Методы исследования в медицинской бактериологии

31

Рисунок 22 – Бактериологические шпатели. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Подготовленные принадлежности стерилизуют в специальных цилиндрических решетчатых корзинах или в биксах (рисунок 23).

а б Рисунок 23 – Биксы без бактериального фильтра (а) и с бактериальным фильтром

(б). Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Стерилизацию подготовленных материалов проводят, как правило, в паровых стерилизаторах (автоклавах) с вертикальной или горизонтальной загрузкой (рисунок 24).

Рисунок 24 – Различные марки паровых стерилизаторов. Заимствовано из Интернетресурсов.

32

Косновному оборудованию бактериологических лабораторий относятся также штативы, колбы, световые и люминесцентные микроскопы, термостаты и др.

Всовременных бактериологических лабораториях широкое распространение получают автоматизированные системы, например, система WASP (автоматизированная система посева клинических образцов, Copan, Италия), система BD Phoenix 50 (автоматизированная система идентификации микроорганизмов и определения антибиотикочувствительности, Becton Dickinson, США); система ADAGIO (анализатор антибиотикограмм ДДМ, Bio-Rad, США); система MALDI Biotyper (система быстрой идентификации микроорганизмов, Bruker Daltonik, Германия); система Anoxomat (система для создания специальной атмосферы, Advanced Instruments Inc., США).

Квспомогательному оборудованию относятся боксы микробиологической безопасности, холодильники, морозильники, микробиологические инкубаторы,

сухожаровые шкафы, СО2-инкубаторы, весы, рН-метры, шейкеры, центрифуги, системы очистки воды и др.

2.4. Приемы асептической работы с микроорганизмами

При работе в микробиологической лаборатории необходимо соблюдать правила асептики, препятствующие с одной стороны загрязнению чистой культуры бактерий посторонними микроорганизмами и с другой стороны - распространению микробов во внешней среде.

Асептическое извлечение микробной культуры бактериологической петлей из пробирки производится следующим образом (рисунок 25):

-поставить в штатив пробирку с исследуемой культурой и бактериологическую петлю ручкой вниз;

-зажечь горелку;

-взять левой рукой пробирку как карандаш пробкой вверх, правой рукой - бактериологическую петлю за ручку кольцом вниз;

-профламбировать петлю, прокалив ее до красного каления, и держатель петли в пламени горелки;

-над пламенем горелки извлечь из пробирки пробку, прижав ее к ладони правой руки;

-над пламенем ввести петлю в пробирку, прикоснуться ею к стенке пробирки для охлаждения, погрузить петлю в культуру или прикоснуться к газону культуры на поверхности среды;

-извлечь петлю с культурой, профламбировать край пробирки и пробку, вставить пробку в пробирку, поставить пробирку в штатив;

-каплю культуры с петли использовать по назначению;

-профламбировать бактериологическую петлю и поставить ее в штатив ручкой вниз.

34

-взять пробирку с культурой левой рукой как карандаш, извлечь над пламенем спиртовки пробку, прижав ее мизинцем к ладони правой руки;

-опустить пипетку в наклоненную пробирку, погрузить его в жидкую культуру; после заполнения культурой части пипетки, плотно закрыть ее толстый конец указательным пальцем правой руки, извлечь пипетку с культурой;

-профламбировать край пробирки и пробку, закрыть пробирку пробкой, поставить пробирку в штатив;

-вылить культуру из пипетки по назначению (на стекло, в среду);

-поместить пипетку в дезраствор.

Рисунок 26 – Асептическое извлечение жидкой культуры пипеткой Пастера. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Наполнение пипетки Пастера жидкой культурой осуществляется за счет капиллярных сил, а слив - под действием силы тяжести. Для наполнения пипеток больших объемов (мерных пипеток, пипеток Мора) необходимо создавать разрежение, а для слива - давление. Это достигается специальными приспособлениями (резиновыми баллончиками, дозаторами и пр.). В современных лабораториях широкое распространение получают автоматические пипетки со стерильными съемными наконечниками.

Пересев культуры микробов из пробирки в пробирку (рисунок 27)

производится в следующей последовательности:

-поместить в штатив бактериологическую петлю, пробирки с культурой и со средой, подписать их;

-зажечь горелку;

-взять пробирки как карандаш в левую руку и разъединить их на 1-1,5 см средним пальцем;

-профламбировать бактериологическую петлю; затем края пробирок; извлечь пробки из пробирок правой рукой, зажав одну пробку между ладонью и мизинцем, вторую - между мизинцем и безымянным пальцами;

-ввести бактериологическую петлю в пробирку с культурой, прикоснуться петлей к стенке для охлаждения;

-погрузить петлю в культуру, извлечь каплю и перенести ее в питательную

среду;

35

-извлечь петлю;

-профламбировать края пробирок и пробки и закрыть ими пробирки;

-профламбировать петлю и поставить ее в штатив.

Рисунок 27 – Пересев культуры микробов из пробирки в пробирку. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Пересев культуры микробов из пробирки в чашку Петри (рисунок 28)

производится в следующей последовательности:

-поместить пробирку с культурой и бактериологическую петлю в штатив, а чашку – перед горелкой;

-зажечь горелку;

-взять левой рукой пробирку с культурой как карандаш;

-профламбировать петлю;

-профламбировать край пробирки, правой рукой извлечь пробку, прижав ее мизинцем к ладони правой руки;

-опустить бактериологическую петлю в пробирку, прикоснуться к стенке, извлечь каплю культуры;

-профламбировать край пробирки и пробку, закрыть пробирку пробкой и поставить ее в штатив;

-приподнять большим и средним пальцами левой руки крышку чашки Петри, прикоснуться петлей к среде у края под левой ладонью, провести параллельные штрихи от края до края (на расстоянии 3 мм) вплоть до края правой руки, извлечь петлю, накрыть чашку крышкой;

-профламбировать петлю, поместить ее в штатив;

-поместить чашку Петри в термостат вниз крышкой.

