25. Аллергия как форма иммунного ответа. Классификация аллергических ре­акций.

Аллергия – состояние повышенной чувствительности к повторному введению АГ (аллергена), в результате неадекватной реакции иммунной системы.

К аллергическим реакциям относят 2 типа реагирования на чужеродное в-во: Гиперчувствительность немедленного типа (ГНТ) и гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ). К ГНТ относят аллергические реакции, проявляющиеся уже через 20-30 мин. После повторной встречи с АГ, а к ГЗТ – реакции, возникающие через 6-8 ч. и позже. Механизм ГНТ связан с выработкой АТ, а ГЗТ – с клеточными реакциями.

ГНТ проявляется в неск. клинических формах: крапивница, отёк Квинке, вазомоторный ринит, аллергический конъюнктивит, сенная лихорадка, бронхиальная астма, сывороточная болезнь, анафилактический шок (в т.ч. лекарственный).

Механизм развития ГНТ:

АГ, вызывающий ГНТ – аллерген.

Первая доза – сенсибилизирующая

Вторая доза – разрешающая.

Главный эффектор IgE

• Иммунологическая стадия

• Патохимическая стадия

• Патофизическая стадия.

К ГЗТ относятся следующие формы проявления: туберкулиновая реакция, замедленная аллергия к белкам, контактная аллергия.

В настоящее время придерживаются классификации аллергических реакций по Джеллу и Кумбсу, выделяя 5 типов:

I тип Анафилактический: Выработка Ig E цитотропных АТ, их фиксация на тучных клетках и базофилах; реакция АГ-АТ с высвобождением медиаторов типа гистамина из этих клеток. (Атопическая бронхиальная астма, ринит, анафилактический шок.

II тип Цитотоксический: Выработка Ig G против АГ, входящих в состав клеточных мембран, цитолиз вследствие реакции АГ-АТ через активацию комплемента. (Цитотоксические реакции при лекарственной аллергии, аутосенсибилизация к АГ щитовидной железы, базальных мембран почек, кожи.

III тип Иммунокомплексный: Выработка преципитирующих АТ, избыток АГ, патогенетические реакции, инициированные иммунными комплексами через активацию комплемента и лейкоцитов. (Сывороточная болезнь, аутоиммунные заболевания (коллагенозы), осложнения инфекционных заболеваний).

IV тип Клеточный (ГЗТ): Накопление сенсибилизированных Т-лимфоцитов, реакция между АГ и сенсибилизированными Т-лимфоцитами с их активацией, выработкой лимфокинов и цитотоксические реакции при участии макрофагов. (Аллергические явления при инфекционных заболеваниях и аутоиммунных заболеваниях, контактная аллергия (лекарственная).

V тип реакции – иммунные реакции, осуществляющие активацию или ингибирование физиологических функций клеток, обусловлены действием АТ к рецепторам клеток, например гормонов щитовидной железы.

26. Реакции иммунной сыворотки: агглютинации, преципитации, лизиса .

Агглютинация (лат. agglutinatio — склеивание) - склеивание антигеннесущих корпускулярных частиц (цельные клетки, частицы латекса и др.) молекулами специфических антител в присутствии электролитов, которое закан­чивается образованием видимых невооруженным глазом хлопьев или осадка (агглютината). Характер осадка зависит от природы антигена: жгутиковые бактерии дают крупнохлопьевидный осадок, безжгутиковые и бескапсульные — мелкозер­нистый, капсульные — тяжистый. Различают агглютинацию прямую, при кото­рой во взаимодействии со специфическими антителами непосредственно участву­ют собственные антигены бактериальной или любой другой клетки, например эритроцитов; и непрямую, или пассивную, при которой бактериальные клетки или эритроциты, или частицы латекса являются носителями не собственных, а сорбированных на них чужих антигенов (или антител) для выявления специ­фических к ним антител (или антигенов). В реакции агглютинации участвуют главным образом антитела, относящиеся к классам IgG и IgM. Она протекает в две фазы: вначале происходит специфическое взаимодействие активного цент­ра антител с детерминантом антигена, эта стадия может происходить в отсут­ствие электролитов и не сопровождается видимыми изменениями реагирующей си­стемы. Для второй стадии — образования агглютината — необходимо наличие электролитов, которые снижают электрический заряд комплексов антиген + ан­титело и ускоряют процесс их склеивания. Эта фаза заканчивается образованием агглютината.

Реакции агглютинации ставят либо на стеклянных, либо на гладких картонных пластинках, либо в стерильных агглютинационных пробирках. Достоинством реакции агглютинации на стекле является простота ее постановки и то, что она протекает несколько ми­нут или даже секунд, так как оба компонента в ней используются в концентриро­ванном виде. Развернутая реакция агглютинации в пробирках дает более точные результаты, ибо она позволяет определить количественное содержание антител в сыворотке (установить ее титр) и при необходимости зарегистрировать факт нарастания титра антител. Для поста­новки реакции в агглютинационные пробирки вносят определенным образом разведенную 0,85 % раствором NaCl сыворотку и равный объем (обычно 0,5 мл) суспензии стандартного диагностикума, содержаще­го в 1 мл 1 млрд бактерий. Учет результатов реакции агглютинации производят предварительно через 2 ч инкубации пробирок при температуре 37 °С и оконча­тельно через 20—24 ч по двум признакам: наличию и величине осадка и степени прозрачности надосадочной жидкости.

