Вопрос 72

 Источники загрязнения и методы бактериологического контроля Микрофлора лекарственных растений и растительного сы­рьяМикроорганизмы являются постоянными спутниками не толь­ко человека и животных, но и, в равной степени, высших расте­ний, в том числе используемых в качестве лекарственного сырья. В России используется более 200 видов лекарственных растений. Микроорганизмы поселяются и ведут активный образ жизни, как на поверхности, так и внутри зеленых частей растений, их корней, семян, плодов. Для приготовления лекарств служат самые разно­образные растения и работники аптечных учреждений, фармацев­тических фабрик и заводов должны обеспечивать сохранность ле­карственного сырья от микробной порчи. Все микроорганизмы, населяющие лекарственные растения, можно разделить на две группы: • представители нормальной микрофлоры растений; • фитопатогенные микроорганизмы - возбудители заболева­ний растений1. Нормальная микрофлора растений Микроорганизмы являются постоянными обитателями растений, лекарственного сырья растительного происхождения. Различные группы микроорганизмов могут находиться на поверхности или внутри различных частей растений, их корней, семян, плодов, часть из них (фитопатогенные) могут приводить к болезням растений и порче лекарственного сырья. Работники аптечных учреждений должны способствовать сохранности лекарственного сырья от микробной порчи. Микроорганизмы, населяющие лекарственные растения, можно разделить на две группы: представители нормальной микрофлоры растений; фитопатогенные микроорганизмы - возбудители заболеваний растений. Нормальная микрофлора растений представлена ризосферными и эпифитными микробами. Зона почвы, находящаяся в контакте с корневой системой растений, носит название ризосферы, а микроорганизмы, развивающиеся здесь, называют ризосферными. Количество микроорганизмов в ризосфере в сотни раз больше, чем в остальной почве. Почвенные микробы могут оказывать благоприятное воздействие на растения, что обусловлено: минерализацией органических веществ и растительных остатков; образованием различных факторов роста (витаминов, аминокислот, ферментов), усиливающих обменные процессы в растениях и способствующих усилению корневого питания; антагонизмом в отношении фитопатогенных микроорганизмов. Состав микрофлоры ризосферы специфичен для различных растений. Основная масса прикорневой микрофлоры представлена грамотрицательными неспороносными бактериями рода Pseudomo as, микобактериями и грибами, главным образом базидиомицетами. Грибы образуют симбиоз с корнями растений, в том числе и лекарственных, называемый микоризой. В зависимости от особенностей симбиоза грибов с растениями различают эктотрофные и эндотрофные микоризы. Эктотрофные – ассоциации, при которых гриб поселяется на их поверхности корней, образуя своего рода чехол из мицелия. При эндотрофных микоризах мицелий гриба располагается в клетках коры корней растений, где образует скопления в виде клубков. Микориза благоприятна для развития растений: увеличивает поглощающую поверхность корней за счет разрастаний гиф гриба; грибы своими ферментами разлагают органические соединения, обеспечивая растения аминокислотами, минеральными веществами и водой; микоризные грибы снабжают растения ростовыми факторами.

№ 77Учение о санитарно-показательных микроорганизмах

Санитарная микробиология — раздел медицинской микробиологии, изучающий мик­роорганизмы, содержащиеся в окружающей среде и способные оказывать неблагоприятное воздействие на состояние здоровья человека. Она разрабатывает микробиологические; показатели гигиенического нормирования, методы контроля за эффективностью обез­зараживания объектов окружающей среды, а также выявляет в объектах окружающей сре­ды патогенные, условно-патогенные и санитарно-показательные микроорганизмы.

Санитарно-показательные микроорганизмы используют в основном для косвенного опре­деления возможного присутствия в объектах окружающей среды патогенных микроорга­низмов. Их наличие свидетельствует о загряз­нении объекта выделениями человека и жи­вотных, так как они постоянно обитают в тех же органах, что и возбудители заболеваний, и имеют общий путь выделения в окружаю­щую среду. Например, возбудители кишечных инфекций имеют общий путь выделения (с фекалиями) с такими санитарно-показательными бактериями, как бактерии группы ки­шечной палочки —(в группу входят сходные по свойс­твам бактерии родов Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella), энтерококки, клостридии перфрингенс. Возбудители воздушно-капельных инфекций имеют общий путь выделения с бактериями (кокками), постоянно обитаю­щими на слизистой оболочке верхних дыха­тельных путей, выделяющимися в окружаю­щую среду (при кашле, чиханье, разговоре), поэтому в качестве санитарно-показательных бактерий для воздуха закрытых помещений предложены гемолитические стрептококки и золотистые стафилококки. Санитарно-показательные микроорганизмы должны отвечать следующим основным требованиям:

1. должны обитать только в организме лю­дей или животных и постоянно обнаружи­ваться в их выделениях;

2. не должны размножаться или обитать в почве и воде;

3. сроки их выживания и устойчивость к различным факторам после выделения из ор­ганизма в окружающую среду должны быть равными или превышать таковые у патоген­ных микробов;

4. их свойства должны быть типичными и легко выявляемыми для их дифференциации;

5. методы их обнаружения и идентифика­ции должны быть простыми, методически и экономически доступными;

6. должны встречаться в окружающей среде в значительно больших количествах, чем па­тогенные микроорганизмы;

7. в окружающей среде не должно быть близ­ко сходных обитателей — микроорганизмов.

78Санитарно-показательные микроорганизмы являются постоянными обитателями поверхностей и полостей человеческого или животного организма. Обнаружение и в объектах внешней среды свидетельствует о загрязнение выделениями человека или животного. Чем обильнее такое загрязнение, тем больше возможность попадания в объект патогенных микробов. Санитарно-показательными микроорганизмами могут быть только те, которые постоянно и в больших количествах содержатся в выделениях человека или животного, они должны сохранять жизнеспособность во внешней среде в течение сроков, близких к срокам выживания патогенных микробов, выделяемых теми же путями, но не размножаться интенсивно во внешней среде. Они должны также легко обнаруживаться современными и довольно простыми методами исследования. Основными санитарно-показательными микроорганизмами в отношении кишечных инфекций, указывающими на фекальное загрязнение внешней среды (вода, почва), считают бактерии группы кишечных палочек (БГКП). В качестве дополнительных показателей при оценке некоторых объектов определяют наличие фекальных стрептококков (энтерококков) и клостридий.

Кишечные палочки как санитарно-показательные микробы наиболее полно соответствуют требованиям, предъявляемым к таким микроорганизмам. Они являются постоянными обитателями кишечника человека и теплокровных животных, в больших количествах выделяются в окружающую среду. Сроки их выживания во внешней среде немного превышают сроки сохранения патогенных представителей кишечных бактерий в тех же условиях или совпадают с ними.

К БГКП относятся не только эшерихии, но и представители родов цитробактер, энтеробактер, клебсиеллы. Для них характерны следующие признаки: короткие, грамотрицательные, неспорообразующие палочки, на среде Эндо они растут в виде темно-красных колоний с металлическим блеском или без него либо в виде розовых колоний с темным центром; сбраживают лактозу и глюкозу при 37°С в течение 24 ч с образованием кислоты и газа, не обладают оксидазной активностью. Отрицательная оксидазная проба позволяет дифференцировать семейство Enterobacteriaceae от грамотрицательных бактерий семейства Pseudomonadaceae и других водных сапрофитов, обладающих ферментом оксидазой. Все БГКП попадают во внешнюю среду только из кишечника человека и животных. Наибольшее санитарно-показательное значение в этой группе имеет E. coli, присутствие которой, например, в питьевой воде, рассматривается как признак свежего хозяйственно-бытового загрязнения, несомненно, фекального происхождения. Присутствие энтерококков считают дополнительным показателем фекального загрязнения воды и других объектов. Однако их выделение требует сред более сложных при приготовлении и растут они медленнее. Энтерококки являются нормальными обитателями кишечника, но выделяются во внешнюю среду в меньших количествах, чем кишечные палочки. Энтерококки быстрее отмирают в воде и почве. Как правило, они не размножаются в этих объектах, что позволяет рассматривать их как показатель свежего фекального загрязнения.

