Добавил:
ivanov666
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Санитарная микробиология. Учебное пособие
.pdf
В случае инфекции, вызываемой S. pneumoniae, практикуют
выделение возбудителя из исследуемого материала методом биопробы. С этой целью тканевую суспензию, разведенную стерильным физиологическим раствором в соотношении 1:2, вводят внутрибрюшинно белым мышам по 0,5 мл. В положительных случаях
мыши погибают через 1–2 суток.
Определение Escherichia coli.
Основным санитарно-показательным микрооганизмом является кишечная палочка (E. coli).
В настоящее время известно
свыше 100 видов патогенных серогрупп E. coli. Эпизоотические
вспышки колибактериоза наиболее часто вызывают патогенные
штаммы эшерихий следующих серогрупп: у телят – О8, О9,
О15, О20, О26, О35, О78, О86, О101, О115, О119, О141, реже О2,
О33, О41, О55, О103, О127, О137; у поросят – О6, О26, О33, О101,
О139, О141, О142, О149, О152, О157; у ягнят – О4, О8, О9,
О136,
О15, О20, О28, О35, О41, О78, О101, О137; у птиц – О1, О2, О8,
О15, О18, О26, О55, О78, О111, О113, О128, О141; у пушных зве-
рей – О2, О20, О86, О78, О125; у человека – О26, О55, О111.
Бактериологическая диагностика проводится путем
изучения
морфологических свойств возбудителя при обнаружения возбудителя в исходном материале при микроскопии мазков. Основной
вид возбудителя – это E. coli communis – прямая, короткая с закругленными концами бактерия (2,0–3,0×0,4–0,7 мкм), подвижная
(перитрих), есть и неподвижные серовары, грамотрицательная, не
образует спор, не образует капсулы (за исключением сероваров
О8, О9, О101).
Культуральные свойства возбудителя
изучаются при посевах из
органов на МПА, МПБ и культивировании посевов при температуре 37–38 °С, рН 7,2–7,4. Возбудитель является факультативным
анаэробом. При посеве на МПБ через 24 часа наблюдается равномерное помутнение среды с образованием легкоразбивающегося
осадка. На МПА – влажные, слабовыпуклые, круглые, полупрозрачные колонии с ровными краями и гладкой поверхностью. На
Эндо образуются колонии диаметром 2–3 мм, малинового
среде
цвета с металлическим оттенком, а на среде Левина – круглые колонии черного цвета.
Для дифференциации E. coli от сальмонелл обязательно изуча-
ются биохимические свойства возбудителей. Для этого делают по-
121
севы на углеводные среды, изучая биохимические свойства возбудителей.
E. coli биохимически активна: ферментирует глюкозу, лактозу,
маннит; не изменяет адонита и инозита; сахарозу и дульцит ферментирует непостоянно; образует индол; большинство штаммов
E. coli образуют сероводород, желатин не разжижают; мочевину не
расщепляет, дает отрицательную реакцию с Фогес – Проскауером
и положительную с метилротом, свертывает
молоко.
Биохимическая активность сальмонелл по сравнению с кишечной палочкой выражена слабее. Они не ферментируют лактозу, сахарозу, салицин, адонит, не образуют индол, большинство штаммов
сальмонелл не образуют индол, мочевину не расщепляют, дают отрицательную реакцию с Фогес – Проскауером и положительную
реакцию с метиловым красным, не свертывает молоко.
Серологическую идентификацию E. coli и Salmonell осуществляют путем постановки реакции агглютинации капельным методом на предметном стекле с поливалентными, а затем с моновалентными сыворотками, согласно инструкции, прилагаемой к
наборам типоспецифических сывороток.
Биопроба проводится на белых мышах.
Определение БГКП.
К БГКП относятся факультативно-анаэробные, грамотрицательные, оксидазоотрицательные, не образующие спор палочки, сбраживающие лактозу (глюкозу) с образованием кислоты и газа при
(37+1) °С в течение 24–48 часов, в основном являющиеся представителями родов Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella,
Serratia (т. е. учитываются цитратположительные и цитратотрицательные варианты БГКП).
Для выявления БГКП производят посев на среду обогащения,
для чего тампон (марлевую салфетку) погружают в 10–20 %-ный
желчный бульон или среду Кесслера. Через сутки инкубирования
при (37+ 1) °С делают пересев на среду Эндо.