Реакция преципитации и ее варианты

Реакции агглютинации и преципитации очень близки по своей сути. Различия между ними зависят главным образом от величины частиц антигена. Преципитаци­ей называют процесс, когда происходит агрегация антител с растворимыми антиге­нами; если же антиген представлен корпускулами, специфическая агрегация таких антигенов описывается как агглютинация.

Появление преципитата при реакции антиген—антитело определяется не только возникновением решетки, образуемой ее участниками, но и особой ро­лью Fc-фрагмента иммуноглобулина, изменение конформации которого приво­дит к утрате этим комплексом растворимости в солевых растворах. В связи с этим в реакции преципитации используют неразведенную или слабо разведен­ную сыворотку.

Для постановки реакции преципитации необходимы: антитела — испытуемая сы­воротка больного или иммунная диагностическая сыворотка (при идентификации выделенных микробов); антиген — экстрагированный гаптен или полный гаптен со­ответствующих микроорганизмов; физиологический раствор как источник электро­литов. Существует множество модификаций этой реакции, которые подразделяют на две группы: преципитация в жидкой среде (реакция флоккуляции и реакция коль- цепреципитации) и преципитация в геле.

Реакция флоккуляции представляет собой преципитацию, при которой рас­творы антигенов и антител смешивают в пробирке. Учет реакции производят с по­мощью измерения на фотоэлектроколориметре мутности получаемой системы, что позволяет определить концентрацию исследуемого антигена.

Чаще применяется реакция кольцепреципитации. Для ее постановки в тонкие преципитационные пробирки наливают сначала неразведенную преципитирующую сыворотку и сверху на нее наслаивают, не до­пуская перемешивания, раствор антигена. В случае гомологичности антител и ан­тигена на границе между этими растворами быстро, через 3—10 мин, появляется кольцо преципитата

Реакция преципитации в геле позволяет выявить число индиви­дуальных антигенов в исследуемой жидкости и провести анализ их антигенного родства.Для постановки реакции по Оухтерло­ню используют 1 %-ный агар, приготов­ленный на физиологическом растворе, ко­торый разливают в чашки Петри слоем 0,5 см. После застывания в пластинке агара вырезают луночки диаметром 5—6 мм — одна в центре чашки, 4—5 — по окружно­сти на расстоянии 1—2 см от центральной. В центральную луночку наливают диагнос­тическую преципитирующую сыворотку, а в периферические — раствор гомологич­ного и сравниваемых с ним антигенов. Учет результатов проводят через 24, 48 и 72 ч инкубации при комнатной темпера­туре. Антитела и антигены диффундируют навстречу друг другу, и в участках, где со­здаются их эквивалентные концентрации, образуются дугообразные полосы преципитации. Если полосы преципитации, иду­щие от двух соседних луночек, сливаются, это указывает на наличие нескольких ан­тигенных компонентов в исследуемой жидкости. Реакцию встречной диффузии по Оухтерлоню часто применяют для определения токсигенности бактерий, например дифтерийных.

Реакции лизиса.

Существует 2 типа реакции лизиса:

1.Реакция бактериолиза. Используется для серологической диагностики холеры. Феномен бактериолиза легко удается наблюдать in vitro. Исследуемую сыворотку наносят в последовательном двукратном разведении каплями на поверхность пита­тельной среды, на которую предварительно засевают культуру вибриона. Чашку с посевами инкубируют при температуре 37 С в течение 18—20 ч. Под влиянием имеющихся в сыворотке вибриоцидных антител и комплемента холерные вибрионы разрушаются (лизируются), и в местах нанесения капель образуются стерильные пятна. Тит­ром вибриоцидных антител считается максимальное разведение сыворотки, при ко­тором она еще вызывает отчетливый лизис бактерий.

2.Реакция гемолиза. Литическое действие иммунной сыворотки в присутствии комплемента особенно четко проявляется в отношении эритроцитов. Если кролика иммунизировать эритроцитами другого вида животных (барана), кроличья сыво­ротка приобретает специфическую гемолитическую активность, т. е. способность вызывать гемолиз эритроцитов, использованных для иммунизации. Этот эффект аб­солютно зависим от комплемента. Инактивация последнего путем прогревания сы­воротки при температуре 56 °С приводит к утрате ею гемолитической активности. Таким образом, наличие или отсутствие активного комплемента в гемолитической сыворотке очень четко выявляется по результатам ее взаимодействия с гомологич­ными эритроцитами: при наличии комплемента — гемолиз, образование «лаковой крови»; при его отсутствии — гемагглютинация, эритроциты выпадают на дно про­бирки, образуя осадок в виде зонтика, жидкость бесцветна.