mikra

oНаличие присасывательного диска, окруженного фибриллами, для прикрепления к кишечному эпителию.

o Lamblia intestinalis существует в двух формах: вегетатвиная и цистная.

oЗаражение происходит при употребление загрязненных цистами продуктов, воды, через грязные руки и предметы обихода.

oЛямблии могут проникать в желчный пузырь, вызывая заболевания в желчном пузыре

– холецистит.

Tryponosoma gambiense

o Возбудитель тяжелого заболевания – сонной болезни, кровяной паразит. o Тело продолговатое, суженное у концов и сплющенное в одной плоскости. o Переносчиком трипаносомы является кровососущая муха цеце.

oВо внешней среде не устойчива, так как не имеет цикл развития со сменой хозяина и жизненных форм.

oНа ранних стадиях заболевания трипаносома живет в плазме крови (наблюдается лихорадка). На поздних стадиях проникает в спинномозговую жидкость (наблюдается нервно-психологические нарушения, сонливость).

Род Leishmania

o Вызывает кожный висцеральный лейшманиоз – внутриклеточный паразит.

oВо внешней среде не устойчива, поэтому сменяет хозяина в цикле развития. Цист не образует.

o При лейшманиозах возможен некроз тканей, анемия и лейкопения.

Sarcodina – саркодовые

Entamoeba histolytica – дизентерийная амеба.

oТри морфологические формы

a.Просветная (а) – на стадии выздоровления, и у носителей.

b.Циста (б) – в окружающей среде.

c.Эритрофаг (в) – острая форма болезни.

o Размножение бесполое. o Отсутствие пелликулы.

o Заражение происходит при употреблении инфицированных цистами продуктов и воды. o Передвигается с помощью псевдоподий или ложноножек.

Apicoplexa

Патогенные представители:

o Plasmodium – малярия.

o Наличие ротовой щели и анальной поры.

Физиология простейших

o По типу питания гетеротрофы:

Жгутиковые – поглощают питательные вещества всей поверхностью клетки.

Саркодовые – питаются фагоцитозом.

Споровики и балантидии – клеточный рот.

oКультивируют на питательных средах с добавлением нативных белков и аминокислот.

!!!Токсоплазмы культивируют на биологических моделях!!!

o По типу дыхания аэробы (дышат всей поверхностью тела).

Морфология, ультраструктура и химический состав вирусов. Принципы классификации.

Основоположником вирусологии является Павловский.

Вирусы – неклеточные биологические объекты, которые находятся на границе жизни.

Снеживой природой вирусы роднит:

1.Форма кристалла;

2.Отсутствие метаболизма вне клетки хозяина.

Сживой природой вирусов роднит:

1.Способность к самовоспроизведению;

2.Наследственность;

3.Изменчивость;

4.Тропность вирусов (сродство вирусов к определенной ткани).

Вирусы – это своеобразная форма жизни. Отличия вирусов от прокариотической формы жизни:

Вирусы мелких размеров;

Наличие одного типа нуклеиновых кислот (либо ДНК, либо РНК)

Отсутствие клеточного строения;

Не способны расти и бинарно делиться;

Вирусы внутриклеточные паразиты на генетическом уровне.

Гипотезы:

o Вирусы – потомки ранних форм жизни. 5 вариантов ДНК и 7 вариантов РНК

o Вирусы – результат регрессии клетки. o Вирусы – это клеточные гены, …

Принципы классификации

Царство vira;

Тип нуклеиновой кислоты:

1.Дезоксирибовирусы (ДНК-содержащие) – 7 семейств;

2.Рибовирусы (РНК-содержащие) – 13 семейств;

Наличие суперкапсидной оболочки;

Морфология вириона и тип нуклеиновой кислоты и тип симметрии;

Особенности репликации (жизненный ЦИК вируса);

Антигенные свойства;

Способы передачи возбудителей;

Круг восприимчивых хозяев;

Патогенность вируса.

Категории:

Царство – подцарство – семейство – род – вид (если есть таковой) – тип

Морфология вирусов

Вирусы существуют в двух морфологических формах:

1.Внеклеточная форма – вирион;

2.Внутриклеточная – вирус

Форма вириона:

1.Палочковидная, пулевидная (вирус бешенства);

2.Шаровидные – сферическая форма (вирус гриппа, кори, ВИЧ);

3.Кубоидальные – форма икосаэдра (аденовирусы, вирус полиомиелита, гепатитов А и Е);

4.Сперматозоидная форма – бактериофаги.