К санитарно-показательным клостридиям относят группу грамположительных, спорообразующих анаэробных палочек, редуцирующих сульфит на сульфит-неомицинполимиксиновой среде (СПН) при инкубации в условиях 45°С в течение 12—24 ч. Эта группа в основном представлена CI. perfringens, которые встречаются в кишечнике большинства людей в значительно меньших количествах, чем кишечная палочка. Клостридии более, устойчивы, чем не образующие спор БГКП и энтерококки. Определение санитарно-показательных клостридий рекомендуют проводить в почве и воде, используемой на предприятиях пищевой промышленности, а также при выборе новых источников водоснабжения.

Санитарно-показательными микроорганизмами загрязнения воздуха закрытых помещений являются стафилококки (Staph, aureus), а также зеленящие и гемолитические стрептококки, постоянно обитающие на слизистой оболочке верхних дыхательных путей и выделяющиеся в воздушную среду при разговоре, кашле, чиханье. Во внешней среде стрептококки сохраняют жизнеспособность в течение примерно тех же сроков, что и возбудители дифтерии, а стафилококки — даже дольше.  Чем большее количество стрептококков обнаруживают в воздушной среде, тем вероятнее возможность заражения человека воздушно-капельными инфекциями. Нарастание обсемененности воздуха Staph, aureus и частое его обнаружение свидетельствуют о санитарно-эпидемиологическом неблагополучии. В лечебных учреждениях вторичным источником обсеменения воздуха Staph, aureus могут быть загрязненные постельные принадлежности, белье, с которых эти микроорганизмы попадают в воздух, Наиболее полную картину воздушно-капельного загрязнения воздуха дает определение и стрептококков и стафилококков. Однако ввиду того, что стрептококки довольно трудно культивировать, в лабораторной практике ограничиваются выделением Staph, aureus.

рмативных документов.

79. Микробиологический контроль в производственных аптеках проводится два раза в квартал в соответствии с методическими указаниями по микробиологическому контролю в аптеках от 29.12.84.

14.2. Объекты микробиологического контроля:

- персонал;

- воздушная среда производственных помещений;

- инвентарь и оборудование;

- посуда, средства укупорки и другие вспомогательные материалы;

- вода очищенная и вода для инъекций;

- лекарственные вещества, используемые для приготовления растворов для инъекций;

- растворы для инъекций;

- глазные капли;

- другие стерильные растворы;

- лекарственные средства для детей от 0 до 1 года. 80Микробиологический контроль возду­ха проводится с помощью методов естест­венной или принудительной седиментации микробов. Естественная седиментация (по методу Коха) проводится в течение 5—10 мин путем осаждения микробов на поверхность твердой питательной среды в чашке Петри. Принудительная   седиментация   микробов осуществляется путем «посева» проб воздуха на питательные среды с помощью специаль­ных приборов (импакторов, импинджеров, фильтров). Импакторы — приборы для при­нудительного осаждения микробов из воздуха на поверхность питательной среды (прибор Кротова, пробоотборник аэрозоля бактерио­логический и др.). Импшджеры — приборы, с помощью которых воздух проходит через жидкую питательную среду или изотоничес­кий раствор хлорида натрия.

Санитарно-гигиеническое состояние воз­духа определяется по следующим микробио­логическим показателям:

1. Общее количество микроорганизмов в 1 м3 воздуха (так называемое общее микробное число, или обсемененность воздуха) — коли­чество колоний микроорганизмов, выросших при посеве воздуха на питательном агаре в чашке Петри в течение 24 ч при 37 °С, выра­женное в КОЕ;

2. Индекс санитарно-показательных микро­бов— количество золотистого стафилококка и гемолитических стрептококков в 1 м3 воздуха. Эти бактерии являются представителями мик­рофлоры верхних дыхательных путей и имеют общий путь выделения с патогенными микроор­ганизмами, передающимися воздушно-капель­ным путем. Появление в воздухе спорообразу-ющих бактерий — показатель загрязненности воздуха микроорганизмами почвы, а появление грамотрицательных бактерий — показатель воз­можного антисанитарного состояния.

Для оценки воздуха лечебных учреждений мож­но использовать данные из официально рекомен­дованных нормативных документов.

№ 80 Микрофлора воздуха и методы ее исследования.

В воздух попа­дают микроорганизмы из дыхательных путей и с каплями слюны человека и животных. Здесь обнаруживаются кокковидные и палоч­ковидные бактерии, бациллы, клостридии, актиномицеты, грибы и вирусы. С целью снижения микробной обсемененности воздуха проводят влажную уборку по­мещения, очис­тку поступающего воздуха. Применяют также аэрозольную дезинфекцию и обработку помещений лампами ультрафиолетового излучения.

Микробиологический контроль возду­ха проводится с помощью методов естест­венной или принудительной седиментации микробов. Естественная седиментация (по методу Коха) проводится в течение 10 мин путем осаждения микробов на поверхность твердой питательной среды в чашке Петри. Принудительная седиментация микробов осуществляется путем «посева» проб воздуха на питательные среды с помощью специаль­ных приборов.

Санитарно-гигиеническое состояние воз­духа определяется по следующим микробио­логическим показателям:

1. Общее количество микроорганизмов в 1 м воздуха (обсемененность воздуха) — коли­чество колоний микроорганизмов, выросших при посеве воздуха на питательном агаре в чашке Петри в течение 24 ч при 37С.

2. Индекс санитарно-показательных микро­бов— количество золотистого стафилококка и гемолитических стрептококков в 1 м³ воздуха. Эти бактерии являются представителями мик­рофлоры верхних дыхательных путей и имеют общий путь выделения с патогенными микроор­ганизмами, передающимися воздушно-капель­ным путем. Появление в воздухе спорообразующих бактерий — показатель загрязненности воздуха микроорганизмами почвы, а появление грамотрицательных бактерий — показатель воз­можного антисанитарного состояния.

81.

Контроль качества проводят в 3 этапа:

1. Контроль подготовки объектов к дезинфекции (проверяют степень очистки поверхностей, их увлажненность, защиту электрооборудования и приборов, герметизацию помещений).

2. Контроль за соблюдением установленных режимов дезинфекции (выбор препарата и метода дезинфекции, концентрация, температура раствора, равномерность увлажнения поверхностей дезинфицирующим раствором, соблюдение параметров производительности используемых машин и аппаратов, качество распыления раствора) проводит ветеринарный специалист, ответственный за это мероприятие.

3. Бактериологический контроль качества дезинфекции осуществляют специалисты диагностических отделов РВС периодически или в сроки, установленные с учетом эпизоотической обстановки, технологии производства, целей дезинфекции и других конкретных особенностей.

При бактериологическом контроле качества дезинфекции определяют наличие на поверхности обеззараживаемых объектов жизнеспособных клеток санитарно-показательных микроорганизмов- бактерий группы кишечной палочки (Escherichia, Citrobacter, Enterobacter), стафилококков (aureus, epidermatis, Saprophiticus), микобактерий или спорообразующих аэробов рода Bacillus.

Отбор проб для исследования.

Отбор проб проводят по истечении срока экспозиции, до начала проветривания помещений.

Пробы (смывы, отпечатки, соскобы) для исследования берут с 10-20 различных участков поверхности животноводческого помещения (полов, стойл и т.д.). Пробы берут с наименее доступных для дезинфекции участков поверхностей каждого помещения. Отбирают пробы стерильными ватно-марлевыми тампонами, смоченными в стерильном нейтрализующем растворе или воде. Участки площадью 10х10 см протирают до полного снятия с поверхности всех имеющихся на ней загрязнений, после чего тампоны помещают в пробирку с

нейтрализующей жидкостью. Для нейтрализации хлорсодержащих дезинфицирующих средств используют раствор тиосульфата натрия (гипосульфита), щелочных растворов - раствор уксусной кислоты; формалина - раствор аммиака (нашатырный спирт); кислот, перекиси водорода и ее производных - раствор бикарбоната натрия. При дезинфекции другими средствами, для которых нет нейтрализаторов, применяют стерильную водопроводную воду. Нейтрализующие растворы готовят в концентрации в 10 раз меньше, чем концентрация использованного дезинфицирующего средства. Растворы уксусной кислоты и бикарбоната натрия можно стерилизовать автоклавированием, раствор аммиака стерилизации не подлежит. Готовые пробирки (флаконы) можно хранить в течение пяти дней при комнатной температуре.

