5.5.1.1 Схеми розведення антимікобактеріальних препаратів для визначення мік

Iзонiазид

1-е розведення – 10,0 мг/мл: наважку 100,0 мг препарату заливають 1,0 мл етилового спирту (для дезинфекції), або беруть 1,0 мл 10,0 % розчину, що також містить 100,0 мг ізоніазиду + 9,0 мл води.

2-е розведення – 1,0 мг/мл (1000,0 мкг/мл): 1,0 мл 1-го розведення + 9,0 мл води.

3-є розведення – 100,0 мкг/мл: 1,0 мл 2-го розведення + 9,0 мл води.

4-е розведення – 10,0 мкг/мл: 1,0 мл 3-го розведення + 9,0 мл води.

5-е розведення (робоче) – 0,4 мкг/мл: 0,4 мл 4-го розведення (4,0 мкг) + 9,6 мл води.

Далі роблять серійні розведення препарату в середовищі Проскауера-Бека, що містить 10,0 % конячої сироватки, заздалегідь розлите в ряд пробірок по 3,0 мл. Тобто із 5-го (робочого) розведення беруть 3,0 мл і вносять в 3,0 мл середовища, отримуючи концентрацію 0,2 мкг/мл, і т.д. – до концентрації 0,003 мкг/мл (сьома пробірка). Восьма пробірка препарату не містить і служить контролем.

Рифампіцин (рифадин, мікобутин)

1-е розведення – 15,0 мг/мл: капсулу, що містить 150,0 мг препарату, висипають в стерильну пробірку + 1,0 мл етилового спирту + 9,0 мл води.

2-е розведення – 1,5 мг/мл (1500 мкг/мл): 1,0 мл 1-го розведення + 9,0 мл води.

3-є розведення – 150,0 мкг/мл: 1,0 мл 2-го розведення + 9,0 мл води.

4-е розведення (робоче) – 15,0 мкг/мл: 1,0 мл 3-го розведення + 9,0 мл води.

Беруть 2,0 мл робочого розведення (4-го) додають 4,0 мл середовища Проскауера-Бека, отримуючи концентрацію 5,0 мкг/мл, далі – серійні розведення в середовищі до 0,03 мкг/мл. Остання пробірка без препарату (контроль).

Етамбутол

1-е розведення – 20,0 мг/мл: таблетку етамбутолу, що містить 400,0 мг препарату, ретельно розтирають в ступці + 1,0 мл етилового спирту + 19,0 мл води.

2-е розведення – 2,0 мг/мл (2000 мкг/мл): 1,0 мл 1-го розведення + 9,0 мл води.

3-є розведення – 200,0 мкг/мл: 1,0 мл 2-го розведення + 9,0 мл води.

4-е розведення (робоче) – 20,0 мкг/мл: 1,0 мл 3-го розведення + 9,0 мл води.

Беруть 3,0 мл робочого (4-го) розведення і додають 3,0 мл середовища Проскауера-Бека, в якому створюється концентрація препарату 10,0 мкг/мл. Далі – ряд серійних розведень у середовищі до 0,07 мкг/мл. Остання пробірка без препарату (контроль).

Етіонамiд (або протіонамід)

1-е розведення – 25,0 мг/мл: таблетку, що містить 250,0 мг препарату, ретельно розтирають в стерильній ступці + 1,0 мл етилового спирту + 9,0 мл води.

2-е розведення – 2,5 мг/мл (2500 мкг/мл): 1,0 мл 1-го розведення + 9,0 мл води.

3-є розведення – 250,0 мкг/мл: 1,0 мл 2-го розведення + 9,0 мл води.

4-е розведення – 25,0 мкг/мл: 1,0 мл 3-го розведення + 9,0 мл води.

5-е розведення (робоче) – 5,0 мкг/мл: 1,0 мл 4-го розведення + 4,0 мл води.

Далі роблять серійні розведення в середовищі заздалегідь розлитому по 3,0 мл, шляхом внесення 3,0 мл робочого (5-го) розведення. Отримують ряд пробірок, з концентрацією від 2,5 мкг/мл до 0,04 мкг/мл (у 7-й пробірці). Восьма пробірка - без препарату (контроль).

Канаміцин

Беруть ампулу канаміцину , що містить 500,0 мг в 2,0 мл (тобто 250,0 мг/мл).

1-е розведення – 25,0 мг/мл: 1,0 мл із ампули + 9,0 мл води.

2-е розведення – 2,5 мг/мл (2500 мкг/мл): 1,0 мл 1-го розведення + 9,0 мл води.

3-є розведення – 250,0 мкг/мл: 1,0 мл 2-го розведення + 9,0 мл води.

4-е розведення (робоче) – 25,0 мкг/мл: 1,0 мл 3-го розведення + 9,0 мл води.

Із 4-го (робочого) розведення, що має концентрацію 25,0 мкг/мл, беруть 1,0 мл, додають 4,0 мл середовища Проскауера-Бека, отримуючи концентрацію 5,0 мкг/мл, далі – серійні розведення в середовищі до 0,31 мкг/мл (5 пробірок). Шоста пробірка - без препарату (контроль).