Методы исследования в медицинской бактериологии

21

зараженных животных, комнаты для обеззараживания инвентаря (клетки, садки и др.), комнаты для надевания и снятия защитной одежды;

-комнаты для проведения серологических исследований;

-комната для люминесцентной микроскопии;

-помещения для ПЦР-диагностики;

-автоклавная для обеззараживания инфицированных объектов и материалов;

-термостатная (термальная) комната;

-комната для ведения записей в рабочих журналах;

-туалет.

Влабораториях, проводящих исследования с микроорганизмами 3-4 групп патогенности, в “заразной” зоне располагаются:

- помещения для приема и регистрации поступающего на исследование материала;

- лабораторные помещения, оснащенные боксами биологической безопасности;

- комнаты для проведения бактериологических исследований; - комнаты для проведения серологических исследований; - комнаты для люминесцентной микроскопии; - комнаты для гельминтологических исследований; - термостатная комната; - автоклавная для обеззараживания материала.

Влабораториях, проводящих исследования с микроорганизмами 4 группы патогенности, в “заразной” зоне располагаются:

- комната для посевов и проведения исследований с микроорганизмами; - комната для обеззараживания и стерилизации используемых материалов.

На границе “чистой” и “заразной” зон находится санпропускник, включающий в себя комнату для снятия личной одежды, душевую и комнату для надевания рабочей одежды.

В“заразной” зоне персонал работает в рабочей одежде. В помещениях, где проводится непосредственная работа с патогенными биологическими агентами, надевается дополнительная защитная одежда. Тип защитной одежды зависит от характера выполняемой работы и патогенности возбудителя. Надевают защитную одежду в предбокснике или при входе в комнату для микробиологических манипуляций, а снимают - в предбокснике или на выходе из этой комнаты.

К внутренней отделке и оборудованию помещений “заразной” зоны предъявляются специфические требования. Так, поверхность пола, стен и потолка должна быть гладкой, без щелей, устойчивой к действию моющих и дезинфицирующих средств, полы не должны быть скользкими. Трубопроводы и батареи отопления должны располагаться на некотором расстоянии от стен для проведения их дезинфекции. Места ввода инженерных коммуникаций в эти помещения герметизируются. Системы водоснабжения защищаются техническими средствами от подсоса и обратного тока воды. Категорически запрещается слив необеззараженных отходов в канализационную систему. Окна в помещениях “заразной” зоны не открываются, а двери должны плотно закрываться.

Боксированные помещения для работы с инфицированными материалами и животными оборудуются автономной системой приточно-вытяжной вентиляции. От

22

других вентиляционных систем здания эти системы изолируются и оборудуются специальными фильтрами тонкой очистки выводящего воздуха.

Лабораторное оборудование и мебель (столы, стеллажи для содержания животных, стулья и т. д.) должны быть гладкими, без острых краев и шероховатостей и иметь покрытие, устойчивое к действию моющих и дезинфицирующих средств. Поверхность столов не должна иметь швов и трещин. Покрытие мебели изготавливают из химически устойчивого пластика или другого материала, который легко очищается и дезинфицируется. Деревянную мебель красят масляной или эмалевой краской светлых тонов.

Лабораторные помещения оборудуют системой пожарной сигнализации и обеспечивают средствами пожаротушения.

2.2. Техника безопасности при работе в микробиологической лаборатории

Основными опасными факторами в микробиологической лаборатории являются:

1.Микробы, их токсины и материалы, подозрительные на инфицирование.

2.Огнеопасные и взрывоопасные химические вещества.

3.Кислоты, щелочи и другие токсичные соединения.

4.Электрические приборы.

В процессе работы в микробиологической лаборатории должны соблюдаться правила, предотвращающие воздействие этих факторов на людей и окружающую среду, предупреждающие попадание бактерий и плесневых грибов в исследуемый материал, а также исключающие возможность внутрилабораторных заражений персонала и распространения инфекции за пределы лаборатории. К таким правилам работы в микробиологической лаборатории относятся:

1. Проведение исследований в защитной одежде (халат, шапочка или косынка). Защитная одежда одевается перед входом в лабораторию и снимается после выхода из нее. Выход за пределы лаборатории в защитной одежде запрещен. Запрещается также без необходимости ходить в защитной одежде из одной лаборатории в другую или надевать верхнюю одежду на халат.