Смывы должны быть доставлены в лабораторию в течение 3-6 ч с момента взятия, отпечатки – не позднее 2 ч.

Оценка результатов исследования. Качество профилактической дезинфекции помещений для получения и содержания молодняка скота (птицы) и текущей дезинфекции изолированных секций (боксов, скотных дворов) с автономной системой жизнеобеспечения животных признают удовлетворительным при отсутствии роста санитарно-показательных микроорганизмов в 90% исследованных проб.

При профилактической дезинфекции помещений для содержания взрослого поголовья и текущей дезинфекции частично освобожденных от животных или неизолированных помещений допускается выделение санитарно-показательных микроорганизмов из 20% исследованных проб.

Качество заключительной дезинфекции при ее контроле по выделению бактерий группы кишечной палочки, стафилококков, грибов и микобактерий признают удовлетворительным при отсутствии выделения названных культур во всех исследованных пробах.

При споровых инфекциях качество дезинфекции признают удовлетворительным при отсутствии роста Bac.anthracis. При прямом посеве на МПА допускают рост единичных (не более трех в смыве) колоний непатогенных спорообразующих аэробов рода Bacillus.

82. стр. 5 санит микробиология

Методы контроля эффективности стерилизации

В комплексе мероприятий по стерилизации изделий медицинского назначения важное значение имеет организация и проведение контроля за ее эффективностью. Используемые до настоящего времени методы и средства контроля не всегда позволяют выявить дефекты стерилизации, что влечет за собой повышение уровня внутрибольничных инфекций.

Контроль эффективности работы стерилизационного оборудования осуществляется физическими, химическими и биологическим (бактериологическим) методами. Надежность этих методов неодинакова. Физические и химические методы предназначены для оперативного контроля и позволяют контролировать соблюдение параметров режимов паровой, газовой, воздушной стерилизации, температуру, давление, экспозицию. Недостаток этих методов заключается в том, что они не могут служить доказательством эффективной стерилизации. Достоверным для определения эффективности является только бактериологический метод.

Физические методы

Физические методы контроля осуществляются с помощью средств измерения температуры (термометры, термопары), давления (манометры, мановакуумметры) и времени (таймеры). Современные стерилизаторы оснащены также записывающими устройствами, фиксирующими отдельные параметры каждого цикла стерилизации.

Химические методы

В течение десятков лет для проведения химического контроля применялись химические вещества, изменяющие свое агрегатное состояние или цвет при температуре, близкой к температуре стерилизации (бензойная кислота для контроля паровой стерилизации, сахароза, гидрохинон и ряд других веществ - для контроля воздушной стерилизации).

В 70-х годах были разработаны химические индикаторы, изменение цвета которых происходит при воздействии температуры, принятой для данного режима, в течение времени, необходимого для стерилизации. По изменению окраски этих индикаторов можно судить о том, что основные параметры процесса стерилизации - температура и время - выдержаны. Длительное применение таких индикаторов показало их высокую надежность.

Биологический метод

Наряду с физическими и химическими применяется бактериологический метод контроля стерилизации. Он предназначается для контроля эффективности стерилизационного оборудования. До недавнего времени для контроля паровой и воздушной стерилизации использовались пробы садовой земли, содержащей микроорганизмы, высокорезистентные к воздействию стерилизующих факторов. Однако устойчивость микроорганизмов в различных пробах неодинакова, что не позволяет стандартизировать результаты контроля.

В настоящее время для проведения бактериологического контроля используются биотесты, имеющие дозированное количество спор тест-культуры. Контроль эффективности стерилизации с помощью биотестов рекомендуется проводить 1 раз в 2 недели. В зарубежной практике принято применять биологическое тестирование не реже 1 раза в неделю.

В ряде случаев возникает необходимость проведения контроля с помощью биотестов каждой загрузки стерилизатора. Прежде всего, речь идет о стерилизации инструментов, используемых для выполнения сложных оперативных вмешательств, требующих применения высоконадежных стерильных материалов. Каждая загрузка имплантируемых изделий также должна подвергаться бактериологическому контролю. При этом использование простерилизованных материалов задерживается до получения отрицательных результатов контроля. Тех же принципов при определении периодичности контроля рекомендуется придерживаться в отношении газовой стерилизации, являющейся по сравнению с другими методами более сложной.

№ 83 Вакцины. Определение. Современная классификация вакцин. Требования, предъявляемые к современным вакцинным препаратам.

Вакцина — медицинский препарат, предназначенный для создания иммунитета к инфекционным болезням.

Классификации вакцин:

1.Живые вакцины - препараты, действующим началом в которых являются ослабленные тем или иным способом, потерявшие свою вирулентность, но сохранившие специфическую антигенность штаммы патогенных бактерий. Примером таких вакцин являются БЦЖ и вакцина против натуральной оспы человека, в качестве которой используется непатогенный для человека вирус оспы коров.

2.Инактивированные (убитые) вакцины – препараты, в качестве действующего начала включающие убитые химическим или физическим способом культуры патогенных вирусов или бактерий, (клеточные, вирионные) или же извлечённые из патогенных микробов комплексы антигенов, содержащие в своём составе проективные антигены (субклеточные, субвирионные вакцины). В препараты иногда добавляют консерванты и адьюванты.

Молекулярные вакцины – в них антиген находится в молекулярной форме или даже в виде фрагментов его молекул, определяющих специфичность т. е. в виде эпитопов, детерминант.

Корпускулярные вакцины – содержащие в своем составе протективный антиген

3.Анатоксины относятся к числу наиболее эффективных препаратов. Принцип получения – токсин соответствующей бактерии в молекулярном виде превращают в нетоксичную, но сохранившую свою антигенную специфичность форму путем воздействия 0.4% формальдегида при 37t в течение 3-4 недель, далее анатоксин концентрируют, очищают, добавляют адьюванты.

4.Синтетические вакцины. Молекулы эпитопов сами по себе не обладают высокой иммуногенностью для повышения их антигенных свойств эти молекулы сшиваются с полимерным крупномолекулярным безвредным веществом, иногда добавляют адьюванты.

5.Ассоциированные вакцины – препараты, включающие несколько разнородных антигенов.

Требования, предъявляемые к современным вакцинам:

Иммуногенность;

Низкая реактогенность (аллергенность);

Не должны обладать тератогенностью, онкогенностью;

Штаммы, из которых приготовлена вакцина, должны быть генетически стабильны;

Длительный срок хранения;

Технологичность производства;

Простота и доступность в применении.

84. По природе составляющих их компонентов вакцины разделяют на три основные группы — живые, убитые и химические, включая анатоксины.

Живые вакцины готовят из штаммов бактерий и вирусов с ослабленной (или утраченной) вирулентностью. Главное достоинство таких вакцин состоит в том, что живые микроорганизмы, размножающиеся в организме привитых, вызывают бессимптомную (латентную) инфекцию, аналогичную очень часто наблюдаемой в естественных условиях. Поэтому образующийся в этом случае искусственный приобретенный иммунитет ничем не отличается от естественно приобретенного активного иммунитета и, как правило, является прочным и продолжительным, нередко пожизненным. С большим успехом живые вакцины применяют для про¬филактики полиомиелита, кори, желтой лихорадки, туляремии, бруцеллеза, эпи¬демического паротита и других заболеваний. Однако у живых вакцин имеются существенные недостатки. Они могут вызывать сенсибилизацию организма, содержат большой набор антигенов. Живые вакцинные штаммы некоторых вирусов могут вызывать поражение генетического аппарата клеток.

Убитые вакцины представляют собой суспензии клеток или частиц вирулентных микробов - возбудителей инфекционных заболеваний, убитых посредством различных факторов, но не влияющих на свойства антигенов.

