Работа 1 . Выведение лейкоцитарной формулы

Исследование мазков производят под микроскопом с иммерсией, для чего используют объектив на 90 и иммерсионное масло.

В окрашенных мазках крови определяют величину, форму, характер окраски и структуру ядра, цитоплазмы и включений в нее, а также соотношение между различными нормами отдельных видов клеток крови. Просматривая мазок под микроскопом, можно разделить все лейкоциты по их морфологическому строению на 2 группы: незернистые и зернистые.

К незернистым лейкоцитам относятся лимфоциты и моноциты. Зернистые лейкоциты в зависимости от способности зерен, их протоплазмы воспринимать кислые и щелочные краски подразделяются на нейтрофилы, базофилы, эозинофилы (рис. 13, 14, 15).

Рис. 13. Форменные элементы крови крупного рогатого скота

.

Процентное соотношение между отдельными видами лейкоцитов называется лейкоцитарной формулой.

Под малым увеличением микроскопа мы видим сплошную массу серо-розового цвета эритроцитов и между ними фиолетово окрашенные клетки лейкоцитов. Под большим увеличением микроскопа отдельные виды лейкоцитов будут выглядеть следующим образом.

Рис. 14. Микроскопическая картина крови лошади.

Рис. 15. Микроскопическая картина крови птиц (уток).

Эозинофилы 1…4% - граница клетки не выражена, цитоплазма крупнозернистая, розово окрашенная. Характер ядра зависит от степени зрелости клетки: у зрелых форм оно сегментированное, у молодых - округлое, окрашенное в фиолетовый цвет.

Базофилы 1% - граница клетки не выражена, цитоплазма крупнозернистая, фиолетово окрашенная. У зрелых форм ядро полиморфное, плохо заметное, с неясными очертаниями, окрашено в слабо фиолетовый или фиолетовый цвет.

Нейтрофилы 70% - граница клетки хорошо выражена, цитоплазма мелкозернистая, фиолетово окрашенная. По степени зрелости , по строению ядра различают:

- юные 1% - ядро бобовидное или колбасовидное, неравномерно окрашенное, фиолетового цвета;

- палочкоядерные 3…5% - ядро вытянуто наподобие палочки, которая может быть изогнута в виде подковы, дужки, латинской буквы C, окрашено неравномерно в темно фиолетовый цвет;

- сегментоядерные 64% - ядро состоит из 2…5 сегментов, между которыми имеется тонкие перемычки, окрашено в темно фиолетовый цвет.

Лимфоциты 21…35% - по величине разделяются на малые, средние и большие. Ядро округлое, темно фиолетового цвета, по величине чуть больше или меньше эритроцитов. Цитоплазмы мало, в виде голубого кольца окружает ядро.

Моноциты 4…8% - самые крупные клетки. Ядро овальной, подковообразной, бобовидной формы, по величине в два эритроцита, неравномерно окрашено в слабо фиолетовый цвет с темно фиолетовыми пятнами («пятнистое»). Цитоплазмы много, серо дымчатого цвета, располагается в одну сторону от ядра.

Для подсчета лейкоцитарной формулы следует медленно двигать мазок под микроскопом и внимательно просматривать все встречающиеся лейкоциты (рис. 16).

Рис. 16. Схема передвижения препарата при подсчете лейкоцитов

На листке бумаги отмечают, к какому классу относится та или иная клетка.

Лейкоциты в мазке распределяются неравномерно: более тяжелые (базофилы и моноциты) располагаются по краю мазка, более легкие (лимфоциты) по середине. Поэтому обзор препарата следует вести в разных концах и в середине. Всего нужно определить таким путём 100 лейкоцитов. Полученный результат суммируют и получают соотношение различных форм белых кровяных меток для большей достоверности лучше просчитать 200 клеток и взять средние величины. Лейкоцитарная формула заносится в таблицу 16.

Таблица 16 Выведение лейкоцитарной формулы.

Вид лейкоцитов	Количество лейкоцитов
	Число клеток	Доля в %
Эозинофилы
Базофилы
Нейтрофилы: - юные - палочкоядерные - сегментоядерные
Лимфоциты
Моноциты
Общее количество	100	100

У молодых животных лейкоцитарная формула несколько иная.

Реакция кроветворной системы на действие различных факторов проявляется не только в увеличении числа лейкоцитов (главным образом нейтрофилов) в крови, но и в сдвиге лейкоцитарной формулы влево, т.е. в увеличении процента молодых (палочкоядерных) нейтрофилов за счет старых (сегменте ядерных).

ВОПРОСЫ:

1. Охарактеризуйте разные формы лейкоцитов.

2. Каковы видовые и возрастные особенности лейкоцитарной формулы?

3. Объясните значение лейкоцитарной формулы.

