному графику. По уравнению (1) для каждого из

декстранов для градуировки рассчитывают коэффициент распределения Кmax, соответствующий максимальной высоте пика хроматограммы. На полулогарифмической бумаге строят зависимость значений Кmax (ось абсцисс) от молекулярной массы для максимальной высоты пика (Мmax) каждого из декстранов для градуировки и глюкозы (ось ординат). Через все полученные точки проводят первую градуировочную линию, экстраполируя ее из точки Кmax, полученной для декстрана 250 для градуировки ФСО, до более низких значений К, полученных для тех же стандартных растворов (см. Рис. 2.2.39.-1).

Рис. 2.2.39.1. Пример градуировочного графика

Пунктиром указана часть градуировочного графика,

полученная экстраполированием. Горизонтальными

линиями в нижней части рисунка указаны ширина и

положения хроматографических линий, полученных для

каждого декстрана для градуировки

Используя полученный первый градуировочный график, находят для всех

значений Кi для всех хроматограмм соответствующие значения молекулярных масс Мi, получая в таком способе графическую зависимость для рассчета молекулярномассового распределения. Для всех декстранов для градуировки расчитывают

среде массовую молекулярную массу М ω по уравнению (3), приведенному ниже. Градуировочный график может быть использован для расчетов, если расчеты значения М ω для каждого из декстранов для градуировки не отличаются от указанных в паспорте значений больше чем на 5% и средние отклонения для всех

декстранов не превышает +3%. Если данные условия не выполняются,

градуировочный график смещают вдоль оси ординат и повторяют вышеописанные операции пока рассчитанные и указанные в паспорте значения М ω будут отличаться не более чем на 5%.

Градуировка при помощи расчетного метода. При помощи уравнений (2) и (3), приведенных ниже, и подходящего метода (возможно использование итеративного метода Гаусса-Ньютона, модифицированного метода Хартли. Также

возможно построение кривой при помощи компьютерных программ, которые

используют принцип нелинейного регрессивного анализа) рассчитывают значения коэффициентов b1, b2, b3, b4 и b5, для которых полученные значения М ω могут

отличаться не более чем на 5% от соответственных паспортных значений Мω для

каждого декстрана для калибровки и должны быть 180+2 для глюкозы.

# При расчетах М ω глюкозы в уравнении (2) допускают Кi=1.

i=1

где:

р - число секций, на которые поделена хроматограмма;

уi – высота хроматографической линии над базовой линией в i-той секции;

Мi – молекулярная масса для секции i.

ПРИГОДНОСТЬ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОЙ СИСТЕМЫ

Хроматографируют выбранный объем соответствующего раствора для проверки пригодности хроматографической системы.

Средняя молекулярная масса декстрана для проверки пригодности ФСО. Рассчитывают значение М ω , как указано в разделе «Градуировка хроматографической системы» используя или градуировочный график, или значения коэффициентов b1, b2, b3, b4 и b5. Результаты анализа считаются достоверными, если полученное значение М ω находится в пределах:

-от 41000 до 47000 (для декстрана 40 для проверки пригодности ФСО);

-от 67000 до 75000 (для декстрана 60/70 для проверки пригодности ФСО).

Средняя молекулярная масса 10% высокомолекулярной фракции декстрана. Значение М ω для 10% высокомолекулярной фракции декстрана,

которая элюируется в секциях от 1 до n включительно, рассчитывают по формуле:

i=1

где:

n – номер секции, для которой выполняются неравенства:

где:

р – количество секций, на которые разделена хроматограмма;

уi – высота хроматографической линии над базовой линией для секции i;

Мi – молекулярная масса для секции i.

Результаты анализа считаются достоверными, если полученное значение

Мω для 10% высокомолекулярной фракции декстрана находится в пределах:

-от 110000 до 130000 (для декстрана 40 для проверки пригодности ФСО);

-от 190000 до 230000 (для декстрана 60/70 для проверки пригодности ФСО).

Средняя молекулярная масса 10% низкомолекулярной фракции декстрана.