Для специфической профилактики брюшного тифа, паратифов А и В, дизентерии, холеры, коклюша и некоторых других инфекционных заболеваний применяют вакцины, приготовленные из микробов, убитых путем воздействия на них повышенной температурой (55-58°), формалином, спиртом, фенолом, мертиолятом и ультрафиолетовыми лучами. По своим антигенным свойствам и иммуногенной эффективности убитые вакцины значительно уступают живым, однако они способствуют снижению инфекционной заболеваемости.

Химические вакцины представляют собой препараты, которые состоят не из цельных клеток бактерий, а из химических комплексов (детерминантных групп антигенов), полученных путем обработки взвеси культуры специальными методами. Так, например, для профилактики брюшного тифа и столбняка людей применяют химическую сорбированную вакцину из О - и Vj- антигенов брюшно-тифозных бактерий и очищенного концентрированного столбнячного "анатоксина".

85. Эубиотики — микроорганизмы, участвующие в формировании естественного, исторически сложившегося микробиоценоза в кишечнике (главным образом в толстом). К ним относятся прежде всего лактобациллы и бифидумбактерии, мета¬болическая активность которых определяет положительное влияние микрофлоры кишечника на организм человека.

Пробиотики — эубиотики, добавляемые к молочным продуктам (йогурт, кефир, молоко и т. д.) или используемые в виде чистых культур, жидких или таблети- рованных (бифидумбактерии, лактобактерин,

колибактерин и др.), или в виде различных комбинаций (бификол — смесь бифидумбактерии + Е. coliM-17, обладающая выраженным антагонистическим действием в отношении ряда других бакте¬рий). В качестве пробиотиков используют также и некоторые споровые бактерии (Bacillus cereus, В. subtilis).

Эубиотики оказывают воздействие на ЖКТ, стимулируя иммунные механизмы слизистой оболочки. Применяются при лечении инфекционных диарей и запоров. Участвуют в стабилизации барьерной функции желудка и уменьшении воспаления его слизистой. Ряд штаммов лактобактерий, бифидобактерий уменьшают побочные эффекты антибиотикотерапии, некоторые штаммы эффективны в снижении побочных действий некоторых других препаратов.

К лекарствам-пробиотикам (имеющих описание в данном справочнике) относятся: Ацилакт, Аципол, Бифиформ, Бифидумбактерин, Лактобактерин, Линекс, Энтерол и другие. Современные лекарства с пробиотическим действием обычно содержат несколько культур различных микроорганизмов. Например, в каждой капсуле Линекса имеется не менее 12 000 000 живых молочнокислых лиофилизированных (высушенных) клеток трех различных видов бактерий:

лактобактерии ацидофильные

бифидобактерии инфантис

энтерококки фэциум.

В настоящем справочнике имеются описания некоторых биологических активных добавок (БАДов) — пробиотиков: Бифиформ Бэби, Бифиформ Малыш и Бифиформ Комплекс.

БАДы могут отличаться от лекарств более простой системой испытаний и сертификации. БАДы-пробиотики, также как лекарства-пробиотики, обычно содержат пробиотические микроорганизмы нескольких типов, а также иные вещества. БАДа Бифиформ-комплекс содержит:

бифидобактерии— не менее 1 000 000 000 бактериальных клеток

лактобактерии— не менее 1 000 000 000 бактериальных клеток

— не менее 1 000 000 000 бактериальных клеток

инулин — не менее 720 мг.

86. «МИБП — лек ср-ва, которые предназначены для использования в медицинской практике с целью лечения, специфической профилактики инфекционных паразитарных заболеваний и аллергических состояний, а также которые получают путем культивирования штаммов микроорганизмов и клеток эукариот, экстракции веществ из биологических тканей, включая ткани человека, животных и растений (аллергены), внедрения технологии рекомбинантной ДНК, гибридомной технологии, репродукции живых агентов в эмбрионах или животных.

К МИБП относят аллергены, антигены, вакцины (анатоксины), цитокины, иммуномодуляторы бактериального происхождения и полученные на основе органов и тканей, препараты, полученные из крови и плазмы крови человека, животных, иммунные сыворотки, иммуноглобулины (включая моноклональные антитела), пробиотики, интерфероны, другие лекарственные средства, предназначенные для использования в медицинской практике с целью лечения, специфической профилактики, диагностики состояния иммунитета (in vivo)».

Виды иммунобиологических препаратов. Эффекты иммунобиологических препаратов.

Виды иммунобиологических препаратов:

• Профилактические и лечебные препараты микробного происхождения (например, вакцины, . бактериофаги, эубиотики, анатоксины)

• Лечебные иммунные препараты (например, Ig, цитокины)

• Диагностические иммунные препараты (например, антисыворотки), а также диагностические бактериофаги и аллергены

• Иммуномодуляторы (различные синтетические препараты, биостимуляторы природного происхождения).

Иммунобиологические препараты могут проявлять активное или пассивное, специфическое или неспецифическое действие.

Активное действие состоит в индуцировании препаратами иммунных реакций. Такими эффектами обладают вакцинные препараты, изготавливаемые на основе живых ослабленных • или убитых микроорганизмов, а также продуктов их жизнедеятельности.

Пассивное действие — эффекты препаратов, представляющих собой эффекторные продукты иммунокомпетентных клеток. Такими эффектами обладают Ig, цитокины и другие иммунобиологические препараты.

Специфическое действие проявляют препараты, обеспечивающие защиту от конкретного возбудителя (например, противокоревая вакцина, столбнячный анатоксин).

Неспецифическое действие оказывают препараты, неизбирательно стимулирующие функции иммунокомпетентных клеток. Такой эффект оказывают иммуномодуляторы, многие биостимуляторы и другие препараты.

№ 87 Антитоксические сыворотки. Получение, очистка, титро­вание. Применение. Осложнения при использовании и их преду­преждение.

Антитоксические гетерогенные сыворотки получаются путем гипериммунизации различных животных. Они называются гетерогенными т.к. содержат чужеродные для человека сывороточные белки. Более предпочтительным является применение гомологичных антитоксических сывороток, для получения которых используется сыворотка переболевших людей (коревая, паротидная), или специально иммунизированных доноров(противостолбнячная, противоботулинистическая), сыворотка из плацентарной а так же абортивной крови, содержащие антитела к ряду возбудителей инфекционных болезней вследствие вакцинации или перенесенного заболевания.

Для очистки и концентрирования антитоксических сывороток используют методы: осаждение спиртом или ацетоном на холоде, обработка ферментами, аффинная хроматография, ультрафильтрация.

Активность иммунных антитоксических сывороток выражают в антитоксических единицах, т.е. тем наименьшим кол-вом антител, которое вызывает видимую или регистрируемую соответствующим способом реакцию с определённым кол-вом специфического антигена. активность антитоксической противостолбнячной сыворотки и соответствующего Ig выражается в антитоксических единицах.

Антитоксические сыворотки применяются для лечения токсинемических инфекций (столбняк, ботулизм, дифтерия, газовая гангрена).

После введения антитоксических сывороток возможны осложнения в виде анафилактического шока и сывороточной болезни, поэтому пред введением препаратов ставят аллергическую пробу на чувствительность к ним пациента, а вводят их дробно, по Безредке.

88. Иммуноглобулины (Ig) или антитела - это особый вид белков, которые вырабатываются под влиянием антигенов и обладают способностью специфически связываться с ними. Иммуноглобулины по своему строению и функции делятся на 4 вида: Ig A, Ig M, Ig G, Ig E Получение лечебно-профилактических сывороток и иммуноглобулинов.

