Добавил:
ivanov666
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Санитарная микробиология. Учебное пособие
.pdf
Для посева составляют пробы по 15 г каждая. Одна проба состоит из кусочков мышц лимфатических узлов, а вторая – из кусочков
паренхиматозных органов. Из каждой пробы готовят взвесь с содержанием в 1 см3 0,5 г продукта. Для выявления возбудителей зооантропонозов из верхней части надосадочной жидкости пастеровской
пипеткой или бактериологической петлей на поверхность мясопептонного агара в чашках Петри вносят 1–2 капли взвеси, шпателем
втирают их в поверхность среды по методу Дригальского. Можно
сделать посев кусочком пробы (путем нанесения отпечатков разными сторонами пробы на
поверхность среды).
Для выявления бактерий группы кишечных палочек проводят посев аналогичным методом на дифференциальнодиагностическую среду Эндо, Плоскирева ИЛИ Левина.
Бактерии рода протеус определяют при наличии на средах вуалеобразного налета, при микроскопии которого обнаруживают палочки,
окрашивающиеся по Граму отрицательно.
Исследование на присутствие анаэробов проводят только в том
случае, когда есть подозрение на наличие анаэробных инфекций
(эмкар, злокачественный отек и т. д.).
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РА Б О ТА СТУДЕНТОВ:
Оценить свежесть мяса по органолептическим показате-1.
лям.
Провести микроскопию мазков-отпечатков из свежего, по-2.
дозрительной свежести и несвежего мяса.
Сделать посев на питательные среды (МПА) образцов мяса 3.
путем отпечатка.
КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ:
1. Каким образом определяют свежесть мяса органолептическим путем?
2. Каким образом определяют свежесть мяса на основании микроскопии?
3. В каких случаях проводят бактериологическое исследование
мяса?
4. Каковы правила отбора проб и пересылки их в лабораторию
для исследования?
5. Какие показатели определяют при бактериологическом исследовании мяса?
141
Тема 2
Санитарно-микробиологическое исследование молока
и молочных продуктов
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: ознакомить студентов с бактериологиче-
ским исследованием молока и молочных продуктов.
МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ:
– чашки Петри с МПА (7 шт.);
– пробирки исследуемым молоком (7 шт.);
– пробирки со стерильной водой (7 шт.);
– раствор метиленового голубого;
– пробирки с резиновыми пробками (7 шт.);
– редуктазник.
Микробиологическое исследование молока проводят, когда возникает подо зрение, что оно может представлять опасность для здоровья
людей; в порядке контроля за санитарно-гигиеническим режимом
доения и первичной обработки, хранения и транспортировки; в случае подозрения на обсемененность микроорганизмами, при наличии
которых молоко нельзя перерабатывать на молочные продукты.
В большинстве случаев микробиологическое исследование
молока ограничивается определением общего количества бакте-
рий и бродильного титра. При подозрении на обсеменение моло-
ка патогенными микроорганизмами проводят специальные исследования в зависимости от вида предполагаемого возбудителя.
При отборе проб для исследования молоко тщательно перемешивают стерильным черпаком или ложкой и отбирают
50–100 мл в стерильные колбочки или флаконы, закрывают стерильной ватной пробкой, обернутой марлей, поверх ее накладывают бумагу или марлю. Молоко необходимо исследовать немедленно после взятия пробы, а если нет такой возможности, его
следует охладить до 4–6 °С (не выше). На посуду с образцами
молока для исследования наклеивают этикетки с указанием номера пробы, номера и размера партий продукта, дня и часа отбора пробы. На этикетке должна быть подпись лица, взявшего
пробу, с указанием его должности. Если пробы молока отправляют в лабораторию, находящуюся за пределами предприятия (колхоза, совхоза), их пломбируют или опечатывают.
142
Чашечный метод. Для определения общего количества в молоке микробов исследуемый материал вносят в чашку Петри и
заливают 12–15 мл пита тельной среды. При исследовании молоко необходимо предварительно развести стерильной водой.
Разведения делают с таким расчетом, чтобы последнее из них
содержало десятки клеток в 1 мл. Для посева на чашки Петри
обычно
используют три последних разведения. Засеянные чашки помещают в термостат при температуре 37 °С, выросшие колонии подсчитывают через 24 и 48 часов. Чашки с числом колоний менее 10 не учитывают. При большом количестве выросших
колоний их подсчитывают по секторам, расчерченным на дне
чашки. Дно обычно расчерчивают на четыре и более одинаковых
секторов
и колонии микробов в каждом секторе подсчитывают
отдельно. Число колоний каждой чашки умножают на степень
разведения молока. Из каждой пробы молока колонии следует
подсчитывать на трех чашках и брать средние цифры. Сумму
колоний во всех чашках делят на количество чашек и таким образом устанавливают показатель микробного обсеменения 1 мл
молока.