Значение М ω для 10% низкокомолекулярной фракции декстрана, которая элюируется в секциях хроматограмм от секции р до секции m включительно, рассчитывают по формуле:

i=m

где:

m – номер секции, для которой выполняются неравенства:

где:

р – количество секций, на которые разделена хроматограмма;

уi – высота хроматографической линии над базовой линией для секции i;

Мi – молекулярная масса для секции i.

Результаты анализа считаются достоверными, если полученное значение

Мω для 10% низкомолекулярной фракции декстрана находится в пределах:

-от 6000 до 8500 (для декстрана 40 для проверки пригодности ФСО);

-от 7000 до 11000 (для декстрана 60/70 для проверки пригодности ФСО).

#Параллельно с раствором проверки пригодности хроматографической системы

хроматографируют также маркерный раствор.

#Для получения более надежных результатов в частных статьях рекомендуется

регламентировать такие отношения сигнал/шум, степень разделения пиков

декстрана 40 и глюкозы, эффективность пика глюкозы и близость расчета М ω для повторных хроматограмм для проверки пригодности хроматографической системы.

МОЛЕКУЛЯРНО-МАССОВОЕ РАСПРЕДЕЛЕНИЕ АНАЛИЗИРУЕМОГО ДЕКСТРАНА

Хроматографируют выбранный объем испытуемого раствора и значение Мω

для молекулярно-массового распределения декстрана, значение М ω для 10% высокомолекулярной фракции декстрана и значение М ω для 10%

низкомолекулярной фракции декстрана, рассчитывают, как описано в разделе «Пригодность хроматографической системы».

#Параллельно с испытуемым раствором хроматографируют маркерный

раствор.

#Полученные результаты молекулярно-массового распределения округляют до 10 значащих единиц.

#В настоящей документации к декстранам для градуировки ФСО и к декстрану для проверки пригодности ФСО приводятся паспортные значения средне

массовой молекулярной массы М ω , значения молекулярной массы в максимуме

пика, а также пределы для средней молекулярной массы, средней молекулярной массы для 10% высокомолекулярной фракции декстрана и средней молекулярной массы для 10% низкомолекулярной фракции декстрана.

2.2.40. СПЕКТРОФОТОМЕТРИЯ БЛИЖНЕГО ИК-ДИАПАЗОНА

Спектрофотометрия ближнего ИК-диапазона – метод, который особенно

полезен для идентификации органических веществ. Несмотря на то, что такие спектры ограничены поглощением связей C-H, N-H, O-H и S-H, они, обычно, имеют

высокую информативность. Спектры зависят от различных параметров, таких как размер частиц, полиморфизм, остаточные растворители, влажность, которые не

всегда могут быть учтены. По этой причине прямое сравнение спектра вещества и спектра образца сравнения обычно невозможно и требуется проведение

соответствующей валидированной математической обработки полученных данных.

АППАРАТУРА

Спектрофотометры, предназначенные для получения спектров в ближнем ИК-диапазоне, состоят из:

-фильтра, дифракционной решётки или интерферометра, способных обеспечить

целый диапазон электромагнитного излучения в области приблизительно от 780 нм до 2500 нм (12821 см−1 до 4000 см−1),

-устройств сбора и измерения интенсивности прошедшего или отражённого излучения (пропускание или отражение), таких как интегрирующая сфера,

оптоволоконный датчик и т.д., соединённых с соответствующим детектором,

-устройств математической обработки полученных спектральных данных. ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦА

Для измерения пропускания. Данный способ обычно используется в случае

разбавленных или неразбавленных жидкостей, а также твёрдых веществ, находящихся в растворе.

Пробы исследуют в кювете с подходящей длиной оптического пути (обычно от 0,5 мм до 4 мм), прозрачной для излучения ближнего ИК-диапазона либо

погружают в них оптоволоконный датчик подходящей конфигурации, которая создаёт спектр в области пропускания совместимой со спецификациями прибора и

соответствующей предполагаемой цели.

При получении спектров жидкой пробы в ближнем ИК-диапазоне должны

приниматься во внимание возможность зависящих от температуры отклонений спектров или любых других эффектов, оказывающих влияние на спектры.