Лечебно-профилактические сыворотки представляют собой иммунные сыворотки (т.е. содержат повышенную концентрацию специфических антител), иммуноглобулины получают из лечебно-профилактических сывороток путѐм удаления из них максимально возможного количества балластных веществ; все препараты для серотерапии бывают гетерологичные (получаемые из лошадиной сыворотки) и гомологичные, которые, в свою очередь подразделяются на донорские и плацентарные. Выделение антител и их очистка. Различают неспецифические и специфические методы выделения А. К неспецифическим относят методы фракционирования иммунных сывороток, в результате которых получают фракции, обогащенные А., чаще всего фракцию lgG-антител. К ним относятся высаливание иммуноглобулинов сернокислым аммонием или сернокислым натрием, осаждение иммуноглобулинов спиртом, методы препаративного электрофореза и ионообменной хроматографии и гель-хроматографии. Специфическая очистка основана на выделении А. из комплекса с антигеном и приводит к получению А. одной специфичности, но гетерогенных по физико-химическим свойствам. Процедура состоит из следующих этапов: получение специфического преципитата

(комплекса антиген — антитело) и отмывка его от остальных компонентов сыворотки; диссоциация преципитата; отделение А. от антигена на основе различий в их молекулярной массе, заряде и других физико-химических свойств. Для специфического выделения А. широко используют иммуносорбенты — нерастворимые носители, на которых фиксирован антиген. В этом случае процедура получения А. значительно упрощается и включает пропускание иммунной сыворотки через колонку с иммуносорбентом, отмывку иммуносорбента от несвязавшихся белков сыворотки, элюцию фиксированного на иммуносорбенте А. при низких значениях рН и удаление диссоциирующего агента путем диализа.

Применение антител в мед. Вследствие высокой специфичности и большой роли в защитных иммунных реакциях антитела используют для диагностики инфекционных и неинфекционных заболеваний, определение иммунного статуса организма, профилактики и терапии ряда инфекционных и неинфекционных болезней. Для этого сущ-ют соответствующие иммуннобиологические препараты, созданные на основе антител и имеющие целевое назначение.

89. Иммуномодуляторы – это лекарственные препараты, восстанавли

вающие в терапевтических дозах функции иммунной системы (эффек

тивную иммунную защиту). Следовательно, иммунологический эффект

иммуномодуляторов зависит от исходного состояния иммунитета боль

ного: эти лекарственные средства понижают повышенные и повышают

пониженные показатели иммунитета. В соответствии с названием им

муностимуляторы – это такие лекарственные препараты, которые пре

имущественно усиливают иммунитет, доводя пониженные показатели

до нормальных значений [2]. Иммунодепрессанты – это лекарственные

препараты, подавляющие иммунный ответ. Иммуностимуляторы применяют для лечения и профилактики ряда инфекционных и неинфекционных заболеваний.

Иммуносупрессоры используют для подавления активности лимфоцидных клеток при воспалении, аллергии, трансплантации, лечении аутоиммунных заболеваний.

Фармакологическое действие иммуномодуляторов

Иммуномодуляторы микробного происхождения

В организме главной мишенью для иммуномодуляторов микробного происхождения являются фагоцитарные клетки. Под влиянием этих препаратов усиливаются функциональные свойства фагоцитов (повышаются фагоцитоз и внутриклеточный киллинг поглощенных бактерий), возрастает продукция провоспалительных цитокинов, необходимых для инициации гуморального и клеточного иммунитета. В результате может увеличиваться продукция антител, активироваться образование антигенспецифических Т-хелперов и Т-киллеров.

Иммуномодуляторы тимического происхождения

Естественно, что в соответствии с названием главной мишенью для иммуномодуляторов тимического происхождения являются Т-лимфоциты. При исходно пониженных показателях препараты этого ряда повышают количество Т-клеток и их функциональную активность. Фармакологическое действие синтетического тимусного дипептида Тимогена состоит в повышении уровня циклических нуклеотидов по аналогии с эффектом тимусного гормона тимопоэтина, что ведет к стимуляции дифференцировки и пролиферации предшественников Т-клеток в зрелые лимфоциты.

90. Вакцинопрофилактика – вакцинирование с целью профилактики инфекционных болезней. Вакцинопрофилактику подразделяют на плановую и вынужденную. Плановую вакцинопрофилактику осуществляют с предохранительной целью в угрожаемой от болезни зоны, вынужденную вакцинопрофилактику – при возникновении болезни с целью ее ликвидации.

Вакцинотерапия

Вакцинотерапия – лечение инфекционных больных с помощью вакцин. Применяют вакцинотерапию при хронически протекающих болезнях (стафилококкоз, стрептококкоз); основана на многократном, ритмичном воздействии на организм специфическим антигенным раздражителем, сопровождающимся выработкой антител и повышением общей сопротивляемости организма.

Аутовакцина - вакцина, приготовленная из бактерий, выделенных от больного человека, с последующим их культивированием и дальнейшим использованием в качестве лекарства по классическому принципу медицины: лечи подобное подобным. Аутовакцины позволяют побеждать хронические инфекции за счет внутренних резервов самого организма человека методом повышения общего специфического иммунитета и восстановления местного иммунитета на слизистых оболочках. Т.е. не убивать бактерию, а восстановить такой уровень местной защиты, чтобы произошло самопроизвольное очищение слизистых оболочек от этих бактерий.

Аутовакцины готовятся из бактерий и грибов, выделенных из воспалительных очагов у пациентов. После идентификации бактерий их дополнительно подращивают в лабораторных условиях на питательных средах. В аутовакцине нет живых бактерий, только инактивированные, и то - в виде отдельных фрагментов. Поэтому

аутовакцины, обладая высокой иммуногенностью (способностью повышать местный иммунитет на слизистых оболочках), совершенно не вирулентны: не могут приводить к дополнительному заражению и вызывать новые заболевания.

Терапевтический эффект в результате аутовакцинотерапии обусловлен развитием противоаллергического иммунитета, приводящего к десенсибилизации организма.

91. Под вакцинальным процессом следует понимать изменения гомеостаза, возникающее в организме после введения вакцинного препарата. Вакцинальный процесс включает комплекс сложных реакций, к которым относятся: антителообразование, адаптационные (скрытые) и поствакцинальные реакции, поствакцинальные осложнения. Главным из этих реакций является комплекс патофизиологических процессов, направленных на сохранение постоянства внутренней среды. При отсутствии температуры и других клинических проявлений нормальный вакцинальный процесс считают бессимптомным. Частота развития нормального вакцинального процесса зависит от применяемой вакцины.

Эффективный иммунный ответ на вакцину зависит от способности вакцин:

- активировать антиген-презентирующие клетки;

- активировать антиген-специфические Т- и В-лимфоциты;

- индуцировать образование большого числа Т- и В-лимфоцитов памяти;

- генерировать образование Т-хелперов (Th2) и цитотоксических Т-лимфоцитов (СД8);

- обеспечивать длительное сохранение антигенов в лимфоидной ткани.

В иммунном ответе на введение вакцины участвуют макрофаги, Т-лимфоциты (эффекторные - цитотоксическими, регулярные - хелперы, супрессоры, Т-клетки памяти), В-лимфоциты (В-клетки памяти), продуцируемые плазматическими клетками антитела (Ig M, G, А), а также цитокины (монокины, лимфокины).

После введения вакцины макрофаги захватывают антигенный материал, расщепляют его внутриклеточно и представляют фрагменты антигена на своей поверхности в иммуногенной форме (эпитопы). Т-лимфоциты распознают представленные макрофагом антигены и активизируют В-лимфоциты, которые превращаются в клетки, продуцирующие антитела.

При избытке продукции AT в процесс включаются Т-супрессоры, кроме того на IgG могут вырабатываться антиидио-типические AT, что прерывает процесс выработки AT.

92. Комбинированные вакцины – это препараты, которые обеспечивают иммунитет сразу от нескольких болезней. Когда-то все вакцины вводили отдельно друг от друга. В те времена за один визит к врачу дети могли получить сразу 5 уколов. Но около 50 лет назад стали применять комбинированные вакцины. Благодаря долгим исследованиям, количество антигенов, которые можно ввести сразу, за один раз, увеличилось.

Сейчас во всем мире используются:

АКДС-вакцина;

комплексные вакцины из условно патогенных микроорганизмов;

гриппозная вакцина из трех циркулирующих штаммов вируса гриппа;

менингококковая вакцина из антигенов 4-х серотипов менингококка;

пневмококковая вакцина: конъюгированная или поливалентная включающая 23 серотипа пневмококка. В последние годы полисахаридную вакцину используют для экстренной профилактики, а конъюгированную для плановой;

трехвалентная полиомиелитная (живая, инактивированная) вакцина;

живая комплексная вакцина для профилактики кори, паротита и краснухи.