При отсутствии на среде Эндо колоний, типичных для БГКП
(красных и темно-красных с металлическим блеском или без него,
розовых или бледно-розовых), выдают заключение об отсутствии
БГКП. При наличии на среде Эндо характерных колоний из них
готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют; выполняют пробу на оксидазу. Наличие в мазках грамотрицательных,
оксидазоотрицательных палочек предполагает присутствие БГКП.
122
Исследуемые колонии засевают на среду Гисса с лактозой или
глюкозой. Инкубируют (37+1) °С 24 часа. Первичный учет проводят через 4–6 часов. При обнаружении кислоты и газа выдают
положительный ответ. При выявлении на среде Эндо мелких бесцветных колоний, подозрительных на наличие возбудителей кишечных инфекций, колонии снимают и изучают на принадлежность к
патогенным микроорганизмам семейства Enterobacteriaceae.
Определение синегнойной палочки.
Синегнойная палочка грамотрицательная, облигатно-аэробная,
не образующая спор палочка, оксидазоположительная, образующая сине-зеленый пигмент.
Для выявления синегнойной палочки из среды Кесслера делают пересев на МПА с фурагином, термостатируют (37+1) °С в
течение 48 часов. Колонии синегнойной палочки плоские, синезеленого цвета со специфическим ароматическим цветочным запахом. На среде Эндо колонии плоские, с неровными краями, от
бледно-сиреневого до темно-сиреневого цвета.
Дифференциальным признаком синегнойной палочки является ее способность окислять глюкозу в аэробных условиях и отсутствие таковой в анаэробных. Для этого исследуемую культуру
засевают в 2 пробирки с 4 мл среды Хью – Лейфсона или полужидкой среды Гисса с глюкозой, в одну из которых вносится
0,5 мл вазелинового масла. Посевы инкубируют при (37+1) °С
до 4 суток, ежедневно учитывается результат посева. Изменение
цвета среды в пробирке без вазелинового масла свидетельствует
об окислении глюкозы.
Определение грибковой микрофлоры.
В связи с развитием микробиологической промышленности
возникла необходимость исследования воздуха с целью обнаружения грибов-продуцентов при производстве антибиотиков, ферментных препаратов, при изготовлении кормовых дрожжей и др.
Для исследования воздуха на плесневые грибы рода Candida отбор
проб производят с помощью аппарата Кротова в объеме от 100 до
1000 л на чашки со средой Чапека, суслоагаром (для обнаружения
плесневых грибов) и с метабисульфит-натрий-агаром (МБС-агар)
с добавлением антибиотиков (для обнаружения дрожжеподобных
грибов рода Candida). Чашки инкубируют в термостате при температуре 26–27 °С в течение 3–4 суток (для плесневых грибов) и
при 35–37 °С в течение 2–3 суток (для грибов-продуцентов и дрож-
123
жеподобных рода Candida). Идентификация проводится с учетом
особенностей плодоносящих гиф и характера мицелия. Считают,
что концентрация дрожжеподобных грибов в количестве 500–600
клеток в 1 м3 воздуха рабочего помещения является предельной,
превышение ее ведет к развитию аллергических реакций у рабочих. Оценка воздуха по санитарно-микробиологическим показателям в соответствии с нормативами.
Микологическое исследование грибов рода Candida проводят
по следующей схеме:
Посев материала в жидкую среду Сабуро, с инкубированием
его в термостате при температуре 25–26
о
С в течение 24–48 часов.
В процессе приготовления жидкой среды Сабуро по окончании
ее стерилизации необходимо добавлять пенициллин и стрептомицин по 250–300 ЕД на 1 мл среды для уничтожения роста посторонних бактерий.
Пересевы на плотную среду Сабуро, с обязательным выдерживанием в термостате в течение 7 суток и более.
После отбора наиболее характерных 3–4 колоний, присущих
грибам Candida, делают пересевы на плотную среду Сабуро, а затем микроскопию выросших дрожжеподобных клеток.
Окрашивание препаратов проводят раствором генцианвиолета
(для проверки чистоты роста микробных клеток, а также для обнаружения псевдомицелия и ориентировочного определения принадлежности гриба к роду Candida и изучаемому виду), по методу
Грама.
По морфологии гриб Candida albicans представляет собой
округлые клетки величиной 1,3–2,3×3,0–3,6 мкм. По Граму клетки
окрашиваются положительно.