Редуктазная
проба. При определении степени обсеменения
молока микрофлорой ГОСТ 13264–70 предусматривает косвенный
химический метод – редуктазную пробу.
Метод основан на восстановлении метиленового голубого
окислительно-восстановительными ферментами, выделяемыми
в молоко микроорганизмами. По продолжительности обесцвечивания метиленового голубого оценивают бактериальную обсемененность сырого молока.
В пробирки наливают по 1 мл рабочего раствора метиленового голубого и
по 20 мл исследуемого молока, закрывают резиновыми пробками и смешивают путем трехкратного переворачивания пробирок.
Пробирки помещают в редуктазник с температурой воды
37 °С.
Наблюдение за изменением окраски ведут через 40 минут,
2,5 и 3,5 часа с начала проведения анализа. Окончанием анализа
считают момент обесцвечивания окраски молока.
В зависимости от продолжительности обесцвечивания молоко относят к одному из четырех классов (табл. 1).
143
Определение классности молока редуктазной пробой
Таблица 1
Класс молока
Высший
I
II
III
Продолжительность
обесцвечивания, ч
Более 3,5
3,5
2,5
40 минут
Ориентировочное количество
бактерий в 1 мл молока, КОЕ
До 300 тыс.
От 300 тыс. до 500 тыс.
От 500 тыс. до 4 млн
От 4 млн до 20 млн
Сортировка молока. В соответствии с ГОСТ 13254–70, заготавливаемое молоко должно быть цельным, свежим, полученным
от здоровых коров с соблю дением действующих ветеринарносанитарных правил. После дойки молоко должно быть охлаждено до температуры не выше 10 °С. В зависимости от физикохимических и микробиологических показателей молоко бывает
первого и второго сорта (табл. 2).
Таблица 2
Определение сортности молока по ГОСТ 13264–70
Основные показатели молока Первый сорт Второй сорт
Кислотность, градусы Тернера
Степень чистоты по эталону не ниже группы
Обсемененность микрофлорой,
определяемая редуктазной пробой
16–18
1
1
16–20
2
2
Несортовое молоко допускается к приемке с кислотностью
не выше 21 °Т, бактериальной обсемененностью не ниже третьего класса, чистотой II группы. Не принимается молоко с бактериальной обсемененностью ниже третьего класса и чистотой
ниже II группы. Не принимается молоко от коров в первые 7
дней лактации (молозиво), с добавлением нейтрализующих и
консервирующих веществ, имеющее запах химикатов и нефтепродуктов, с прогорклым затхлым привкусом и резко выраженным посторонним запахом.
Молоко, полученное от коров, больных гастроэнтеритом и маститом, подвергается десятиминутному кипячению и употребляется только для нужд хозяйства.
144
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РА Б О ТА СТУДЕНТОВ:
1. Освоить чашечный метод для определения общего количества микробов в молоке.
2. Провести постановку и оценку редуктазной пробы.
3. Определить сортность молока.
КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ:
1. Каким образом определяют общее количество микробов в
молоке?
2. Каким образом и для чего проводится постановка редуктазной пробы молока?
3. В каких случаях проводят
ние молока?
4. Каким образом определяют сортность молока?
5. Какие опасные для человека инфекционные заболевания
передаются через молоко?
микробиологическое исследова-
Тема 3
Санитарно-показательные микроорганизмы
и их роль в контроле качества дезинфекции
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: ознакомить студентов с контролем качества
дезинфекции ветеринарных объектов.
МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ:
– стерильные пробирки с физраствором и квачиками (12 шт.);
– пробирки со средой Кода (2 шт.);
– пробирка МПА и МПБ с культурой E. coli (2 шт.);
– набор бактериальных красок для метода Грама;
– спиртовки (10 шт.);
– микроскопы.
Делались попытки найти косвенные показатели загрязнения
внешней среды патогенными микроорганизмами. Для этих целей
оказалось возможным использовать микроорганизмы, постоянно
обитающие в организме человека и животных (толстом отделе кишечника и верхнем отделе дыхательных путей). Такие микроор-
145
ганизмы были названы санитарно-показательными. В основном
они являются комменсалами и только при изменении условий проявляют условно-патогенные свойства.