Количество побочных действий при комплексной вакцинации не намного превышает показатели моновакцинации (когда вводится вакцина лишь против одного заболевания). Наибольшее количество побочных эффектов вызывает АКДС-вакцина, но они незначительны: повышение температуры на несколько дней, небольшие высыпания на коже.

93. Анатоксины – препараты, полученные из бактериальных экзотоксинов, полностью лишенные своих токсических свойств, но сохранившие антигенные и иммуногенные свойства. Получение: токсигенные бактерии выращивают на жидких средах, фильтруют с помощью бактериальных фильтров для удаления микробных тел, к фильтрату добавляют 0,4% формалина и выдерживают в термостате при 30-40t на 4 недели до полного исчезновения токсических свойств, проверяют на стерильность, токсигенность и иммуногенность. Эти препараты называются нативными анатоксинам, в настоящее время почти не используются, т. к. содержат большое количество балластных веществ, неблагоприятно влияющих на организм. Анатоксины подвергаю физической и химической очистке, адсорбируют на адъювантах. Такие препараты называются адсорбированными высокоочищенными концентрированными анатоксинами.

Анатоксины применяются для профилактики и реже, для лечения токсинемических инфекций дифтерия, газовая гангрена, ботулизм, столбняк). Так же анатоксины применяются для получения антитоксических сывороток путем гипериммунизации животных.

Примеры препаратов: АКДС, АДС, адсорбированный стафилококковый анатоксин, ботулинистический анатоксин, анатоксины из экзотоксинов возбудителей газовых инфекций.

№ 94 Живые вакцины. получение, применение. Достоинства и недостатки.

Живые вакцины - препараты, действующим началом в которых являются ослабленные тем или иным способом, потерявшие свою вирулентность, но сохранившие специфическую антигенность штаммы патогенных бактерий.

Аттенуация (ослабление) возможна путём воздействия на штамм химических (мутагены) и физических (температура) факторов или посредством длительных пассажей через невосприимчивый организм. Так же в качестве живых вакцин используются дивергентные штаммы (непатогенные для человека), имеющие общие протективные антигены с патогенными для человека микробами. Примером такой вакцины является БЦЖ и вакцина против натуральной оспы.

Возможно получение живых вакцин генно-инженерным способом. Принцип получения таких вакцин сводится к созданию непатогенных для человека рекмбинантных штаммов, несущих протективные антигены патогенных микробов и способных при введении в орг. человека размножаться и создавать иммунитет. Такие вакцины называют векторными.

Вне зависимости от того, какие штаммы включены в вакцины, бактерии получают путём выращивания на искусственных питательных средах, культурах клеток или куриных эмбрионах. В живую вакцину, как правило, добавляют стабилизатор, после чего подвергают лиофильному высушиванию.

В связи с тем, что живые вакцины способны вызывать вакцинную инфекцию (живые аттенуированные микробы размножаются в организме, вызывая воспалительный процесс проходящий без клинических проявлений), они всегда вызывают перестройку иммунобиологического статуса организма и образование специфических антител. Это так же может являться недостатком, т. к. живые вакцины чаще вызывают аллергические реакции.

Вакцины данного типа, как правило, вводятся однократно.

Примеры: сибиреязвенная вакцина, чумная вакцина, бруцеллёзная вакцина, БЦЖ вакцина, оспенная дермальная вакцина.

№ 95 Инактивированные (корпускулярные) вакцины. Применение. Недостатки.

Инактивированные (убитые, корпускулярные или молекулярные) вакцины – препараты, в качестве действующего начала включающие убитые химическим или физическим способом культуры патогенных вирусов или бактерий, (клеточные, вирионные) или же извлечённые из патогенных микробов комплексы антигенов, содержащие в своём составе проективные антигены (субклеточные, субвирионные вакцины).

Для выделения из бактерий и вирусов антигенных комплексов (гликопротеинов, ЛПС, белков) применяют трихлоруксусную кислоту, фенол, ферменты, изоэлектрическое осаждение.

Их получают путем выращивания патогенных бактерий и вирусов на искусственных питательных средах, инактивируют, выделяют антигенные комплексы, очищают, конструируют в виде жидкого или лиофильного препарата.

Преимуществом данного типа вакцин является относительная простота получения (не требуется длительного изучения и выделения штаммов). К недостаткам же относятся низкая иммуногенность, потребность в трехкратном применении и высокая реактогенность формализированных вакцин. Так же, по сравнению с живыми вакцинами, иммунитет, вызываемый ими, непродолжителен.

В настоящее время применяются следующие убитые вакцины: брюшнотифозная, обогащенная Vi антигеном; холерная вакцина, коклюшная вакцина

97.Принципы рациональной антибиотирапии.

• Микробиологический принцип, заключается в том, что: перед назначением антибиотика необходимо установить возбудителя инфекции и определить его индивидуальную чувствительность к антибиотикам.  • Фармакологический принцип заключается в том, что: необходимо учитывать особенности препарата — его фармакокинетику и фармакодинамику, распределение в организме, кратность введения, возможность сочетания нескольких препаратов.  • Клинический принцип заключается в том, что: при назначении препарата учитывают, безопасность данного антибиотика для пациента, что зависит от индивидуальных особенностей состояния больного, наличия сопутствующей патологии и т.д.. • Эпидемиологический принцип заключается в том, что: при выборе препарата, учитывается состояние устойчивости микробных штаммов, циркулирующих в данном отделении, стационаре и даже регионе. • Принцип доступности антибиотика в очаг воспаления заключается в том, что: необходимо проводить мероприятия по устранению причин, препятствующих эффективной антибиотикотерапии - дренирование локального очага инфекции, удаление инородного тела и т.д.. • Принцип оптимальной длительности терапии: заключается в том, что срок лечения антибиотиком, как правило, индивидуален, и зависит от вида возбудителя, но в целом лечение проводится до достижения «клинически явного выздоровления», и еще 3 суток во избежании рецидива инфекции. • Принцип проведения фармакокинетического мониторинга за уровнем концентрации препарата в крови или в очаге микробного воспаления, что позволит проводить коррекцию схем лечения, увеличить эффект и снизить вероятность побочных эффектов. • Принцип обязательного проведения микробиологического контроля – сдача контрольных анализов после лечения.

98. Различают два варианта выдачи иммунного ответа в форме биосинтеза антител: первичный ответ — после первой встречи организма с данным антигеном, и вторичный ответ — при повторном контакте его с одним и тем же антигеном спустя 2—3 недели. Внешне первичный и вторичный иммунный ответ различаются по следующим признакам: продолжительность латентного периода, скорость нарастания титра антител, общее количество синтезируемых антител, последовательность синтеза иммуноглобулинов различных классов. Клеточные механизмы первичного и вторичного иммунного ответа, как будет показано ниже, также отличаются.

Первичный иммунный ответ. 1) Биосинтез антител начинается не сразу после контакта с антигеном, а после некоторого латентного периода, продолжающегося 3—5 дней. В течение этого периода происходит процесс распознавания антигена и формирования клеток, которые способны синтезировать антитела к нему; 2) скорость синтеза антител относительно невелика; 3) титры синтезируемых антител не достигают максимальных значений; 4) первыми синтезируются антитела, относящиеся к иммуноглобулинам класса IgM, затем IgG. Позже всех появляются, да и то не во всех случаях, IgA и IgE.

Вторичный иммунный ответ. 1) Латентный период очень непродолжитель¬ный, в пределах нескольких часов; 2) кривая, характеризующая скорость накопления антител, идет значительно круче вверх, чем при первичном ответе, и имеет логариф-мический характер; 3) титры антител достигают максимальных значений; 4) синте-зируются сразу антитела, относящиеся к классу IgG.

Вторичный иммунный ответ обусловлен формированием клеток иммунной памяти.

Далее иммунный ответ возможен в виде по одного из трех вариантов:

1) клеточный иммунный ответ;

2) гуморальный иммунный ответ;

3) иммунологическая толерантность.

Клеточный иммунный ответ – это функция T-лимфоцитов. Происходит образование эффекторных клеток – T-киллеров, способных уничтожать клетки, имеющие антигенную структуру путем прямой цитотоксичности и путем синтеза лимфокинов, которые участвуют в процессах взаимодействия клеток (макрофагов, T-клеток, B-клеток) при иммунном ответе.