Колонии, растущие на плотной среде Сабуро, разделяются на
2 формы: S-гладкие и R-шероховатые. Колонии типа S – преимущественно имеют округлую форму, белого цвета, гладкую блестящую поверхность, сметанообразную или тягучую консистенцию
и ровные края. Колонии типа R – складчатые с поверхности и
волнистые по краям белого, реже кремового или слегка желтоватого цвета. По краям колоний развиваются нити псевдомицелия,
врастающие в агар.
На жидкой среде Сабуро через 1–3 суток инкубирования обнаруживается помутнение среды и ватоподобный осадок белого или
серого цвета на дне пробирки.
124
Дифференциация грибов рода Саndida от истинных дрож-
жей – сахаромицетов.
Дрожжи (сахаромицеты) образуют аскоспоры на среде Городковой, не имеют псевдомицелия, вертицелл, хламидоспор, ферментируют углеводы через 12–20 часов, растут при температуре
о
25–30
С, размножаются множественным почкованием, непатоген-
ны для животных.
Дрожжеподобные грибы рода Саndida не имеют аскоспор, образуют псевдомицелий, хламидоспоры, ферментируют углеводы через
24–48 часов и в более поздние сроки, температурный оптимум у них
колеблется в пределах 20–37 оС и некоторые из них оказываются
патогенными для холоднокровных и теплокровных животных.
Ферментативную активность грибов рода Саndida определяют
путем посева чистой культуры на цветной ряд из 5 углеводов: сахароза, мальтоза, глюкоза, лактоза, галактоза. Посевы инкубируют
при 25–35 оС в течение 7–10 суток.
Таблица 9
Характер роста грибов рода Саndida на средах с углеводами
Вид грибов
рода Саndida
С. albicans
C. guilliermondii
C. tropicalis
C. pseudotropicalis
C. krusei
Примечание: К – кислотообразование;
Г – газообразование;
(К), (Г) – кислото- или газообразование непостоянно.
Глюкоза Сахароза Лактоза Мальтоза
КГ (К)– КГ
К(Г) К(Г)– –
КГ КГ – КГ
КГ – КГ КГ
КГ –– –
Тип филаментации и наличие хламидоспор выявляют соответственно на кукурузном и картофельном агаре в чашках Петри
при температуре 25–37 оС. При выращивании на кукурузном агаре
при температуре 25–37 оС они образуют хламидоспоры и по типу
филаментации относятся к Mycotorula, так как имеют правильное
расположение вертицелл и мутовок.
Гемолитическую активность выявляют при инкубации на кровяном агаре. Патогенные формы гриба вызывают отчетливый гемолиз.
125
На среде Литмана гриб растет в виде конусовидных, блестящих, темно-синих колоний, на среде Никерсона – преимущественно
агатово-черных колоний, на среде Пагано – Левина – слабо-розовых.
Проводят экспериментальное заражение белых мышей.
Наблюдение за подопытными объектами проводят в течение
3–30 суток, с последующим выделением чистой культуры возбудителя болезни.
Выявляется и наличие
сусло-агаре – колонии грибов с пушистым белым и черным налетом
(Мисor и Aspergillus) и плотные – зеленоватые или сероватые (Penicil-
lium). Актиномицеты образуют беловатые колонии, вросшие в агар.
других видов грибов на среде Чапека или
6.6. Обеззараживание воздуха в закрытых помещениях
Вопрос о нормативах бактериальной обсемененности воздушной среды животноводческих помещений и содержании санитарнопоказательных микроорганизмов в настоящее время еще окончательно не решен. Публикуемые отдельными авторами нормы являются сугубо ориентировочными и недостаточно-обоснованными.
Бактериальная обсемененность воздуха животноводческих помещений находится в большой зависимости от таких факторов,
как вид и способ
плотность размещения, эффективность работы вентиляции и канализации в помещении. Большое значение имеет комплекс мероприятий, проводимых по оздоровлению внешней среды.
Недостаточная обоснованность нормативов по бактериальной
обсемененности воздушной среды обусловлена следующими обстоятельствами:
а) отсутствием четко выраженной зависимости между общим
количеством микроорганизмов или числом санитарнопоказательных бактерий в воздухе и респираторной заболеваемостью поголовья;
б) трудностью полной индикации и объективной оценки по-
пуляции микроорганизмов в воздухе помещений с помощью
устройств, которые пока еще используются в научных исследованиях и практической работе.