2.Дополнительное использование при работе с микробными культурами резиновых перчаток и ватно-марлевой повязки (маски). При работе в боксе применяют стерильные халат, маску и шапочку, при этом обязательно меняют обувь. При необходимости (в случае работы с опасными и особо опасными микроорганизмами, при работе в виварии) дополнительно надевают вторую пару резиновых перчаток, передник, нарукавники, защитные очки, а на ноги – резиновые сапоги.

3.Строгое соблюдение правил личной гигиены: содержание в чистоте рук, применение косынки для защиты волос.

4.В лаборатории строго запрещено пить, принимать пищу, курить, хранить продукты питания, вносить посторонние личные вещи.

5.Не допускаются хождение и разговоры во время работы.

25

Боксы биологической безопасности используются для ограничения распространения биологических аэрозолей, образующихся при проведении микробиологических исследований. В микробиологических лабораториях используются боксы первого, второго и третьего класса биологической безопасности (рисунок 11).

а б Рисунок 11 – Боксы биологической безопасности 3 (а) и 2 (б) класса. Заимствовано

из Интернет-ресурсов.

Боксы 1 и 2 классов являются эффективной системой ограничения распространения возбудителей, относящихся к III-IV группам патогенности (российская классификация). Боксы 3 класса обеспечивают максимально возможную защиту персонала и окружающей среды от воздействия биологических агентов I-II групп патогенности (российская классификация). Основные различия классов боксов заключаются в направленности воздушных потоков внутри боксов, в выходе выводящего воздуха внутрь лаборатории или во внешнюю среду через систему вентиляции и количеством ступеней фильтрации воздуха.

К вторичным барьерам относится оборудование для проведения деконтаминации инструментов и принадлежностей (автоклавы), система вентиляции для обеспечения направленного потока воздуха, шлюзовые двери на входе в лабораторию, соответствующая мебель.

В бактериологической лаборатории ведется следующая документация:

1.Инвентарная книга музейных штаммов микроорганизмов.

2.Журнал учета движения материала в лаборатории.

3.Журнал учета стерилизации и уничтожения инфицированного материала.

4.Журнал учета зараженных подопытных животных.

5.Журнал исследований (экспертиз).

26

2.3. Подготовка принадлежностей к микробиологическому исследованию

Первым этапом всей микробиологической работы является подготовка используемых в работе принадлежностей, посуды, материалов к стерилизации и стерилизация этих предметов. При микробиологических исследованиях широко используют такие принадлежности как бактериологическая игла, бактериологическая петля, пипетки разного объема, чашки Петри, пробирки, колбы, флаконы.

Бактериологическая игла предназначена для извлечения и инокуляции микробной культуры. Она состоят из стальной иглы (проволоки) и держателя. Ее стерилизуют фламбированием (прокаливанием в пламени горелки).

Бактериологическая петля предназначена для извлечения и пересева микробных культур. Она состоит из ручки, покрытой термоизоляционным материалом (длинна 60-80 мм), держателя петли - хромированного прута (диаметром 3-5, длиной 100-150 мм) и непосредственно самой петли - термостойкой платиновой или нихромовой проволоки (диаметром 1-2 мм, длина 60-80 мм) с круглой петлей на конце (диаметром 3-4 мм). Правильно изготовленная петля должна быть замкнута в кольцо, иначе в ней не будет удерживаться капля микробной культуры. Петлю и ее держатель стерилизуют фламбированием.

Строение бактериологической иглы и бактериологической петли представлено на рисунке 12.

А Б В Г

Рисунок 12 – Бактериологическая игла (А) и бактериологическая петля, подготовленная неправильно (Б, В) и правильно (Г). Заимствовано из Интернет-

ресурсов.

В настоящее время в практической работе часто используют пластиковые стерильные иглы и петли одноразового использования (рисунок 13).

27

Рисунок 13 - Пластиковые стерильные иглы и петли одноразового использования. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Жидкости объемом от нескольких капель до десятков миллилитров (см3) извлекают с помощью пипеток. В бактериологической лаборатории применяются пипетки Пастера, мерные пипетки и пипетки Мора. Пипетку Пастера используют для асептического извлечения жидкостей объемом в несколько капель; мерную пипетку – для извлечения жидкостей объемом от долей до нескольких миллилитров; пипетку Мора - от 1 до 50 мл (рисунок 14).

