8.Методы выделения чистых культур анаэробных бактерий.

Чистой культурой МО называют культуру одного вида, выращенного как потомство одной клетки. Методы выделения чистых культур МО основаны на изоляции одной микробной клетки от массы МО и последующем выращивании потомства этой клетки на питательных средах изолированно от других видов.

Наиболее распространенным способом выделения чистых культур является посев смеси микробов на плотные питательные смеси с целью получения отдельных колоний культур, которые считают результатом развития одной клетки. Для посева чаще используют агаризованные Среды в чашках Петри. Основной задачей метода является разведении концентрации МО в исследуемом материале с таким расчетом , чтобы при посеве его на питательную среду выросли изолированные колонии. Существуют два основных метода разведения исследуемого материала: 1) на поверхности плотной питательной Среды; 2) предварительное разведение материала в физиологическом растворе.

Метод на поверхности плотной Среды используется для выделения чистых культур аэробных, факультативно анаэробных МО. С этой целью для посева берут ряд чашек Петри с плотной средой. В первую чашку наносят исследуемый материал и распределяют его по поверхности шпателем. Затем производят посев последовательно на поверхность Среды в остальных чашках. Количество материала, внесенного в среду, при этом последовательно убывает. Метод предварительного разведения используется для выделения чистых культур МО как аэробных, так и анаэробных. Готовят разведение материалов 10-100 раз и более и производят посев разведений, пользуясь поверхностным или глубинным методом.

Выделение чистых культур строгих анаэробов требует условий выращивания без доступа кислорода.

9.Классификация микробиологических питательных сред.

Для выращивания бактерий применяют различные питательные среды. Они могут быть жидкими, плотными или полужидкими. По происхождению среды делят на естественные (кровяные, молочные, яичные) и искусственные, получившие особенно широкое распространение. Они представляют собой искусственные сбалансированные смеси питательных веществ в концентрациях и сочетаниях, необходимых для роста и размножения МО. Питательные среды должны обязательно отвечать пяти основным требованиям:

1)они должны содержать все необходимые питательные вещества, соли и витамины;

2)должны иметь оптимальную для роста данного вида бактерий рН;

3)должны иметь достаточную влажность (при их усыхании повышается концентрация питательных веществ, особенно солей, до уровней, тормозящих рост бактерий).

4)должны быть стерильными и прозрачными;

5)должны быть изотоничными.

По назначению питательные среды подразделяют на следующие основные категории.

Универсальные — среды, на которых хорошо растут многие виды патогенных и непатогенных бактерий. К ним относятся: МПБ = мясная вода + 1 % пептона + 0,5 % NaCl, МПА = МПБ + 2-3 % агара).

Дифференциально-диагностические — среды, позволяющие отличать одни виды бактерий от других, построены на биохим. св-вах бактерий, разл. виды бактерий растут в виде окрашенных или неокрашенных колоний.(Среды Эндо, Левина, Плоскирева, Гисса)

Селективные — среды, содержащие вещества, используемые МО определенных видов и препятствующие росту других МО. Селективные среды позволяют направленно отбирать из исследуемого материала определенные виды бактерий. (Среды Мюллера, Рапопорт, 1 %-ная пептонная вода, желчный бульон)

Специальные — среды, специально приготовленные для получения роста тех бактерий, которые не растут или очень плохо растут на универсальных средах. (Кровяные, сахарные, сывороточные).