При разработке санитарно-гигиенических требований и нормативов по бактериальной обсемененности воздуха животноводческих помещений
ствие того или иного возбудителя (с учетом его вирулентности), но
126
содержания животных, принятая технология и
необходимо учитывать не только прямое дей-
и, главным образом, возникновение у животных и у обслуживающего персонала иммунопатологических состояний, обусловленных гиперчувствительностью организма. Повышенная чувствительность немедленного или замедленного типа, аутоиммунные
процессы возникают в ответ на действие микрофлоры воздуха при
длительном стойловом содержании животных.
Аллергенные свойства различных бактерий неодинаковы. Более
выраженное сенсибилизирующее действие оказывают аллергены
из непатогенных
видов микробов (стафилококки, стрептококки и
др.). Это объясняется тем, что условно-патогенные и сапрофитные
микроорганизмы, находясь в верхних и нижних отделах дыхательных путей, не вызывают выраженной защитной иммунологической
реакции, но проявляют сенсибилизирующее действие (А. А. Сохин, Е. Ф. Чернушенко, 1984). Потенциальными аллергенами являются все виды грибов (Н. В. Стамахина, 1982).
Примерные показатели бактериальной обсемененности воздуха
животноводческих помещений представлены в таблице 10.
Таблица 10
Ориентировочные нормы микробной обсемененности воздуха
животноводческих помещений
№
п/п
1 Родильное отделение Не более 50
2 Профилакторий Не более 20
Коровник: беспривязного содержания
3
Помещение для молодняка
4
Свинарник: для холостых и супоросных
5
Овчарни: для баранов, маток, молодняка
6
Тип и назначение помещений
привязного содержания с содержанием
на глубокой подстилке
с содержанием на глубокой подстилке
от 20 до 60 дней
от 60 до 120 дней
от 4 до 12 месяцев
свиноматок
для подсосных свиноматок
для откорма
после отбивки
родильное отделение, тепляк
Допустимое количество
микроорганизмов, тыс/м
До 70
До 70
До 70
Не более 40
До 40
До 70
100
40–50
До 80
70
50
3
127
Систематический контроль за динамикой и численностью микроорганизмов в воздухе помещений с учетом продолжительности технологического цикла (периода стойлового содержания), а также чувствительности животных к основным представителям популяции позволит
профилактировать различные иммунопатологические состояния.
Для индикации и количественного определения микрофлоры в
воздухе животноводческих помещений предлагается использовать
разработанный нами улавливатель микроорганизмов, обеспечива
ющий высокую эффективность улавливания бактерий, вирусов и
спор микроскопических грибов (А. Ф. Дмитриев, 1982, 1983).
Чувствительность животных по отношению к антигенам биологического аэрозоля может устанавливаться с помощью аллерготеста (реакции аллергической альтерации лейкоцитов), который
отражает общую сенсибилизацию организма, обусловленную участием как клеточных, так и гуморальных факторов.
Чувствительность животных должна устанавливаться по отдельным технологическим циклам с учетом продолжительности цикла, но
не реже одного раза в два месяца, при условии, что исследуется не менее 10–15 % от общего количества технологических групп животных.
В качестве критерия предельно допустимой обсемененности воздушной среды микроорганизмами предлагается использовать систему
показателей с учетом их динамической характеристики. Основными
из них являются: чувствительность животных по отношению к микрофлоре воздуха, заболеваемость и надеж, показатели продуктивности
технологических групп, общее количество микроорганизмов, количество микроорганизмов группы кишечных палочек и гемолитических
кокков. Значительное увеличение процента особей в пределах обследуемого поголовья, проявляющих повышенную чувствительность к
антигенам биологического аэрозоля на фоне увеличения численности
микроорганизмов, указывает на их болезнетворное действие.
Научно обоснованное суждение о вредности микрофлоры, накапливающейся в воздухе животноводческих помещений, может быть сформулировано не только на основе свойств, связанных с повреждающим
действием их на иммунную систему, но и на организм в целом.
Обеззараживание воздуха в животноводческих помещениях и
создание оптимальных условий представляет собой весьма сложную задачу, главным аспектом которой является устранение источников загрязнения воздуха, подача в помещения очищенного воздуха и равномерное его распределение.