В качестве санитарно-показательных микроорганизмов используются следующие: бактерии группы кишечных палочек (БГКП),
Cl. perfringens, бактерии рода Proteus, кишечные бактериофаги и
некоторые другие обитатели толстого отдела кишечника; зеленящий стрептококк – Streptococcus viridans
и гемолитический стрептококк – Streptococcus haemolyticus и некоторые другие обитатели
слизистых оболочкек дыхательных путей, а также стафилококки
Staphylococcus aureus или Staphylococcus pyogenes.
E. coli наиболее часто используется в методиках, как санитарно-
показательный микроорганизм, для определения чистоты помещения или оборудования, а также для оценки качества дезинфекции.
Лабораторная диагностика (идентификация) E. coli основана на
результатах бактериологических и серологических исследований.
Бактериологическая диагностика проводится по классической
триаде Генле – Коха путем:
– изучения морфологических свойств возбудителя, путем обна-
ружения возбудителя в исходном материале при микроскопии
мазков. Основной вид возбудителя – это E. coli communis –
прямая, короткая с закругленными концами бактерия (2,0–
3,00,4 –0,7 мкм), подвижная (перитрих), есть и неподвижные
серовары, грамотрицательная, не образует спор, не образует
капсулы (за исключением сероваров О8, О9, О101);
– изучения культуральных свойств возбудителя путем посева
из органов на МПА, МПБ и культивирования посевов при
температуре 37–38 °С, рН 7,2–7,4. Возбудитель является факультативным анаэробом. При посеве на МПБ через 24 часа
наблюдается равномерное помутнение среды с образованием легкоразбивающегося осадка. На МПА – влажные, слабовыпуклые, круглые, полупрозрачные колонии с ровными
краями и гладкой поверхностью. На среде Эндо образуются
колонии диаметром 2–3 мм, малинового цвета с металлическим оттенком, а на среде Левина – круглые колонии черного
цвета;
– изучения биохимических свойств E. coli для дифференциа-
ции ее от сальмонелл. Все штаммы E. coli сбраживают лактозу, а сальмонеллы не сбраживают.
146
Серологическую идентификацию E. coli и Salmonell осуществляют путем постановки реакции агглютинации капельным методом на предметном стекле с поливалентными, а затем с моновалентными сыворотками, согласно инструкции, прилагаемой к наборам типоспецифических сывороток.
Биопроба проводится на белых мышах.
Контроль качества дезинфекции ветеринарных объектов про-
водится согласно «Правилам проведения дезинфекции и дезинвазии объектов государственного ветеринарного надзора» (Москва,
2002), утвержденным заместителем руководителя департамента
ветеринарии МСХ РФ Е. А. Непоклоновым.
1. Отбор проб для исследования.
1.1. После проведения дезинфекции и последующей экс-
позиции с участков, подвергаемых контролю, отбирают пробы стерильными ватно-марлевыми тампонами,
смоченными в стерильном нейтрализующем растворе
или воде.
Участки площадью 1010 см
тщательно протирают до
полного снятия с поверхности всех имеющихся на ней
загрязнений, после чего тампоны помещают в пробирку с нейтрализующей жидкостью.
Плотные загрязнения (корочки) снимают с помощью
стерильного скальпеля и переносят в эту же пробирку.
Для нейтрализации хлорсодержащих дезинфицирующих средств служит раствор тиосульфата натрия (гипосульфита), щелочных растворов –
раствор уксусной
кислоты; формалина – раствор аммиака (нашатырный
спирт); кислот, перекиси водорода и ее производных –
раствор бикарбоната натрия.
При использовании для дезинфекции щелочного раствора формальдегида участки сначала увлажняют раствором аммиака, затем дополнительно раствором уксусной кислоты.
При дезинфекции препаратами, для которых нет нейтрализаторов, применяют стерильную водопроводную воду.
1.2. Отпечатки
на тонкий слой плотной питательной среды
берут лица, прошедшие специальную подготовку.
147
Предметные стекла с нанесенной средой извлекают
корнцангом из ванн или пробирок, не касаясь застывшей питательной среды, и накладывают на исследуемый объект таким образом, чтобы питательная среда
соприкасалась с его поверхностью. Через 2 минуты
пробы-отпечатки отделяют от контролируемого объекта
и помещают в ванны или пробирки, в которых их транспортировали. При взятии проб с труднодоступных или
вертикальных поверхностей время контакта слоя питательной среды с объектом сокращают до 30 секунд.
1.3. Смывы должны быть доставлены в лабораторию в те-
чение 3–6 часов с момента взятия, отпечатки – не позд-
нее 2 часов.
