Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
modul_1 (2).doc
Скачиваний:
54
Добавлен:
19.04.2015
Размер:
800.26 Кб
Скачать

Алгоритм лабораторної роботи:

  1. Експериментальне підтвердження наявності в муцині вуглеводного компонента.

  2. Проведення бензидинової реакції на визначення гемінової групи гемоглобіну.

  3. Виділення нуклеопротеїнів з дріжджів та проведення якісних реакцій на їх складові.

Методика проведення експериментів

1 Виділення муцину із слини і проведення якісної реакції на вуглеводний компонент

Принцип методу: виділення муцину (або інших глікопро-теїнів та протеогліканів) ґрунтується на властивості добре розчинятись у лугах і осаджуватись при підкисленні розчину.

Хід роботи: у пробірку збирають 2-3 мл слини і по краплях додають концентровану оцтову кислоту (10-12 крапель) до утворення осаду. Згусток муцину виймають, переносять у пробірку та проводять якісну реакцію на вуглеводний компонент. Для цього в пробірку з муцином додають 1-2 краплі 1% спиртового розчину α-нафтолу і по стінці пробірки повільно вливають піпеткою такий самий об΄єм концентрованої сірчаної кислоти. Фіолетово-червоне кільце на межі двох шарів рідини свідчить про наявність вуглеводів.

2 Якісне визначення гемінової групи гемоглобіну (бензидинова реакція)

Принцип методу: виявлення гемінової групи ґрунтується на їх здатності окиснювати бензидин за допомогою перекису водню, утворюючи сполуку синього кольору, що поступово може переходити в червоний. Ця дуже чутлива реакція використовується для виявлення навіть мінімальних кількостей крові в біологічних рідинах і широко застосовується в клінічній та судовій медицині.

Хід роботи: у пробірку вливають 5 крапель 1% розчину крові, 5 крапель 1% розчину бензидину у крижаній оцтовій кислоті, 2-3 краплі 3% розчину пероксиду водню і спостерігають за появою синього або зеленого забарвлення.

  1. Виділення та гідроліз нуклеопротеїнів

Принцип методу: нуклеопротеїни у великій кількості наявні в тканинах, багатих на ядра (селезінка, печінка, щитовидна залоза, дріжджі). В основі виділення нуклеопротеїнів лежить їх властивість утворювати в΄язкі речовини в солях середньої концентрації (2М NаСІ) і знову випадати в осад при розведенні (до 0,15М) у вигляді довгих ниток.

Хід роботи: у ступку поміщають 2-3 г селезінки і розтирають, поступово додаючи 20-30 мл 2М хлориду натрію. Утворюється в΄язкий розчин, який фільтрують через подвійний шар марлі в склянку з дистильованою водою, кількість якої в 5-6 разів перевищує кількість фільтрату, обережно намотують на паличку нитки нуклеопротеїну і переносять у пробірку. Нитки нуклеопротеїну розчиняють в 1 мл 0,4% розчину NаОН і розділяють на дві пробірки. У першій пробірці визначають наявність білка за допомогою біуретової реакції, а в другій – ДНК - реакцією з дифеніламіном.

Реакція на ДНК

До розчину нуклеопротеїну (15-20 крапель) додають такий самий об΄єм дифеніламінового реактиву. Суміш нагрівають на киплячій водяній бані протягом 15 хв і спостерігають появу синього забарвлення, яке виявляє наявність дезоксирибози.

4 Гідроліз нуклеопротеїнів дріжджів та виявлення вуглевод-ного компонента

Принцип методу: для вивчення складу нуклеопротеїнів дріжджів проводять їх кислотний гідроліз.

Хід роботи: до 2,5 г дріжджів додають 20 мл 10% розчину сірчаної кислоти. Суміш переносять у круглодонну колбу на 100 мл з повітряним холодильником. Гідроліз проводять протягом 1 год.

Студенти отримують готовий гідролізат, з яким проводять якісні реакції на вуглеводний компонент.

Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]