128
-
Для обеззараживания воздуха закрытых помещений могут использоваться: ультрафиолетовое излучение, бактерицидные пары
и аэрозоли дезинфицирующих веществ, фильтрование воздуха через различные материалы, интенсификация воздухообмена в помещениях и другие факторы.
Обеззараживание ультрафиолетовыми лучами. Для дезинфекции воздуха ультрафиолетовыми лучами в настоящее время применяют лампы низкого давления типа БУВ-15, БУВ-30,
БУВ-30П,
БУВ-60П и ДВ-60. Они представляют собой трубки из увиолевого
стекла, хорошо пропускающие лучи с длиной волны 254 нм. (Промышленностью выпускаются бактерицидные облучатели с одной
или двумя лампами БУВ-30 или БУВ-60П).
Обеззараживание воздуха ультрафиолетовыми лучами (излучением) может осуществляться как в присутствии животных, обслуживающего персонала, так и при отсутствии их.
При обеззараживании воздуха в присутствии животных и обслуживающего персонала используют лампу в специальной арматуре, которая направляет поток в верхнюю зону. При этом требуется, чтобы никаких лучей как непосредственно от лампы, так и отраженных от частей арматуры не направлялось под углом меньше
5о от горизонтальной плоскости, проходящей через лампу.
Через 1,5–2 часа непрерывного горения лампы в воздухе может
ощущаться запах озона, поэтому через каждые 2 часа непрерывной
работы рекомендуется на 30–60 минут выключать лампы и в это
время проветривать помещение.
Исследования эффективности использования бактерицидных
ламп для снижения бактериальной обсемененности воздуха в
птицеводческих помещениях проводились на Майкудукской птицефабрике, Карагандинской области (Г. И. Теребинов, А. Ф. Дмитриев, 1979).
Для этих целей в птичнике с клеточным содержанием птицы к потолку по всей его длине подвесили в три ряда по пять бактерицидных
облучателей типа ОБП-300 (облучатель бактерицидный потолочный).
Расстояние между рядами 4,5 м. Облучатели включали с 8 до 19 часов на протяжении 4 дней по разработанному режиму (2 часа работы,
1 час перерыва). Воздух дезинфицировался при работе только экранирующих ламп в присутствии обслуживающего персонала и птицы.
При оценке эффективности определяли концентрацию микроорганизмов в птичнике до и после ультрафиолетового облучения.
129
Пробы воздуха брали в трех точках по диагонали помещения, а
также на уровне верхнего, среднего и нижнего ярусов по вертикали помещения. Исследования проводили три раза в сутки: в 8, 12 и
16 часов. Результаты исследований приведены в таблице 11.
Таблица 11
Влияние бактерицидных ламп ОБП-300 на содержание
микроорганизмов в 1 м3 помещения
Время
и продолжительность
исследований
Сентябрь 8-00
(8 дней) 12-00
16-00
Октябрь 8-00
(9 дней) 12-00
16-00
За весь период
8-00
12-00
16-00
Итого 46156 38046 17,6
Количество микроорганизмов в 1 м3 воздуха
до облучения после облучении
44203
41528
39746
52356
50191
49299
48280
45859
44331
41191
31974
20000
45732
40000
47515
44458
35923
33757
Снижение
в %
6,9
23,1
49,7
12,7
20,4
3,7
8,0
21,7
23,9
Содержание микроорганизмов в 1 м3 воздуха (до использования
бактерицидных ламп) находилось в пределах, допустимых нормативами, и составляло 46156 микробных клеток. После облучения во
всех случаях наблюдалось снижение количества микроорганизмов.
В среднем за весь период исследования количество микроорганизмов после облучения уменьшилось на 17,6 %. Наибольшее снижение
микроорганизмов (на 23,9 %) отмечено в вечерние часы, в утренние
часы оно было менее выраженным. Видимо, это связано с тем, что
бактерицидные лампы использовались только в дневные часы.
Содержание микроорганизмов в 1 м3 воздуха в октябре было на
21–43 % больше, чем в сентябре, что объясняется похолоданием,
изменением режима эксплуатации вентиляционного оборудования, снижением кратности влажной уборки помещения.
Таким образом, результаты исследований свидетельствуют о целесообразности применения бактерицидных ламп в птицеводческих
помещениях для снижения бактериальной обсемененности воздуха.
130
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]