Гуморальный иммунитет – это функция B-клеток. Т-хелперы, получившие антигенную информацию, передают ее В-лимфоцитам. В-лимфоциты формируют клон антителопродуцирующих клеток. При этом происходит преобразование B-клеток в плазматические клетки, секретирующие иммуноглобулины (антитела), которые имеют специфическую активность против внедрившегося антигена.

Образующиеся антитела вступают во взаимодействие с антигеном с образованием комплекса АГ – АТ, который запускает в действие неспецифические механизмы защитной реакции. Эти комплексы активируют систему комплемента. Взаимодействие комплекса АГ – АТ с тучными клетками приводит к дегрануляции и выделению медиаторов воспаления – гистамина и серотонина.

При низкой дозе антигена развивается иммунологическая толерантность. При этом антиген распознается, но в результате этого не происходит ни продукции клеток, ни развития гуморального иммунного ответа.

Иммунный ответ характеризуется:

1) специфичностью (реактивность направлена только на определенный агент, который называется антигеном);

2) потенцированием (способностью производить усиленный ответ при постоянном поступлении в организм одного и того же антигена);

3) иммунологической памятью (способностью распознавать и производить усиленный ответ против того же самого антигена при повторном его попадании в организм, даже если первое и последующие попадания происходят через большие промежутки времени).

99. Моноклональные антитела — антитела, синтезируемые и секретируемые одним клоном антителообразующих клеток, т. е. клеток, генетически идентичных, происходящих из одного и того же зрелого В-лимфоцита. Они распознают только один антиген и взаимодействуют только с ним. В связи с этим значительно повышается и специфичность всех иммунологических реакций, протекающих с участием моноклональных антител.

Процесс получения моноклональных антител был изобретѐн Жоржем Кѐлером и Сезаром Мильштейном в 1975 годах.[1] За это изобретение в 1984 году они получили Нобелевскую премию по физиологии. Идея состояла в том, чтобы взять линию миеломных клеток, которые потеряли способность синтезировать свои собственные антитела и слить такую клетку с нормальным B-лимфоцитом, синтезирующим антитела, с тем, чтобы после слияния отобрать образовавшиеся гибридные клетки, синтезирующие нужное антитело. Эта идея была успешно реализована и уже к началу 1980-х годов началось коммерческое получение различных гибридом и очистка антител против заданных антигенов. Однако, так как лимфоциты были мышиные и синтезировали мышиный иммуноглобулин, введение таких моноклональных антител человеку вызывало иммунную реакцию отторжения.

Моноклональные антитела используют для исследования структуры и функций разных частей молекул, а также различных типов клеток, например деталей строения рецепторов Т- и В-лимфоцитов.

100. Поскольку вирусы не растут на искусственных питательных средах, а размножаются только внутриклеточно, нужно было найти простые и общедоступные методы их культивирования.

Для выделения изолированных, но жизнеспособных клеток из разрушенных тканей использовали обработку их слабым раствором трипсина, разрушающего межклеточные мостики. Для культивирования клеток были предложены различные среды, содержащие все необходимые для размножения клеток питательные вещества (аминокислоты, основания, витамины и др.), минеральные соли, имеющие оптимальную рН и т. д. К питательным средам добавляли индикатор, по изменению цвета которого можно было судить о метаболизме клеток и их размножении. Для подавления возможного роста бактерий вируссодержащий материал перед посевом его в культуры клеток обрабатывают антибиотиками.

Основной недостаток первично-трипсинизированных клеток заключается в том, что после нескольких пересевов они перестают размножаться. Поэтому предпочтением стали пользоваться культуры таких клеток, которые способны размножаться in vitro бесконечно долго. Такие перевиваемые культуры клеток получают из опухолевых тканей или из мутантных клеток с полиплоидным набором хромосом. Однако опухолевые клетки нельзя применять для получения вакцин. Для этих целей используют только культуры таких клеток, которые не содержат никаких контаминантных вирусов и не обладают злокачественностью. Лучше всего этим требованиям отвечают культуры диплоидных клеток. «Штаммом диплоидных клеток называется морфологически однородная культура клеток, стабилизированная в процессе культивирования in vitro, имеющая ограниченный срок жизни, характеризующаяся тремя фазами роста (стабилизации, активного роста и старения), сохраняющая в процессе пассирования кариотип, свойственный исходной ткани, свободная от контаминантов и не обладающая онкогенной активностью. Как оказалось, вирусы могут размножаться не только в культурах клеток, образующих монослой на стекле пробирок, но и в суспензиях живых клеток.

Таким образом, для выделения чистых культур вирусов в настоящее время используют чаще всего заражение куриных эмбрионов, первично-трипсинизированных и перевиваемых культур клеток.

Широкое распространение получил предложенный в 1952 г. Р. Дюльбекко метод бляшек (негативных колоний), позволяющий производить количественное определение вирусов. Для выделения вирусов монослой клеток после удаления питательной среды заражают вируссодержащим материалом и покрывают слоем агара, содержащего индикатор нейтральный красный. Чашки инкубируют при температуре 37 °С. Через 48—96 ч выявляются пятна-бляшки. Они имеют диаметр 1—3 мм и выглядят неокрашенными на розовом фоне. Пятна возникают за счет цитопатического действия вируса. Этот метод позволяет непосредственно обнаруживать рост вирусов.

Различают два механизма гибели клеток, вызываемой вирусами, — некроз и апоптоз. Некроз происходит из-за необратимых нарушений целостности клеточных мембран, апоптоз — вследствие фрагментации ядерной ДНК под действием клеточной эндонуклеазы. Установлено, что апоптоз играет важную роль в патогенезе инфекций, вызываемых рядом РНК-содержащих вирусов (ретровирусов, миксовирусов, альфавирусов, буньявирусов, пикорнавирусов, флавивирусов).

О росте вирусов в клетках можно судить также по поведению индикатора, добавляемого к питательной среде. Если клетки активно осуществляют метаболизм, рН среды сдвигается в кислую сторону, и среда окрашивается в желтый цвет. В случае размножения вируса клетки погибают, рН среды мало меняется, и она сохраняет первоначальный (малиновый) цвет или (при нейтральной рН) приобретает оранжевый. Некоторые вирусы, в

частности вирус гриппа, обладают особыми рецепторами (гемагглютининами), с помощью которых они адсорбируются на эритроцитах и вызывают их склеивание (гемагглютинацию). Такие вирусы легко обнаруживаются с помощью реакции гемагглютинации или. Кроме того, для обнаружения вируса в культурах клеток могут быть использованы различные серологические реакции: преципитации в агаре, иммунофлуоресценции, РСК, ИФМ и пр., а также метод ДНК-зонда и заражение животных, чувствительных к данному вирусу.

Методы идентификации (типирования) вирусов

Определение типа вируса (его идентификация) основано на нейтрализации биологической активности вируса с помощью типоспецифических сывороток. Конечный результат ее может быть установлен на основании следующих признаков:

1) нейтрализация цитопатического действия;

2) нейтрализация реакции гемадсорбции;

3) изменение проявления цветной пробы;

4) задержка (торможение) реакции гемагглютинации;

5) нейтрализация в опытах на животных.

Кроме того, для идентификации вирусов применяют методы иммунофлуоресценции, ДНК-ДНК-(РНК-РНК)-гибридизации, а также ПЦР.

101В России существует Национальный календарь профилактических прививок - это схема  обязательных  прививок, осуществляемых  в  определённом возрасте детям  и  взрослым,  которая  позволяет наиболее  полноценно  защитить  человека  от  инфекций.  В области  иммунопрофилактики государство гарантирует:

доступность для граждан профилактических прививок;

бесплатное проведение профилактических прививок, включённых  в национальный  календарь.