Структура:

I.Простоустроенные, или безоболочечные, или голые. Нуклеиновая кислота (ДНК или РНК)

– геном, который покрыт белковой оболочкой или капсид.

Размеры вириона от 20-25 нм.

Функции белковой оболочки:

1.Защитная;

2.Скелетная – прочность, жесткость конструкции;

3.Адгезивная – избирательно взаимодействует с клеткой;

4.Антигенная функция;

5.Иммуногенная.

Типы симметрии:

1.Спиральный тип симметрии. Капсомер – это одна белковая молекула. Капсомеры уложены по спирали при данном типе симметрии, в результате чего формируется канал, в котором находится нуклеиновая кислота. Характеристика спирального типа симметрии (1. Происходит максимальное взаимодействие между нуклеиновой кислотой и белком; 2. Капсомеры идентичны; 3. Требуется большое количество белков для формирования вириона; 4. Высвобождение нуклеиновой кислоты невозможно без разрушения вириона).

2.Кубический тип симметрии (аденовирусы). Экономичная модель. Капсомеры уложены в виде икосаэдра (20-гранника). Характеристика:

a)Наблюдается слабое взаимодействия между нуклеиновой кислотой и белком;

b)Капсомеры образованы разными белками;

c)Требуется небольшое количество белка для построения вириона;

d)Высвобождение нуклеиновой кислоты возможно без разрушения капсидной оболочки.

3.Смешанный тип симметрии.

II. Сложноустроенные вирионы (оболочечные или одетые).

Они содержат нуклеиновую кислоту или геном, геном сверху покрыт капсидной оболочкой. Геном + капсид = нуклеокапсид, а он определяет тип симметрии. Капсид покрывает суперкапсидная оболочка – биологическая мембрана клеточного происхождения. Функции белков с суперкапсидной оболочкой:

1)Защитная;

2)Обеспечивают слияние вириона с мембраной клетки;

3)Обеспечивают распространение вириона в организме.

Химический состав вирионов

Вирусная ДНК только у ДНК содержащих. Молекулярная масса в 1000 раз меньше ДНК прокариота. Геном ДНК-содержащих вирусов:

1-нитчатая линейная ДНК (парвовирусы);

2-нитчатая линейная (вирус герпеса);

2-нитчатая кольцевая (папилломавирус);

2-нитчатая кольцевая с дефектом одной цепи (гепатит В).

Вирусная РНК только у РНК-содержащих. По химической структуре аналогичная РНК клетки. По выполняемой функции РНК вирусов подразделяется:

1-нитчатая линейна «+» РНК (полиовирус) – она выполняет функцию информационной РНК;

1-нитчатая линейная «-» РНК (парагрипп) – матрица несущая информацию о биосинтезе белка;

1-нитчатая линейная фрагментированная РНК «-» (грипп);

2-нитчатая линейная фрагментированная (ротавирус).

Ферменты вирусов

1 группа: ферменты репликации и транскрипции (ДНК- и РНК-полимеразы);

У вирусов с +РНК пикорна-, тогавирусы., гепатит А, Е и др., функцию иРНК выполняет сам геном. Все компоненты синтезируются только в цитоплазме. РНК вируса - +РНК – белок вируса.

У вирусов с –РНК орто-, парамиксо-, рабдовирусы и др. В цитоплазме пораженной клетки. РНК вируса – РНК – иРНК – белок вируса.

РНК-содержащие ретровирусы (ВИЧ) имеют обратную транскриптазу или ревертазу. В ядре пораженной клетки с РНК синтезируется ДНК вируса. РНК вируса – РНК – ДНК – иРНК – белок вируса

Ферменты, осуществляющие синтез вирусных нуклеиновых кислот:

ДНК-зависимая – ДНК-полимераза;

ДНК-зависимая – РНК-полимераза;

РНК-зависимая – РНК-полимераза;

РНК-зависимая – ДНК-полимераза (обратная транскриптаза).

5.Сборка вирионов

Может происходить в цитоплазме или на внутренней поверхности клеточной мембраны.

Осуществляется по принципу самосборки на основе белок-белкового и белокнуклеинового узнавания.

6.Выход из клетки.

Просто устроенные вирионы выходят из клетки путем взрыва;

Сложно устроенные выходят методом почкования.

2.Стадия интеграции

Увирусов герпеса, гепатита В, ВИЧ в цикле репродукции имеется стадия интеграции (встраивания) вирусного генома в геном клетки хозяина.

Интегрированная в клеточный геном вирусная ДНК называется провирусом.