36

Рисунок 28 – Посев на плотную питательную среду в чашку Петри. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Пересев микробной культуры в питательную среду с помощью пипетки

проводится следующим образом:

-поместить в штатив пробирки с культурой и питательной средой;

-зажечь горелку;

-извлечь пипетку из пенала (обертки) правой рукой, взяв ее как карандаш;

-взять левой рукой пробирки, как карандаш, разъединив их средним пальцем и извлечь над пламенем горелки пробки;

-опустить пипетку в микробную культуру;

-после накопления пипетки требуемым объемом культуры, закрыть ее тупой конец указательным пальцем;

-извлечь пипетку с культурой из пробирки и перенести ее в пробирку с питательной средой;

-погрузить конец пипетки в среду, отпустить палец и вылить культуру;

-профламбировать края пробирок и закрыть их пробками;

-пипетку поместить в дезраствор, пробирки поставить в штатив.

Посев культуры микроба на поверхность плотной питательной среды шпателем Дригальского (рисунок 29):

-поместить в штатив стерильную мерную пипетку, развернув бумагу с тупого конца, стерильный шпатель Дригальского, перед спиртовкой - чашку Петри с питательной средой;

-взять левой рукой пробирку с культурой, правой рукой - стерильную пипетку с резиновой грушей;

-извлечь пробку из пробирки, прижав ее мизинцем к ладони, профламбировать край пробирки и пробку;

-профламбировать пипетку, опустить ее в пробирку, набрать культуру, извлечь пипетку;

-профламбировать край пробирки и пробку, закрыть пробирку пробкой, поставить ее в штатив;

-приоткрыть крышку чашки Петри, вылить на среду определенный объем культуры, закрыть чашку крышкой;

-пипетку погрузить в дезраствор;

-извлечь из бумаги стерильный шпатель Дригальского, приоткрыть крышку

итщательно растереть каплю по всей поверхности среды, закрыть чашку;

-профламбировать шпатель или поместить его в дезинфицирующий раствор.

37

Рисунок 29 – Схема посева культуры микроба на поверхность плотной питательной среды шпателем Дригальского. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Посевы в пробирках помещают в штативы, чашки Петри с посевами размещают на поддонах или в лотках. Посевы инкубируют в термостате в большинстве случаев при температуре 36ОС в течение 18-24 часов.

38

3. Правила отбора, хранения и транспортировки материала для микробиологического исследования

Отбор, хранение и транспортировка материала составляют так называемый преаналитический этап лабораторных исследований. Правила отбора, хранения и транспортировки материала для микробиологических исследований регламентированы:

-Национальным стандартом Российской Федерации ГОСТ Р 53079.4-2008 “Технологии лабораторные клинические. Обеспечение качества клинических лабораторных исследований. Часть 4. Правила ведения преаналитического этапа”;

-МУ 4.2.2039-05 “Техника сбора и транспортировки биоматериалов в микробиологические лаборатории”.

В микробиологических исследованиях используют разные виды материалов: клинический материал из организма больного или носителя, пробы из объектов внешней среды, пробы пищевых продуктов, лекарственных и косметических препаратов и др. Материал для культурального исследования из организма больного отбирается из мест локализации патологического процесса. В качестве клинического материала из организма больного могут быть использованы гной, кровь, мокрота, испражнения, моча, промывные воды, ликвор, рвотные массы, смывы с кожи и слизистых оболочек и другие жидкости и ткани организма. Пробами из объектов внешней среды могут служить вода, воздух, почва, продукты питания, смывы с предметов и др.

Материал для исследования отбирают с соблюдением правил асептики. При лабораторной диагностике инфекционных заболеваний необходимо отбирать материал до начала антимикробной терапии. Для взятия проб следует использовать стерильные инструменты, а для их транспортировки - стерильные пробирки или контейнеры. Использование нестерильных сухих, чистых пробирок допускается только для отбора и транспортировки крови на серологические исследования. Количество материала должно быть достаточным для проведения исследования.

Для взятия и транспортировки биологического материала следует использовать одноразовые стерильные тубсеры (пробирки с тампонами) промышленного производства или транспортные системы со средой. Нативный материал доставляют в лабораторию в максимально короткие сроки (для большинства образцов не позднее 1,5-2 часов после их получения). Допускается хранение материала в холодильнике при 4ОС. При использовании транспортных сред биологический материал можно хранить в течение 24 часов. Жидкий биологический материал можно транспортировать непосредственно в шприце, на кончик которого надет стерильный колпачок.

Для исследования на анаэробы биологический материал помещают в анаэробные условия. Для жидких образцов (кровь, гной, экссудат, жидкости из стерильных полостей) используют специальные флаконы с жидкой питательной средой, заполненные газовой смесью определенного состава, куда из шприца уколом иглы через резиновую крышку вносят материал.

Транспортировка осуществляется в металлических биксах (пеналах), термоконтейнерах, которые должны легко подвергаться обработке.