Граждане имеют право:

на получение от  медицинских  работников  полной  и  объективной  информации  и  о  необходимости  профилактических  прививок;

выбор  государственных  муниципальных  или  частных  организаций  здравоохранения

 

Отсутствие профилактических  прививок  влечёт: - запрет  для  граждан  на  выезд  в  страны, пребывание  в  которых  в  соответствии  с  международными  договорами  РФ требует  конкретных  профилактических  прививок; - временный  отказ  в  приёме  граждан  в  образовательные  и  оздоровительные  учреждения  в  случае  возникновения  массовых  инфекционных  заболеваний  или  при  угрозе  возникновения  эпидемии.      Важно знать, что в зависимости от инфекции для выработки стойкого иммунитета может потребоваться несколько прививок. Кроме того многие прививки имеют продолжение схем вакцинации после 6 лет. Ребенок получит стойкий иммунитет к инфекции, только если пройдет полный цикл вакцинации. Только вакцинация, проведенная по полной схеме, сможет обеспечить выработку качественной защиты против инфекции!

 

НАЦИОНАЛЬНЫЙ КАЛЕНДАРЬ ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ ПРИВИВОК (v internete)

№ 102 Возбудитель амебиаза. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическое лечение.

Таксономия: тип Sarcomastigophorae, подтип Sarcodina, класс Lobosia, отряд Amoebida.

Морфология: Различают две стадии раз­вития возбудителя: вегетативную и цистную. Вегетативная стадия имеет не­сколько форм: большая вегетативная (ткане­вая), малая вегетативная; предцистная форма, сходная с просветной, образующая цисты.

Циста (покоящаяся стадия) имеет оваль­ную форму. Зрелая циста содержит 4 ядра. Просветная форма малоподвижна, обитает в просвете верхнего отдела толстой кишки как безвредный ком­менсал, питаясь бактериями и детритом.

Большая вегетативная форма образуется, при определенных условиях, из малой вегетативной формы. Она наиболее крупная, образует псевдоподии и обладает движением. Может фаго­цитировать эритроциты. Обнаруживается в све­жих испражнениях при амебиазе.

Культивирование: на питательных средах, бо­гатых питательными веществами.

Резистентность: Вне организма быстро (за 30 мин) погибают вегетативные формы воз­будителя. Цисты устойчивы в окружающей среде, сохраняются в фекалиях и воде. В продуктах питания, на овощах и фруктах цисты сохраняются в течение нескольких дней. При кипячении погибают.

Эпидемиология: Амебиаз — антропо­нозная болезнь; источник инвазии - человек. Механизм передачи — фекально-оральный. Заражение происходит при занесении цист с продуктами питания, водой, через предметы домашнего обихода.

Патогенез и клиника: Цисты, попавшие в кишечник, и образовавшиеся затем из них просветные формы амеб могут обитать в тол­стой кишке, не вызывая заболевания. При снижении резистентности организма амебы внедряются в стенку кишки и размножаются. Развивается кишечный амебиаз.

Трофозоиты тканевой формы подвижны за счет формирования псевдоподий. Они проникают в стенку толстой кишки, вызывая некроз; способны фагоцитировать эритроциты; могут обнаруживаться в фекалиях человека. При некрозе обра­зуются язвы. Клинически кишечный амебиаз проявляется в виде частого жидкого стула с кровью, сопровождающегося лихорадкой и дегидратацией. В испражнениях обнаруживают гной и слизь, иногда с кровью.

Амебы с током крови могут попадать в печень, легкие, головной мозг, в результа­те чего развивается внекишечный амебиаз.

Иммунитет: Нестойкий, активируется пре­имущественно клеточное звено.

Микробиологическая диагностика. Основ­ным методом является микроскопическое ис­следование испражнений больного, а также содержимого абсцессов внутренних органов. Мазки окрашивают раствором Люголя или гематоксилином. Серологические исследова­ния (РНГА, ИФА, РСК): наиболее высо­кий титр антител в сыворотке крови выявля­ют при внекишечном амебиазе.

Лечение: Применяют метронидазол, фурамид.

Профилактика: выявление и ле­чение цистовыделителей и носителей амеб, проведение общесанитарных мероприятий.

арных мероприятий.

№ 102 Возбудители малярии. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Лечение.

Таксономия: тип Apicomplexa, класс Sporozoa, отряд Eucoccidiida, подотряд Haemosporina и виды: Plasmodium vivax, Plasmodium ovale, Plasmodium malariae, Plasmodium falciparum..

Характеристика возбудителя. Жизненный цикл плазмодиев происходит со сменой хо­зяев: в комаре рода Anopheles (окончательном хозяине) осуществляется половое размноже­ние (образование спорозоидов), а в организме чело­века (промежуточном хозяине) происходит бесполое размножение — шизогония, при которой образуются мелкие клетки — мерозоиты.

После укуса спорозоиты из слюнных желез комара попадают в кровь и далее в гепатоциты, где совершается первый этап размножения — тка­невая шизогония. При этом в гепатоцитах спорозоит переходит в стадию тканевого шизонта (делящаяся клетка). Тканевой шизонт делится с образованием тканевых мерозоитов, поступающих в кровь. Мерозоиты проникают в эритро­циты, в которых совершается несколько цик­лов шизогонии. Из мерозоита в эритроците развиваются трофозоиты — расту­щие формы паразита: кольцевидный трофозоит юный, полувзрослый, взрослый трофозоит. Взрослый трофозоит превращается в много­ядерный шизонт. В эритроцитах мерозоиты дают также начало образованию половых незрелых форм — мужских и женских гамет (гамонтов), которые способны инфицировать ко­маров при кровососании больного малярией.

P. vivax — возбудитель трехдневной маля­рии. В эритроците, при окраске мазка из кро­ви по Романовскому—Гимзе, трофозоит имеет форму кольца — крупная вакуоль в центре с голубой цитоплазмой с рубиново-красным ядром.

P. malariae — возбудитель четырехднев­ной малярии. В эритроците выявляется один трофозоит в ста­дии кольца.

P.falciparum — возбудитель тропической ма­лярии, наличие юных форм па­разита в виде мелких колец в эритроците.

P. ovate — возбудитель трехдневной малярии, паразит в стадии кольца в эритроците имеет более круп­ное ядро, чем P. vivax.

Эпидемиология: источник - человек. Механизм заражения – трансмиссивный, через укус комара.

Патогенез и клиника: Инкубационный пери­од от недели до года. Клинические проявления обусловлены эритроцитарной шизогонией. Малярии свойственно присту­пообразное течение: озноб с сильной голо­вной болью сменяется подъемом температуры до 40С, после чего происходит быстрое снижение температуры с обильным потоотделением и выраженной слабостью. Малярийный приступ вызван выбросом пирогенных веществ из разрушенных эритро­цитов. Приступы приводят к поражению печени, селезенки и почек.

Иммунитет: нестойкий видоспецифический, стадиоспецифический, нестерильный иммунитет.

Микробиологическая диагностика основана на микроскопичес­ком исследовании препаратов крови, окрашенных по Романовскому—Гимзе и обнаруже­нии различных форм возбудителя (красное ядро, голубая цитоплазма). Для обнаружения ДНК паразита в крови ис­пользуют ДНК-гибридизацию и ПЦР В сероло­гическом методе применяют РИФ, РПГА, ИФА.

Лечение: Противомалярийные препараты (хинин, мефлохин, хлорохин). Различают пре­параты шизонтоцидного, гамонтотропного и спорозоитотропного действия.

Профилактика: лечение больных малярией и паразитоносителей, уничтожение переносчиков возбудителя — комаров. Разрабатываются вакцины на основе антигенов, полученных генно-инженерным методом (антиспорозоитная антимерозоитная, антигамонтная).

103.

Кандидозом или молочницей называют заболевание, при котором слизистые оболочки и кожные покровы поражаются дрожжеподобным грибком рода Candida. Эти микроорганизмы относят к условно-патогенной микрофлоре, то есть в небольшом количестве постоянно населяют кожу, слизистые оболочки ротовой полости, половых органов здоровых людей, а их рост сдерживается иммунитетом организма. При его ослаблении начинается бурное размножение грибка, что приводит к возникновению заболевания.

Наиболее часто встречаемые формы кандидоза –вагинальная и оральная.

• Вагинальный кандидоз - женская форма, причем заболевание может возникнуть практически в любом возрасте.

• Оральный кандидоз, как правило, встречается у грудных детей, чаще всего – у новорожденных.

Кандидоз встречается и у мужчин, чаще всего, после незащищенного полового акта.