5.1.2 Визначення стійкості мбт до антимікобактеріальних препаратів

методом пропорцій (метод Канетті)

Данний метод широко застосовується в усьому світі, є коректним, інформативним і точним.

Принцип методу полягає у виявленні пропорції між чутливими та стійкими особинами в популяції штаму МБТ, виділеному від хворого. Якщо кількість стійких особин до якогось антибактеріального препарату в популяції буде менше 1,0 %, такий штам вважається чутливим до даного препарату. Якщо стійкість особин в популяції більше 1,0 % - штам вважається стійким до даного препарату.

I Приготування розведень антимікобактеріальних препаратів

Для приготування розведень використовуються хімічно чисті (х/ч) субстанції препаратів. Субстанції розводять стерильною дистильованою водою, наважка яких перераховується згідно вказанному на етикетці коефіцієнту потенції для кожної хімічно чистої речовини.

Ізоніазид ( INH) (субстанція фірми Fatol-Arzneimittel)

	Розчин I:	концентрація		5000 мкг/ мл -
		50,0 мг INH - порошку розчинити в 10,0 мл води.
	Розчин II:	концентрація		100,0 мкг/ мл -
		2,0 мл розчину I + 98,0 мл води.
	Розчин III:	концентрація		10,0 мкг/ мл -
		5,0 мл розчину II + 45,0 мл води.
			Кінцева концентрація в середовищі Льовенштайна-Єнсена
Концентрація, мкг/мл			8,0		1,0	0,2		0,1
Середовище Льовенштайна-Єнсена, мл			450,0		90,0	450,0		90,0
Дистильована вода, мл			10,0		0	40,0		9,0
Розчин II, мл			40,0		0	0		0
Розчин III, мл			0		10,0	10,0		1,0

За рекомендаціями ВООЗ досліджуються концентрації 0,1 мкг/мл, 0,2 мкг/мл і 1,0 мкг/мл. “Критична” концентрація в середовищі - 0,2 мкг/мл відповідає невисокому ступеню стійкості.

Рифампіцин ( RMP) (субстанція фірми Fatol-Arzneimittel)

Рифампіцин-натрій, коефіцієнт поправки = 1,04 х/ч речовини

Розчин I:	концентрація	4000 мкг/ мл -
	62,4 мг RMP - порошку розчинити в 15,0 мл води.
Розчин II:	концентрація	400,0 мкг/ мл -
	10,0 мл розчину I + 90,0 мл води.
Розчин III:	концентрація	200,0 мкг/ мл -
	5,0 мл розчину II + 5,0 мл води.

	Кінцева концентрація в середовищі Льовенштайна-Єнсена
Концентрація, мкг/мл	40,0	20,0	10,0	1,0
Середовище Льовенштайна-Єнсена, мл	450,0	450,0	45,0	45,0
Дистильована вода, мл	10,0	30,0	0	2,5
Розчин II, мл	40,0	20,0	0	0
Розчин III, мл	0	0	5,0	2,5

За рекомендаціями ВООЗ досліджуються концентрації: 20,0 мкг/мл і 40,0 мкг/мл. “Критична” концентрація в середовищі 40,0 мкг/мл відповідає невисокому ступеню стійкості.

Стрептоміцин ( SM) (субстанція фірми SIGMA)

Дигідрострептоміцинсульфат, коефіцієнт поправки = 1,25 х/ч речовини

Розчин I:	концентрація	5000 мкг/мл -
	50,0 мг порошку розчинити в 8,0 мл води.
Розчин II:	концентрація	100,0 мкг/мл -
	2,0 мл розчину I + 98,0 мл води.
Розчин III:	концентрація	20,0 мкг/мл -
	2,0 мл розчину II + 18,0 мл води.

