Работа 2. Получение плазмы, сыворотки, фибрина и дифибринированной крови

КРОВЬ - жидкая соединительная ткань, которая состоит из жидкой части - плазмы и находящихся в ней во взвешенном состоянии, форменных элементов - эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов.

Получение плазмы

Для получения плазмы кровь необходимо предохранить от свёртывания добавлением антикоагуляторов – веществ, препятствующих свертыванию крови (гепарин, лимонно - кислый натрий).

СТАБИЛИЗИРОВАННАЯ КРОВЬ - кровь, предохраненная от свертывания. В пробирку или стеклянный цилиндр с антикоагулятором выпустить по 10 мл крови из яремной вены животного. Закрыв сосуд пальцем или пробкой, несколько раз перевернуть его для перемешивания крови.

1 способ. Цилиндр поставить в термостат кровь лошади - на 1 час, крупного рогатого скота - на 24…48 часов.

2 способ. Пробирку с взятой кровью поставить в цен­трифугу. Центрифугировать при 3000 об/мин в течение 20…30 минут.

Убедиться, что при стоянии или центрифугировании кровь расслаивается на плазму и форменные элементы (рис. 3).

Рис. 3. Состав стабилизированной крови.

1 – плазма; 2 – слой лейкоцитов; 3 - слой эритроцитов.

Получение сыворотки

Если выпущенную в сосуд кровь не стабилизировать антикоагулятором, происходит ее свертывание и образуется сгусток, содержащий форменные элементы и выпавший в осадок белок фибриноген.

Сгусток постепенно уплотняется, стягивается и от него отделяется прозрачная желтоватого цвета жидкость – сыворотка (происходит процесс ретракции) (рис. 4).

Рис. 4. Ретракция кровяного сгустка.

1 - сыворотка крови; 2- сгусток крови.

СЫВОРОТКА - представляет собой плазму, лишенную белка фибриногена и других веществ, участвующих в свертывании крови.

1 способ. В пробирку или цилиндр без антикоагулятора выпустить 10 мл крови животного и поставить ее в термостат при 38°С на несколько часов. Образование кровяного сгустка и частич­ная ретракция, т.е. его стягивание и самопроизвольное отделение сыворотки наступает у лошадей через 1…3часа, а полное отделение сгустка через 12…18 часов. У крупного рогатого скота ретракция протекает значительно медленнее. Из пробирки, с полной ретракцией сгустка, слить или отсосать сыворотку и сравнить ее с плазмой. Сыворотка имеет желтовато-соломенный цвет и более прозрачна, чем плазма.

2 способ получения сыворотки. При выделении из крови фибриногена механическим путем, получают кровь, которая содержит все составные части, кроме белка фибриногена - ДЕФИБРИНИРОВАННУЮ КРОВЬ, т. е. эта кровь, теряет способность к свертыванию. Состав дефибринированной крови (рис.5).

Рис. 5. Состав дефибринированной крови.

1 - сыворотка; 2- слой лейкоцитов; 3- слой эритроцитов.

Получение дефибринированной крови

Дефибринированную кровь разлить в центрифужные пробирки и центрифугировать при 3000 об/мин в течение 10…15 минут. Форменные элементы оседают на дно. Сверху окажется сыворотка. Иногда она приобретает красноватый оттенок, вследствие разрушений эритроцитов из дефибринированной крови.

Получение фибрина

Положить в стеклянную колбочку 10…12 стеклян­ных бусинок и выпустить в нее из сосуда животного 20…30 мл крови. Взбалтывать кровь вращательными движениями в течение 10…15 минут. Фибриноген, выпадающий в осадок в виде волокнистых нитей фибрина, оседает на шариках. Затем профильтровать содержимое колбы через 2 слоя марли. Фильтрат представляет собой дефибринированную кровь, а осевшие на шариках "метелки" - нити фибрина - отмыть от форменных элементов водой. Фибрин имеет вид белого волокнистого вещества.

Работа 3. Определение скорости свёртывания крови

при разных температурных условиях

СВЕРТЫВАНИЕ крови - сложный биологический процесс, протекающий при участии солей кальция, витамина К, ферментов тромбопластина, промбина и других компонентов плазмы (рис. 6).

Нанести по одной капле крови, вытекающей из надрезанного уха животного, на три предметных стекла. Одно стекло поместить в термостат при +40^оС, другое стекло положить на стол (при комнатной температуре), третье - на снег.

Через каждую минуту наклонять стекла с кровью и повторять до тех пор, пока кровь не свернется. Определить скорость свертывания крови у различных животных.

Данные записать в тетрадь, проанализировать.

ВОПРОСЫ:

1. Где, у животных, берут большое и малое количество крови для анализа.

2. Что такое плазма и как ее получить?

3. Дайте понятие сыворотке, какие есть способы ее получения.

4. Что такое дефибринированная кровь и каков ее состав?

5. В чем заключается механизм свертывания крови, и, какие факторы влияют на него?

Рис. 6. Классическая схема свертывания крови Шмидта - Моравица.

ЗАНЯТИЕ 2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЪЕМНОГО СООТНОШЕНИЯ ФОРМЕННЫХ ЭЛЕМЕН­ТОВ И ПЛАЗМЫ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВЯЗКОСТИ КРОВИ. ГЕМОЛИЗ. ОСМОТИЧЕСКАЯ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ (УСТОЙЧИВОСТЬ ЭРИТРОЦИТОВ)

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: Определить соотношение форменных элементов и плазмы в крови животных, вязкость крови, проследить за явлением гемолиза эритроцитов под влиянием повреждающих факторов с разным механизмом действия, определить осмотическую устойчивость эритроцитов разных видов животных.

Работа 1. Определение объёмного соотношения форменных

элементов и плазмы (показатель гематокрита)

Форменные элементы – 35…45%., плазма составляет 60…65% общего объема крови. Это соотношение изменяется в зависимости от вида, возраста, породы животных, функционального состояния, а также при некоторых заболеваниях.

ПОКАЗАТЕЛЬ ГЕМАТОКРИТА – показывает общий объем форменных элементов в 100 объемах крови. Показатель гематокрита используется при вычислении ряда других важных характеристик крови (среднего объема эритроцитов, среднеклеточной концентрации гемоглобина и пр.).

Набрать через узкий конец капиллярной трубочки гематокрита стабилизированную кровь животного. Трубки затянуть резинками и поставить в центрифугу. Центрифугировать 8…10 мин при 3000 об/мин. Извлечь капилляры. Форменные элементы располагаются в одной стороне капилляра, а плазма в другой. По показателям капилляров взять среднее из двух, определить относительный объем форменных элементов и плазмы, выразив их в процентах.