ЗАНЯТИЕ 10. ПРЕВРАЩЕНИЕ ПИЩИ В РОТОВОЙ ПОЛОСТИ. СЕКРЕТОРНАЯ ДЕЯТЕЛЬНОСТЬ СЛЮННЫХ ЖЕЛЕЗ У СОБАКИ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВЯЗКОСТИ СЛЮНЫ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ МУЦИНА В СЛЮНЕ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЩЕЛОЧНОСТИ СЛЮНЫ

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: 1. Ознакомиться с методикой павловского хронического эксперимента при изучении слюноотделения.

2. Исследовать зависимость секреторной деятельности желез от качества раздражителя.

3. Овладеть методиками определения вязкости слюны, наличия муцина в слюне и щелочности слюны.

РАБОТА №1. Секреторная деятельность слюнных желез у собаки

Слюнные железы собаки (околоушная, подчелюстная, подъязычная) переходят от состояния покоя к состоянию функциональной активности при действии пищевых или отвергаемых раздражителей. При этом количество и качество выделяемой слюны соответствует характеру раздражителя. Сильным механическим раздражителем является сухая, особенно мелкораздробленная пища. Поэтому на сухари выделяется больше слюны, чем на хлеб, а на мясной порошок - больше, чем на мясо. Отвергаемые животными вещества (песок, кислота, горечи) вызывают отделение большого количества жидкой слюны, бедной органическими веществами (отмывная слюна).

1. Выяснить: отделяется слюна непрерывно или только при приеме пищи.

2. Определить скрытый период слюноотделения и продолжительность реакции желез при скармливании пищевого раздражителя.

3. Выяснить одинаковое ли количество слюны отделяется при приеме различных кормов (хлеб, молоко, мясо, сухари).

4. Установить, возбуждаются ли слюнные железы при попадании в ротовую полость отвергаемых веществ (речной песок, 0,5%-ный раствор соляной кислоты).

5. Выяснить: возбуждаются ли слюнные железы по типу условного рефлекса, т.е. выделяется ли слюна на натуральные условные раздражители.

МЕТОДИКА.

Опыт проводится на собаках с хронической фистулой околоушной железы по Павлову-Глинскому (1895 г). Операция заключается в том, что проток железы отпрепаровывают от окружающих тканей и с кусочками слизистой оболочки выводят через сквозной прокол кожи щеки наружу. Слизистую оболочку с папиллой протока подшивают к краям кожной раны.

Фистульную собаку, не кормленную 16-18 часов, ставят в станок. К отверстию протока плотно приклеивают разогретой менделеевской замазкой стеклянную воронку. Успокаивают животное и убеждаются в отсутствии слюноотделения. Подвешивают к воронке при помощи пете­лек из мягкой проволоки небольшую градуированную пробирку. Для введения в ротовую полость собаки приготавливают пищевые и отвергаемые раздражители, перечисленные ниже (количества пищевых веществ выравнивают по содержанию в них сухого остатка).

ХОД ОПЫТА. Поочередно (с интервалом 3-5 мин) испытывать в течение 30 сек действие пищевых и отвергаемых раздражителей (придерживаться порядка, изложенного в таблице). Слюну собирать в течение 1,5 мин с момента введения вещества в ротовую полость. Пробирочки периодически менять, слюну сливать в цилиндр. Измерить количество слюны, выделенной на каждый из раздражителей, и записать полученные данные по форме, приведенной ниже в таблице 17.

Таблица 17

Раздражитель	Выделено слюны за 1,5 мин (мл) околоушн. жел.	Раздражитель	Выделено слюны за 1,0 мин (мл) Околоушн. жел.
Сухарный порошок - 40 г		Мясо сырое -120 г
Хлеб - 80 г		НCl 0, 2% р-р
Мясной порошок- 40 г		Песок кварцевый

Перечисленные раздражители по их влиянию на слюноотделение располагаются в следующем порядке (по мере убывания): песок, кислота, сухари, мясной порошок, хлеб, мясо (для околоушной железы) кислота, мясной порошок, песок, сухари, хлеб, мясо (для слизистых желез).

РАБОТА № 2. Определение вязкости слюны

Белки и соли, находящееся в слюне, повышают ее вязкость. Вязкость слюны определяется с помощью вискозиметра и выражает отношение времени истечения слюны через капиллярную трубку вискозиметра ко времени истечения через тот же капилляр визкозиметра и при той же температуре равного количества дистиллированной воды. Вязкость воды принимается за единицу.

ХОД ОПЫТА.

Насосать воду в вискозиметр до верхней метки. Определить с помощью секундомера время вытекания воды (до нижней метки). Проверить трижды. Точно таким же образом определить время вытекания слюны из вискозиметра. Время вытекания слюны разделить на время вытекания воды. Полученная величина характеризует удельную вязкость слюны. После определения капилляры промыть водой и просушить.

РАБОТА №3. Определение муцина в слюне

В слюне содержится сложный белок – муцин, который вырабатывается слизистыми и смешанными слюнными железами,

ХОД ОПЫТА.

Для определения наличия муцина возьмите в пробирку 1-2 мл слюны и добавьте к ней 0,5 мл воды, а затем 4-10 капель уксусной кислоты. Встряхните пробирку. В пробирке выпадет осадок белка муцина. Слюна теряет свой слизистый характер.