2.2.2 Метод збагачення

У випадку відсутності мікобактерій при прямому мікроскопічному дослідженні та при наявності клінічних ознак туберкульозу застосовують різні методи обробки досліджуваного матеріалу з метою концентрації збудника – методи збагачення.

Наводимо найбільш поширену та найменш трудомістку методику збагачення досліджуваного матеріалу.

Кип’ятіння з содовим розчином

Харкотиння хворого збирають у кишенькову плювальницю в кількості 10 – 20 мл. Туди додають рівний об’єм стерильного 5,0 % розчину харчової соди (бікарбонату натрію), ставлять на водяну баню і кип’ятять протягом 45 хвилин з моменту закипання води. Далі після охолодження вміст виливають в центрифужні пробірки, центрифугують при 3500 об/хв. протягом 25 – 30 хвилин, надосадову рідину зливають, а з осаду роблять тонкі мазки, фіксують їх, фарбують за Цілем-Нільсеном і мікроскопують під імерсійною системою світлового мікроскопу.

Кип’ятіння з содовим розчином широко використовується в даний час, завдяки його простоті, ефективності, доступності та безпечності.

Оцінка результатів світлової мікроскопії.

Для запобігання отримання хибнопозитивних результатів при проведенні бактеріоскопії необхідно:

- імерсійне масло наносити на скельце піпеткою, не торкаючись поверхні мазка;

- об’єктив не повинен торкатися поверхні мазка, а легко стикатися з верхнім меніском імерсійного масла.

Перегляд мазків треба робити за певною системою, це вимагає стандартизації, що гарантує перегляд найбільш репрезентативних полів у мазку. Для того, щоб переконатися в однократності проглядання полів зору, необхідно дотримуватися визначеного порядоку і керуватися наступними рекомендаціями:

- перегляд мазків, забарвлених за Цілем-Нільсеном, завжди проводиться під 100 кратним об'єктивом з імерсією;

- обов’язково включати позитивний і негативний контролі. Позитивний контроль гарантує придатність розчинів до фарбування і правильність методу. Негативний контроль підтверджує відсутність у розчинах і барвниках кислотостійких артефактів;

- техніка перегляду мазка: мазок проглядається кілька разів по довжині зигзаго- подібно;

- мазок можна кваліфікувати як негативний після перегляду не менше 300 полів зору. У досвідченого мікроскопіста на цю роботу піде 15 хвилин. У мазку площею 1,0 х 2,0 см кількість мікроскопічних полів зору від краю до краю буде відповідати 100. У випадку, якщо мазок явно позитивний, немає необхідності переглядати весь мазок і перегляд декількох полів (20-50) достатній для оцінки його як позитивного.

Мікроскопічне дослідження повинне показати, чи присутні в мазку кислотостійкі палички, і, якщо присутні, необхідно дати їх кількісну оцінку в полі зору. При прямій бактеріоскопії у повноцінному полі зору повинен бути присутнім один з наступних елементів бронхіального секрету: лейкоцити, еластичні волокна і миготливий епітелій. Після збагачення цих елементів немає, бо вони зникають під впливом обробки матеріалу. Результати повинні бути представлені в кількісному вираженні. При фарбуванні мазків за методом Ціля-Нільсена рекомендується наступний порядок видачі результатів:

Оцінка результатів бактеріоскопії при забарвленні за Цілем-Нільсеном

Кількість КСП паличок у мазку	Кількість полів зору	Результат	Оцінка ступеня обсіменіння та форма відповіді
Відсутні	300	Негативний	КСП не виявлене на 300 п/зору
1 - 3	300	Негативний	КСП не виявлене на 300 п/зору
4 - 9	100	Позитивний (недостатня кількість)	Указати точне число виявлених КСП (4-9 на 100 п/зору)
10 - 99	100	Позитивний	1+ (від 10 до 99 КСП на 100 п/зору)
1 - 10	В полі зору	Позитивний	2+ (1-10 КСП у п/зору в 50 п/зору)
Більше 10	В полі зору	Позитивний	3+ (більш 10 у п/зору в 20 п/зору)

Примітки: КСП – кислостійкі палички; п/зору – поле зору.