Во всех случаях способом, соответствующим оптической конфигурации

прибора, должны быть внесены поправки, учитывающие влияние фона, например, из спектра исследуемой пробы может быть вычтен спектр сравнения воздуха (для

жидкостей) или растворителя (для растворов).

Для измерения диффузного отражения. Данный способ обычно используется для твёрдых тел.

Пробы исследуют с помощью подходящего устройства. При помещении в пробу оптоволоконного датчика следует обращать внимание на положение датчика, необходимо, чтобы в течение получения спектра он оставался неподвижным и чтобы условия измерения были как можно более воспроизводимыми от одной

пробы к другой.

Во всех случаях способом, соответствующим оптической конфигурации прибора, должны быть внесены поправки, учитывающие влияние фона, например,

из спектра исследуемой пробы должен быть вычтен спектр внутреннего или

внешнего стандарта отражения.

Следует также учитывать размер частиц и степень гидратации или сольватации.

Для измерения двойного пропускания Данный способ обычно

используется в случае разбавленных или неразбавленных жидкостей, а также

твёрдых веществ, находящихся в растворе или суспензии.

Исследуемую пробу помещают в кювету с подходящим диффузным

отражателем, сделанным из металла либо из инертного вещества (например, оксид титана), не дающего спектра в ближнем ИК-диапазоне, и введённого в подходящей концентрации в пробу. Пробы исследуют так, как описано для измерения пропускания или диффузного отражения.

КОНТРОЛЬ ЗА РАБОТОЙ ПРИБОРА

При использовании прибора следуют инструкциям производителя; регулярно,

в зависимости от применения прибора и исследуемых веществ, проводят предписанные испытания.

Проверка шкалы длин волн (кроме прибора, оснащённого светофильтром). Используемую шкалу длины волны, обычно в области между 780 нм и 2500 нм, проверяют с помощью подходящего стандарта (стандартов) длин волн, который имеет характеристические максимумы при исследуемых длинах волн; такими стандартами могут быть, например, полистирол или оксиды редкоземельных элементов.

Проверка повторяемости (сходимости) длин волн (кроме прибора,

оснащённого светофильтром). Повторяемость длин волн проверяют с помощью

подходящего стандарта (стандартов), например, полистирола или оксидов редкоземельных элементов. Стандартное отклонение длин волн зависит от

спецификации спектрофотометра.

Проверка повторяемости отклика. Повторяемость отклика проверяют с помощью подходящего стандарта (стандартов), например, отражающих термопластических смол, покрытых сажей. Стандартное отклонение отклика зависит от спецификации прибора.

Проверка фотометрического шума. Для определения фотометрического

шума используют подходящий стандарт отражения, например, отражающие

керамические плитки или отражающие термопластические смолы. Сканируют стандарт отражения в соответствии с рекомендациями производителя

спектрофотометра и рассчитывают фотометрический шум пика к пику либо при

данной длине волны. В последнем случае фотометрический шум характеризуется стандартным отклонением откликов. Фотометрический шум зависит от спецификации прибора.

СОЗДАНИЕ СПЕКТРАЛЬНОЙ БИБЛИОТЕКИ СРАВНЕНИЯ

Снимают спектры подходящего числа серий веществ, полностью исследованных, как описано в монографии материалов, и которые имеют отличия

(например, в производителе, размерах частиц) типичные для анализируемого

материала.

Набор спектров даёт информацию, которая определяет границы подобия для

данного вещества в спектральной базе данных, которая используется для

идентификации вещества. Число веществ в базе данных зависит от особенностей её применения

Коллекция спектров в базе данных может быть представлена различными

способами, определяемыми математической методикой, используемой для идентификации. Это могут быть:

-индивидуальные спектры, представляющие вещество,

-усреднённые спектры для каждого вещества и описание их изменчивости.

Селективность базы данных, которая позволяет положительно идентифицировать данный материал либо достоверно отличить его от других материалов, содержащихся в базе данных, должна быть установлена во время процедуры. Для уверенности в пригодности базы данных эта селективность должна регулярно проверяться; в особенности это необходимо делать после любых значительных изменений, произошедших с веществом, например, изменение поставщика или производственного процесса.