Культивирование вирусов

!Вирусы не растут на питательных средах!. Для культивирования вирусов используются биологические модели:

1.Культура клеток;

Неперевиваемые культуры;

Полуперевиваемые культуры;

Перевиваемые клетки;

2.Куринные эмбрион;

3.Лабораторное животное.

ВИРУСНАЯ ПЕРСИСТЕНЦИЯ - сохранение вируса в функционально активном состоянии в клетках организма или культур ткани за пределами тех сроков, которые характерны для острой инфекции. Соответственно, инфекции, обусловленные феноменом вирусной персистенции,

называют персистентными вирусными инфекциями. Как правило, они протекают при менее выраженных по сравнению с острой инфекцией клинических проявлениях, либо вовсе без них.

Выделяют три группы персистентных вирусных инфекций:

1.хронические,

2.латентные и

3.медленные.

Хронические инфекции отличаются от двух других тем, что присутствие вируса определяется относительно просто с помощью лабораторных методов; к их числу относятся, например, хронические формы вирусного гепатита В. При латентных инфекциях, типичных, в частности, для герпесвирусов, возбудитель маскирован в тканях, и его выявление возможно при обострениях. При медленных инфекциях, представителем которых может считаться болезнь КрейцфельдаЯкоба, вирусная персистенция приходится на чрезвычайно длительный (несколько лет) инкубационный период, предшествующий медленно развивающемуся заболеванию.

16. Принципы и методы лабораторной диагностики вирусных инфекций. Методы культивирования вирусов.

Для лабораторной диагностики вирусных инфекций используются различные методы.

Вирусологическое исследование (световая микроскопия) позволяет обнаружить характерные вирусные включения, а электронная микроскопия - сами вирионы, и по особенностям их строения диагностировать соответствующую инфекцию (например, ротавирусную).

Для выделения вирусов используют заражение лабораторных животных, куриных эмбрионов или культуры тканей.

Первичную идентификацию выделенного вируса до уровня семейства можно провести с помощью:

•определения типа нуклеиновой кислоты (проба с бромдезоксиуридоном),

•особенностей ее строения (электронная микроскопия),

•размером вириона (фильтрование через мембранные фильтры с порами диаметром 50 и 100

нм),

•наличия суперкапсидной оболочки (проба с эфиром),

•гемагглютининов (реакция гемагглютинации),

•типа симметрии нуклеокапсида (электронная микроскопия).

Существенное значение для идентификации вирусов (до рода, вида, внутри вида) имеет также изучение их антигенного строения, которое проводится в реакции вирусонейтрализации с соответствующими иммунными сыворотками. Сущность этой реакции состоит в том, что после обработки гомологичными антителами вирус утрачивает свою биологическую активность (нейтрализуется) и клетка хозяина развивается так же, как и неинфицированная вирусом. Об этом судят по отсутствию цитопатического действия, цветной пробе, результатам реакции торможения гемагглютинации (РТГА), отсутствию изменений при заражении куриных эмбрионов, выживаемости чувствительных животных.

Методы иммунодиагностики (серодиагностики и иммуноиндикации). Они реализуются в самых разнообразных реакциях иммунитета:

•радиоизотопный иммунный анализ (РИА),

•иммуноферментный анализ (ИФА),

•реакция иммунофлюоресценции (РИФ),

•реакция связывания комплемента (РСК),

•реакция пассивной гемагглютинации (РПГА),

•реакции торможения гемагглютинации (РТГА) и другие.

При использовании методов серодиагностики обязательным является исследование парных сывороток. При этом четырехкратное нарастание титра антител во второй сыворотке в большинстве случаев служит показателем протекающей или свежеперенесенной инфекции. При исследовании одной сыворотки, взятой в острой стадии болезни, диагностическое значение имеет обнаружение антител класса Ig М, свидетельствующее об острой инфекции.

Молекулярно-генетических методов (ДНК-зондирование, полимеразной цепной реакции - ПЦР). В первую очередь с их помощью выявляют персистирующие вирусы, находящиеся в клиническом материале, с трудом обнаруживаемые или не обнаруживаемые другими методами.

Культивирование вирусов

!Вирусы не растут на питательных средах!. Для культивирования вирусов используются биологические модели.