Рисунок 14 – Стеклянные мерные пипетки. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Пипетка Пастера – это стеклянная трубка диаметром 5-6 мм, с толщиной стенки 1-2 мм. Ее длина составляет 80-220 мм, длина толстой части 50-80 мм, длина оттянутой тонкой части с запаянным концом - 100-120 мм (рисунок 15).

28

Рисунок 15 – Пастеровские пипетки. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Перед стерилизацией в тупой конец пипетки помещают комочек ваты, пипетку заворачивают в бумагу или вкладывают в пенал. Подготовленные пипетки стерилизуют в сухожаровом шкафу при температуре 160-165ОС в течение 60-120 минут.

Ватно-марлевые пробки готовят следующим образом: скатывают валик из ваты по диаметру, соответствующему горловине сосуда (пробирки, колбы, флакона); покрывают валик марлей; перевязывают приготовленный ватно-марлевый валик ниткой у края; обрезают избыток марли и ниток; проверяют соответствие пробки сосуду (при ее извлечении из сосуда должен быть слышен хлопок).

В настоящее время в практической работе используют пробки, изготовленные из прессованной целлюлозы, или силиконовые пробки (рисунок 16).

Рисунок 16 – Пробки из прессованной целлюлозы. Заимствовано из Интернетресурсов.

Подготовка пробирок для стерилизации (рисунок 17):

-пробирки моют и высушивают;

-в сухую пробирку помещают ватно-марлевую пробку;

-горловину и пробку одиночных пробирок заворачивают перед стерилизацией бумагой в виде колпака; несколько пробирок (5, 10, 20, 100 штук) можно одновременно завернуть полностью в бумагу или поместить в бикс;

29

- стерилизация приготовленного пакета.

Рисунок 17 – Подготовка пробирок к стерилизации.

Подготовка колб для стерилизации осуществляют аналогичным образом: после мойки и высушивания горловину колбы с пробкой обертывают бумагой и колбы стерилизуют.

Подготовка пипеток для стерилизации:

-пипетки моют и высушивают;

-с тупого конца внутрь пипетки вставляют вату для фильтрации воздуха и задержки жидкости в случае чрезмерного ее всасывания;

-волоски ваты обжигают на пламени спиртовки, чтобы они не мешали надевать резиновую трубку с баллончиком на пипетку при работе;

-подготовленные пипетки помещают в пенал или обертывают бумагой. При завертывании одной пипетки (рисунок 18) полоску бумаги размером 6х30 см помещают на стол и закатывают пипетку. Свободный конец полоски бумаги закручивают.

Рисунок 18 – Подготовка пипеток для стерилизации.

Заготовку подписывают, указав объем пипетки. Одновременно можно завернуть несколько пипеток (3-5 штук) аналогичным образом.

Подготовка чашек Петри для стерилизации:

-чашки моют и высушивают;

-чашку накрывают крышкой;

-чашки помещают в контейнер (бикс) или заворачивают бумагой (рисунок 19). Для этого одну или несколько чашек помещают на квадратный лист бумаги, последовательно заворачивают углы и закрепляют последний угол за боковыми углами.

30

Рисунок 19 – Подготовка чашек Петри к стерилизации.

Чашки Петри можно не заворачивать в бумагу, а стерилизовать в металлических биксах, расположив их слоями.

Современные чашки Петри – пластиковые. Они выпускаются стерильными, запакованными в полиэтиленовую пленку (рисунок 20).

Рисунок 20 – Стерильные пластиковые чашки Петри. Заимствовано из Интернетресурсов.

Стеклянный шпатель Дригальского моют, высушивают, обертывают бумагой каждый шпатель по-отдельности или несколько штук вместе и стерилизуют (рисунок 21).

Рисунок 21 – Подготовка шпателя для стерилизации.

В настоящее время наряду со стеклянными шпателями Дригальского используют металлические и пластиковые шпатели разных форм, выпускаемые в стерильных упаковках (рисунок 22).