2. Контроль качества дезинфекции помещений. Метод
бактериологического исследования смывов.
2.1. Пробы, каждую
в отдельности, отмывают в той же
пробирке путем нескольких погружений и отжатий
тампона. Последний удаляют, а жидкость центрифугируют 20–30 минут при 3000–3500 об/мин. Затем надосадочную жидкость сливают. В пробирку
наливают такое же количество стерильной воды,
содержимое смешивают и снова центрифугируют.
Надосадочную жидкость сливают, а из центрифугат
делают посевы.
При наличии
в смыве грубых механических примесей их
растирают в пробирке стеклянной палочкой, после чего
смыв переносят в цетрифужную пробирку.
2.2. Для индикации кишечной палочки 0,5 мл центрифугата высевают в пробирки с модифицированной
средой Хейфеца или КОДА. Посевы выдерживают
12–18 часов в термостате при температуре 37–38 °С.
Изменение сиренево-красного цвета сред (зеленый,
салатовый)
с помутнением их и образованием газа
свидетельствует о наличии роста кишечной палочки.
Другие изменения цвета (желтоватый, розовый, сероватый), наблюдаемые при росте микроорганизмов
других видов, не учитывают.
148
В сомнительных случаях делают подтверждающий посев с жидких сред на aгap Эндо. Посевы инкубируют
12–16 часов при температуре 37–38 °C.
2.3. Для индикации стафилококков 0,5 мл центрифугата
высевают в 5 мл мясопептонного бульона с 6,5 %
хлористого натрия. Через 24–48 часов инкубирования посевов при температуре 37–38 °С делают пересевы бактериологической петлей на 8,5 %-ный солевой мясопептонный агар
. Посевы выдерживают в
термостате 24–48 часов при температуре 37–38 °С.
Из выросших культур для подтверждения роста стафилококков готовят матки, окрашивают по Граму и
микроскопируют.
2.4. Для индикации спорообразующих аэробов смывы обрабатывают, а перед центрифугированием их прогревают 30 минут на водяной бане при 65 °С, затем центрифугируют. Из центрифугата каждой пробы делают
посевы в одну пробирку с мясопептнным бульоном
(МПБ) и на две чашки с мясопептонным агаром ( МПА).
Для контроля качества дезинфекции при сибирской
язве МПА может быть заменен дифференциальнодиагностической средой. Посевы инкубируют 24–48
часов в термостате при 37 °С.
При наличии роста на МПА подсчитывают колонии и
изучают морфологию их при малом увеличении микроскопа. В случае возникновения подозрения на выделение возбудителя сибирской язвы идентификацию
такой культуры проводят в порядке, предусмотренном
действующими методическими указаниями.
При наличии роста нa дифференциальнодиагностической среде, на крышку чашки Петри вносят 1–2 мл культуры при 20 °С в течение 1 минуты,
после чего визуально или под малым увеличением
микроскопа проводят учет теста.
Под действием паров аммиака происходит порозовение колонии микроорганизмов, обладающих фосфатазной активностью.
Bac. anhtracis фосфатазной активностью не обладают
и его колонии остаются бесцветными.
149
При отсутствии роста или характерных колоний на
плотных средах и наличии роста в МПБ делают дробные посевы из МПБ на плотную питательную среду.
2.5. При просмотре посевов учитывают общее число проб, в которых обнаруживают рост санитарнопоказательных микроорганизмов, а при споровой инфекции – и колонии непатогенных спорообразующих
аэробов рода
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РА Б О ТА СТУДЕНТОВ:
Сделать смыв физраствором с поверхности стола.1.
Сделать посев на среду Кода смыва с поверхности стола.2.
Провести окрашивание по Грамму и микроскопию мазков 3.
из агаровой культуры E. coli.
КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ:
Какие микроорганизмы являются санитарно-показа-1.
тельными?
Каковы правила отбора проб на качество дезинфекции?2.
Как изменяется среда
Каким образом проводят контроль качества дезинфекции 4.
ветеринарных объектов?
Каковы характерные морфологические и культурально-5.
биохимические свойства E. coli?
Bacillus.
Кода при наличии 3. E. coli?
Тема 4
Лабораторная диагностика возбудителей токсикозов
стафилококкового и стрептококкового происхождения
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: ознакомить студентов с навыками бакте-
риологической диагностики при токсикозах стафилококкового и
стрептококкового происхождения.
МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ:
– пробирка МПА с культурой S. aureus;
– пробирка МПА с культурой Str. pyogenes;
– набор бактериальных красок для метода Грама;
– спиртовки (10 шт.);
– микроскопы.
150
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]