	Кінцева концентрація в середовищі Льовенштайна-Єнсена
Концентрація, мкг/мл	8,0	4,0	2,0	1,0	0,5
Середовище Льовенштайна-Єнсена, мл	450,0	450,0	45,0	45,0	45,0
Дистильована вода, мл	10,0	30,0	0	2,5	3,75
Розчин II, мл	40,0	20,0	0	0	0
Розчин III, мл	0	0	5,0	2,5	1,25

За рекомендаціями ВООЗ досліджуються концентрації: 4,0 мкг/мл і 8,0 мкг/мл. “Критична” концентрація в середовищі - 4,0 мкг/мл відповідає невисокому ступеню стійкості.

Етамбутол ( EMB) (субстанція фірми Fatol-Arzneimittel)

етамбутол-2НСl, коефіцієнт поправки = 1,36 х/ч речовини

Розчин I:	концентрація	1000 мкг/мл -
	136,0 мг EMB - порошку розчинити в 100,0 мл води.
Розчин II:	концентрація	20,0 мкг/мл -
	2,0 мл розчину I + 98,0 мл води.
Розчин III:	концентрація	5,0 мкг/мл -
	10,0 мл розчину II + 30,0 мл води.

	Кінцева концентрація в середовищі Льовенштайна-Єнсена
Концентрація, мкг/ мл	2,0	1,0	0,5
Середовище Льовенштайна-Єнсена, мл	450,0	450,0	40,0
Дистильована вода, мл	0	25,0	5,0
Розчин II, мл	50,0	25,0	0
Розчин III, мл	0	0	5,0

За рекомендаціями ВООЗ досліджуються концентрації: 1,0 мкг/мл; 2,0 мкг/мл.“Критична” концентрація в середовищі 2,0 мкг/мл відповідає невисокому ступеню стійкості.

Протіонамід ( PTH) (аналог етіонаміду)

(субстанція фірми Fatol-Arzneimittel)

Розчин I:	концентрація	4000 мкг/мл -
	40,0 мг PTH - порошку розчинити в 5,0 мл DMSO (диметилсульфоксид).
Розчин II:	концентрація	400,0 мкг/мл -
	10,0 мл розчину I + 90,0 мл води.
Розчин III:	концентрація	200,0 мкг/мл -
	10,0 мл розчину II + 10,0 мл води.

	Кінцева концентрація в середовищі Льовенштайна-Єнсена
Концентрація, мкг/мл	40,0	20,0	10,0	5,0
Середовище Льовенштайна-Єнсена, мл	450,0	450,0	45,0	45,0
Дистильована вода, мл	0	25,0	2,5	3,75
Розчин II, мл	50,0	25,0	0	0
Розчин III, мл	0	0	2,5	1,25

За рекомендаціями ВООЗ досліджуються концентрації 20,0 мкг/мл і 40,0 мкг/мл. “Критична” концентрація в середовищі - 20,0 мкг/мл відповідає невисокому ступеню стійкості.

Амід нікотинової кислоти (NSA) (аналог піразинаміду)

(субстанція фірми Fatol-Arzneimittel)

Розчин I:	концентрація	40 000 мкг/мл -
	2000 мг NSA - порошку розчинити в 50,0 мл води.
Розчин II:	концентрація	20 000 мкг/мл -
	25,0 мл розчину I + 25,0 мл води.
Розчин III:	концентрація	10 000 мкг/мл -
	25,0 мл розчину II + 25,0 мл води.

	Кінцева концентрація в середовищі Льовенштайна-Єнсена
Концентрація, г/л	4,0	2,0	1,0	0,5	0,25
Середовище Льовенштайна-Єнсена, мл	225,0	225,0	225,0	90,0	90,0
Дистильована вода, мл	0	0	0	5,0	7,5
Розчин I, мл	25,0	0	0	0	0
Розчин II, мл	0	25,0	0	0	0
Розчин III, мл	0	0	25,0	5,0	2,5

За рекомендаціями ВООЗ досліджуються концентрації: 1,0 г/л; 2,0 г/л і 4,0 г/л. “Критична” концентрація в середовищі 1,0 г/л відповідає невисокому ступеню стійкості.