Для культивирования вирусов используют:

1) Куриные эмбрионы. Куриный эмбрион - удобная модель для культивирования вирусов с целью получения вирусов и для приготовления диагностических, профилактических и лечебных препаратов - диагностикумов и вакцин. Куриные зародыши используют в возрасте от 8 до 12 дней, перед заражением инфекционным материалом скорлупу яйца над воздушной камерой обрабатывают 70% спиртом, обжигают, смазывают йодом (2% настойка), вторично протирают спиртом и обжигают. Вируссодержащий материал, обработанный для удаления бактериальной флоры, в асептичных условиях наносят на хорион-аллантоисную оболочку или вводят в

желточный мешок, аллантоисную полость, либо в амнион (ткань эмбриона). После заражения в аллантоисную полость отверстие заливают парафином; если материалом заражают хорионаллантоис, отверстие в скорлупе закрывают стерильным покровным стеклом, края которого замазывают парафином. После инфицирования эмбрионы помещают в термостат при 37°С.

Признаки репродукции вируса проявляются особенно четко в месте заражения на хорионаллантоисной оболочке в виде очагов поражения и геморрагии.

2) Культуру клеток (тканей). Клетки получают из тканей животных и человека. Их делят:

-на первичные, которые используют в течение одной генерации. Первичные клетки получают из эпителиальной или соединительной ткани. Они растут в суспензии, при оседании прочно прикрепляются к стенке флакона или пробирки в виде монослоя.

-полуперевиваемые сохраняются в течение 50 пассажей или года. Они относятся к соматическим диплоидным клеткам человека, которые не претерпевают злокачественного перерождения.

-перевиваемые, которые длительное время размножаться in vitro. Однослойные культуры клеток готовят из нормальных, чаще эмбриональных линий клеток (клетки амниона человека, почек обезьяны) и злокачественных линий клеток (злокачественные клетки HeLa, первоначально

выделенные из карценомы шейки матки, Hep - 3 из лимфоидной карценомы).

Репродукция вирусов в культуре клеток сопровождается цитопатическим действием (ЦПД); которое проявляется в изменении морфологии клеток и их гибели. Характер и время проявления ЦПД зависит от вида вируса

3)Лабораторных животных (белых мышей, хомяков, крыс, кроликов и т.д.). Их используют для создания моделей вирусных инфекционных болезней и выделение вирусов. Чувствительность животных к вирусам зависит от вида животного и его возраста. Репродукция вируса сопровождается клиническими проявлениями болезни или гибелью животного

17. Вирусы бактерий – фаги. Взаимодействие фага с бактериальной клеткой. Умеренные и вирулентные бактериофаги. Профаг. Лизогения. Фаговая конверсия. Применение фагов в биотехнологии, микробиологии и медицине.

Бактериофаги («пожиратель»)

Это вирусы прокариот. Открыты в 1917 году французским ученым

Морфология:

1)ДНК-содержащие, нитевидные фаги;

2)РНК-содержащие фаги с головкой и рудиментом хвоста;

3)ДНК-содержащие с головкой и коротким хвостом;

4)Фаги с двунитевой ДНК и несокращающимся хвостом;

5)ДНК-содержащие имеют головку, сокращающийся хвост, заканчивающийся базальной мембраной или пластинкой.

Структура Т-бактериофага.

Имеет форму сперматозоида. Внутри головки находится двунитевая ДНК. Головка кубического типа симметрии. От головки отходит воротничок. К воротничку примыкает хвостовой отдел, он спирального типа симметрии, покрытый сократительным чехлом, заканчивающийся базальной пластинкой. От базальной пластинки отходят белковые нити – фибриллы.

Взаимодействие бактериофага с бактериями

1)Зрелый фаг или вирион, существует вне клетки и способен адсорбироваться на клетке.

2)Продуктивная инфекция. Вегетативный или вирулентный бактериофаг, способен размножаться в бактерии и приводит к лизису клетки.

3)Интегрированная инфекция. Умеренный фаг или профаг, вступает в своеобразный симбиоз.

Стадии взаимодействия фагов с бактериальной клеткой.

1)Адсорбция; (. Как все вирусы, фаги неподвижны, и столкновение с бактерией происходит случайно, затем адсорбция становится прочной, если у клетки имеются на поверхности фагоспецифические рецепторы. Фаги, имеющие сократительный чехол, адсорбируются с помощью хвостового отростка.)

2)Проникновение фага; (Под действием фермента лизоцима, который находится в хвостовом сегменте, в клеточной стенке бактерии образуется отверстие. Через это отверстие в результате сокращения хвостового чехла внутрь бактериальной клетки переходит ДНК фага. Белковый капсид остается снаружи.)

3)Репликация фаговой нуклеиновой кислоты; (Синтез ДНК и белка бактериофага. В клетке прекращается синтез бактериальных белков. Образуются фаговые ДНК, а на рибосомах бактерий синтезируются молекулы фагового белка.